上海市活禽交易市场鸡群沙门氏菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解上海市活禽交易市场鸡群中沙门氏菌的携带情况,我们于2016年对市区的8个活禽交易场所进行了调查。共采集肛门拭子500份,分离培养沙门氏菌,运用诊断血清、VITEK 2Compact和VITEK MS分别对分离菌株进行血清型、生化和质谱鉴定,使用PCR和药敏板分别对分离菌株的耐药基因和耐药性进行检测。结果显示:从500份肛门拭子中分离鉴定出28株沙门氏菌,分离率为5.6%,以肠炎沙门氏菌、印第安纳沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌为主,说明在市场交易环节应当加强对沙门氏菌的防控;耐药基因检出率较低,仅有喹诺酮类和磺胺类抗生素耐药基因有检出,分别为21.4%和7.1%,I类整合酶基因检出率达到28.6%;从耐药性检测结果看,分离菌株对磺胺类抗生素、头孢噻肟和庆大霉素的耐药率达到50%以上,对环丙沙星、美罗培南、萘啶酸、头孢他啶和氨苄西林的耐药率在40%以下,这些药可用于鸡群沙门氏菌的防控;耐药基因和耐药性之间无明显相关性。     

猪肉生产链细菌耐药性及其耐药基因调查研究

本试验旨在研究猪肉生产链中常见细菌的耐药性、耐药基因及其传递性。以养殖场、屠宰场、农贸市场的环境及猪肉中常见细菌(大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌)为对象,利用药敏纸片法检测细菌对常用的5大类17种抗生素的耐药性,用PCR鉴定9种耐药基因的存在。研究发现,生产链中分离的细菌对5类17种常见抗生素均产生了不同程度的耐药性,其中对苯唑西林、四环素、甲氧苄啶等耐药性较高,对丁胺卡那霉素耐药性最低。9种耐药基因均有检出,bla TEM、aac6'-Ⅰb、tet B、tet C的检出率较高,与药敏试验的结果基本一致。耐药基因检出率屠宰加工厂养殖场农贸市场,耐药株可能具有传递性,为进一步研究打下基础。因此,猪肉生产链中存在致病菌甚至一些非致病菌株对常用抗生素耐药的污染和威胁,需定期加强调查监测,科学使用抗生素,防止耐药菌株的传播。     

肉鸡屠宰生产链中的沙门氏菌耐药基因检测及耐药相关性分析

[目的 ]了解肉鸡屠宰生产链中的沙门氏茵耐药性与耐药基因的相关性。[方法 ]采用微量肉汤稀释法测定最小抑菌浓度(MIC),对从肉鸡屠宰生产链中分离鉴定的233株沙门氏菌进行13种抗生素药敏实验;采用PCR方法检测15种耐药基因。[结果 ]233株肉鸡屠宰生产链中的沙门氏菌对庆大霉素的耐药率最高(100%);对多西环素、氨苄西林、大观霉素、四环素、氟苯尼考、磺胺甲恶唑耐药率分别为84.94%、75.73%、67.78%、56%、52%、50%。233株沙门氏菌中,有231株至少含有1种耐药基因,其中blatem、bla CMY-1、tet B、tet G、tet X、aad A1和cat1基因检出率分别为80.26%、57.94%、54.94%、65.67%、58.37%、63.52%和72.53%。72%的菌株表现为多重耐药,共计57种耐药谱型。[结论 ]肉鸡屠宰生产链中的沙门氏菌对常见抗生素具有不同程度的耐药性,且耐药基因普遍存在于耐药菌株中;药敏实验结果与耐药基因检测结果有很高的一致性。     

猪沙门氏菌耐药性的研究进展

近年来,由于各种抗生素在兽医学上的广泛使用,造成猪沙门氏菌耐药菌株的不断出现,导致部分兽药对该病的治疗效果不理想,而且猪沙门氏菌还发生了多重耐药性,它可能会通过猪肉传播给人.大量耐药菌株的存在和流行,使得本病的发病率和死亡率都不断上升,本文主要通过对猪沙门氏菌耐药性的情况,包括耐药性的现状、产生耐药性的原因、产生耐药性的机理及相关耐药基因的研究、耐药性的检测、控制耐药菌株产生的方法等进行阐述,为猪沙门氏菌病的防治提供一定的参考.     

