猪圆环病毒2型的分离与鉴定

<正>猪圆环病毒2型(PCV-2)为圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)的成员,为单股环状DNA病毒[1]。PCV-2与以进行性消瘦和多系统病理损伤为特征的断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)密切相关,还与育肥猪皮炎与肾炎综合征(PDNS)、先天性震颤(CT)、新生仔猪腹泻病、猪增生性坏死性肺炎(PDNS)、母猪繁殖障碍等疾病有重要关联。PMWS于1991年在加拿大首次爆发,随后许多     

猪圆环病毒2型的分离与鉴定

利用PCR方法,从疑似断奶猪多系统衰竭综合征(PMWS)的自然病例的淋巴结和脾脏中扩增出了预期长度的猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)的DNA片段,并用限制性内切酶对PCR产物进行了酶切鉴定。将经PCR扩增和酶切鉴定为PCV2阳性的组织样品匀浆液接种到无PCV污染的PK15细胞中传代,经间接免疫荧光检查,在接毒细胞内观察到了特异性免疫荧光;用接毒细胞制备超薄切片,在电镜下观察到了直径大约为17nm的圆形病毒样粒子和大量不同形态的胞浆内包涵体。由此表明分离出的病毒为猪圆环病毒2型。     

猪圆环病毒2型毒株的分离鉴定

猪圆环病毒2型(PCV2)可引起断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、繁殖障碍等相关疾病[1],其中以PMWS最为严重.该病主要侵害6～12周龄仔猪,引起渐进性消瘦、呼吸困难、腹泻和黄疸等,给世界养猪业造成了巨大的经济损失.     

猪圆环病毒2型的分离鉴定及优化培养

为研究圆环病毒病的流行情况及防治奠定基础,从湖北省某些大型养猪场采集临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病死猪的淋巴结、脾等组织病料,进行病毒分离和鉴定。对分离病毒进行了间接免疫荧光鉴定、电子显微镜鉴定、核苷酸序列比对分析及动物感染试验;同时对病毒的培养条件进行优化,用RT-PCR检测感染细胞中的病毒核酸含量。结果表明,从猪病料中分离到1株猪圆环病毒2型(PCV2),命名为PCV2-WH。分离毒株经间接免疫荧光可检测到特异的PCV2荧光斑,电子显微镜下可观察到直径17 nm大小、圆形病毒粒子;利用一对圆环病毒2型ORF2基因引物进行了PCR扩增,将所得序列与GenBank收录的9株圆环病毒2型ORF2基因的核苷酸序列比对,同源性为98.2%～99.9%。非免疫猪接种出现明显的临床症状和病理变化。优化培养的结果显示,细胞与病毒同步接种培养24 h后,用300 mmol/L D-氨基葡萄糖于37℃作用30min后继续培养48 h的病毒滴度最高。本研究为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。     

猪圆环病毒2型流行毒株FF株的分离与鉴定

The materials from the clinical samples of kidney and inguinal lymph nodes characterized by postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) of the pigs,proved to be porcine circovirus type 2 （PCV2） positive samples through the amplification of ORF2 gene of PCV2, were inoculated into the PK-15 cells (PCV1 free) and serially passaged 10 times.Identifications were done by PCR method and immunofluorescent assay of the tenth generation of cell cultures, and the specific band could be amplified and a strong bright green fluorescence in the nucleus of PK-15 cells could be detected.The results demonstrated that the isolated strain named as FF strain belonged to PCV2.     

猪圆环病毒地方株的分离与测定

正猪圆环病毒病(PCVD)是由猪圆环病毒2型(PCV2)引起的猪传染性疾病,该病的主要特征为患猪体质下降、消瘦、贫血、黄疸、生长发育不良、腹泻、呼吸困难和母猪繁殖障碍。猪圆环病毒是目前发现的一种最小的哺乳动物病毒,包括两个血清型,即PCV1和PCV2,其中PCV2有致病性。现有6份临床症状疑似PCVD的病毒料,需要分离病毒,建立PCR及ELISA方法进行检测。     

猪圆环病毒分离鉴定及猪断奶多系统衰弱综合征的诊断

剖检北京、河北某些猪场发生的仔猪先天性震颤、断奶后发育不良、咳喘、消瘦、黄疸等症状的病猪，均显示断奶多系统衰弱综合征（PMWS）的病理学变化；电镜观察病猪的脾和淋巴结组织样品，见细胞核内堆积大量无囊膜的病毒粒子；进而从病猪的病料中分离到2株猪圆环病毒（Porcine circovirus,PVC)，经电镜观察细胞内增殖、浓度、提纯的病毒，为直径约17nm的无囊膜的病毒粒子；间接免疫荧光试验可观察到PCVⅡ特异性免疫荧光，用2对引物分别扩增分离毒株，均得到2条与PCVⅡ特异性核苷酸片段大小一致的扩增片段。     

猪细小病毒的分离与鉴定

自死胎和胎猪中分离的3株病毒均可在胎猪肾或仔猪肾原代细胞上增殖、继代,并可产生细胞病变;能凝集鸡、豚鼠及小白鼠的红细胞;对乙醚、氯仿不敏惑;耐酸(pH3.0)、耐热。病毒颗粒多呈圆形,无囊摸,直径为20～23nm。这些病毒的特性及形态等均酷似猪细小病毒,而且在血清学上与从日本和美国引进的毒株有共同抗原性,故认为分离的3株病毒均系猪细小病毒。     

猪细小病毒的分离与鉴定

本试验从福建省某猪场疑似猪细小病毒病死胎的淋巴结、肝脏中分离到1 株病毒。病料接种PK-15细胞36 h后出现了圆缩、集聚、脱落等细胞病变,猪细小病毒阳性血清能特异性地中和该分离病毒。根据已发表的细小病毒(PPV) VP2基因的序列设计并合成了一对引物,采用PCR方法可扩增531 bp DNA片段。测序结果表明,分离株VP2基因与NCBI公布的NADL-2株的同源性高达99.2％,证实分离的病毒株为猪细小病毒。为进一步开展该病毒致病机理、流行病学、诊断研究与疫苗免疫等奠定了基础。     

猪细小病毒的分离与鉴定

贵州某猪场发生一起以初产母猪产弱仔、死胎、畸形胎、木乃伊胎为特征的疫病,根据病毒的分离与鉴定,确诊此次疫病为猪细小病毒感染所致。     

猪圆环病毒

猪圆环病毒病是近年来备受关注的一种在世界各地广泛存在的慢性疾病,是一系列疾病的总称。自1974年Tischer1等首次发现猪圆环病毒（Porcine circovirus ,PCV）以来,随着对PCV研究的深入,根据猪圆环病毒的致病性及其基因组差异又可将其分为无致病性的猪圆环病毒1型（PCV-1）和有致病性的猪圆环病毒2型（PCV-2）。PCV-1对猪无致病性,但能产生血清抗体,在猪群中普遍存在,接种2日龄与9日龄的猪无临床症状。PCV-2对猪有致病性,主要导致一种以断奶仔猪呼吸急促或困难、腹泻、贫血、明显的淋巴组织病变和进行性消瘦为特征的新的疾病,     

珠三角地区猪圆环病毒2型的分离鉴定及序列分析

为了解珠三角地区猪群中猪圆环病毒2型(PCV-2)的流行变异情况,从2008年-2010年珠三角地区疑似PMWS病死猪组织中分离获得PCV-2流行毒株,用间接免疫荧光方法进行检测和用PCR方法对这些毒株进行全基因扩增及测序分析.结果显示,在接毒细胞内观察到了特异性免疫荧光,8株PCV-2分离株与GenBank中的其他P...     

一株猪圆环病毒2型SY-12株的分离鉴定

从吉林地区一发病猪场采集疑似猪圆环2型病毒病理变化的腹股沟淋巴结,经分子生物学、特异性免疫荧光染色和电镜观察等研究,证明该毒株为PCV2b型强致病性毒株,命名为SY-12株.该分离鉴定为研制猪圆环2型灭活疫苗奠定了基础.     

猪圆环病毒3型的鉴定与遗传特征分析

正荐语:近两年来,猪圆环病毒3型(PCV3)在国内多个学术活动中被多次提及,然而关于PCV3的文献报道却十分有限。PCV3是在具有猪皮炎肾病综合征和繁殖障碍的临床样品中鉴定出的一种新型圆环病毒。为帮助养猪从业者更好地了解PCV3的相关信息,特对下面这篇PCV3相关研究文献进行摘译以飨读者,并期待能有越来越多的相关研究来尽快揭示PCV3流行病学信息及遗传特征。     

猪圆环病毒2b亚型的分离鉴定及基因组序列分析

为分离鉴定流行于重庆某猪场的猪圆环病毒2型,本研究从断奶仔猪多系统衰竭综合征猪的淋巴结病料中进行病毒学检测,病毒利用PK-15细胞增殖,其基因组序列经克隆、测序、拼接获得,并完成对全序列的生物信息学分析鉴定。结果获得了1株猪圆环病毒2型(命名PCV-2CQ1),该毒株的全序列大小为1 767bp,同源性分析发现该病毒与国内公布的PCV-2毒株同源性超过了90%,尤其与广西分离株同源性达100%;系统进化分析本分离病毒与浙江株(EU257511)、黑龙江株(HM038032)聚类到一起,形成一个进化分支,同属于PCV-2b型;对编码的衣壳蛋白分析发现,PCV-2CQ1Cap氨基酸发生了较大变异,与强毒株同源性较高,考虑到本病毒源自PMWS病猪,推测该毒株属于强毒株。     

猪传染性胃肠炎病毒的分离与鉴定

将经胶体金试纸条和RT-PCR鉴定为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性的内蒙古某猪场的粪便样品,经ST细胞分离培养后,得到一株能产生明显细胞病变的毒株。纯净性检测结果显示,该毒株无细菌生长,无支原体及无外源病毒污染。特异性检测结果表明:该分离株能被TGEV特异性阳性血清中和,且能被TGEV FA荧光抗体识别。采用TGEV N基因特异性引物,经RT-PCR可扩增出1215 bp特异性片段,将该片段测序后与GenBank中已发表的13株TGEV N基因的序列进行同源性比较,同源性为98.1%~100%,其中与我国分离的H16、JS2012以及Miller M6毒株同源性关系最近,均为100%。结果表明,分离到的毒株为TGEV,命名为TGEV NMG株。     

四川猪细小病毒的分离与鉴定

本文为1982—1984年在四川秋季初产母猪死胎内分离的猪细小病毒(PPV)3株(SR-1、SR-2及SR-3),能在原代猪肾单层细胞上生长,引起细胞病变(CPE)。电镜观察病毒粒子多呈圆形或近似六角形,无囊膜,直径大小为20—22nm,个别最大直径为25nm。核酸类型为DNA。耐热、耐酸、能抵抗乙醚和胰蛋白酶。细胞培养能产生血凝素,能很好地凝集豚鼠红细胞。三株病毒均能与PPVMu-1毒株和阳性血清产生交互凝集抑制。PPV在四川猪内存在较广,是引起秋季初产母猪死胎的重要原因之一。