整合子与大肠埃希菌多重耐药的关系

大肠埃希菌是一种重要的人畜共患病病原菌。目前由于在食用动物中使用抗生素造成沙门氏菌多重耐药性增加,耐药菌可通过被污染的食品或直接与动物接触而使人感染,细菌多重耐药性通常是通过获得耐药基因引起的,而染色体基因突变只占很小部分。耐药基因可通过转化、     

新生猪源沙门氏菌耐药性及耐药基因的研究

目的:研究新生猪源沙门氏菌耐药性及耐药基因。方法:选用改良肉汤半固体培养基、XL74培养基,从150份新生猪源猪肉标本中初筛可疑沙门氏菌,以PCR鉴定沙门氏菌。以K-B法测定新生猪源沙门氏菌的耐药性,并采用PCR扩增技术检测耐药基因。结果:共鉴定出21株新生猪源沙门氏菌,对氯霉素和庆大霉素的敏感性较高,对环丙沙星和链霉素表现为高耐药,耐药基因共5种。结论:新生猪源沙门氏菌耐药现象较为严重。     

抗生素压力下不同血清型沙门氏菌耐药性研究

本研究旨在探讨不同血清型沙门氏菌在环丙沙星抗生素压力下突变频率及在耐药发展过程中靶位基因突变、外排泵及调控基因表达的差异。选取临床分离的印第安纳型、肠炎型和鼠伤寒型沙门氏菌的敏感菌株,在环丙沙星压力下诱导耐药突变,分别获得一系列不同程度的耐药突变株。分别检测不同血清型沙门氏菌突变株的突变频率、靶位基因喹诺酮耐药决定区(QRDRs)和外排泵调控基因ramR-ramA突变及外排泵相关基因的表达水平;同时检测了母株在羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)存在情况下环丙沙星药物的蓄积浓度,以确定母株是否存在外排泵的作用。结果表明,在环丙沙星压力下,印第安纳型沙门氏菌较肠炎型和鼠伤寒型有更高的突变频率,易获得耐药株;印第安纳血清型菌株耐药性的获得主要是由于靶位基因gyrA发生单突变,协同外排泵外排作用增强而获得高水平耐药;肠炎型沙门氏菌耐药性获得主要是由于靶位基因gyrA发生83和87位双位点突变,并随着gyrB和parC基因的多位点同时突变而获得高水平耐药,耐药性的发展过程中没有外排泵作用参与;而鼠伤寒沙门氏菌在抗生素压力下不易发展成耐药菌,耐药性发生主要是由于靶位基因gyrB发生突变,而伴随parC基因突变及微弱的外排泵作用导致耐药水平增加。     

长春市市售猪肉鸡肉中金黄色葡萄菌和沙门氏菌分离及耐药性分析

对肉品中金黄色葡萄球菌及沙门氏菌进行耐药分析,以期为其风险评估提供依据。采集吉林省长春市市售猪肉、鸡肉样品,按照国标方法分离金黄色葡萄球菌、沙门氏菌,利用K-B法药敏试验检测金黄色葡萄球菌和沙门氏菌对头孢噻肟钠、左旋氧氟沙星、庆大霉素、四环素4种抗生素的耐药性。结果显示：共分离出金黄色葡萄球菌46株,检出率为46％;沙门氏菌48株,检出率为16．84％。金黄色葡萄球菌对4种抗生素的耐药率在0～56．52％之间,共产生6种耐药谱。沙门氏菌对4种抗生素的耐药率在16．67％～87．5％之间,共产生9种耐药谱。长春市肉品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌耐药现象普遍。     

贵州省猪源沙门氏菌对β-内酰胺类药耐药性及耐药基因分析

为了解贵州省猪源沙门氏菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药性及其耐药基因的流行情况,本试验从贵州省9个地区规模养猪场中分离鉴定130株沙门氏菌,采用微量肉汤稀释法测定其对常用的8种β-内酰胺类抗菌药物的敏感性,并用PCR法对β-内酰胺酶耐药基因进行检测。结果显示,沙门氏菌对常用的β-内酰胺类抗菌药物耐药性十分严重,其中对头孢他啶的耐药率为100%,其次是氨苄西林和阿莫西林,耐药率分别为80.77%和76.15%,耐药率最低的是头孢噻呋和头孢氨苄,均为46.15%。所有菌株均为多重耐药,其中最少为二重,占总数的2.31%,最多为八重,占总数的4.62%,多重耐药主要集中在四至七重,占总数的88.46%。PCR结果显示,SHV耐药基因未检出,TEM、OXA、CTX-M 3种基因检出率分别是85%、75%和46%,细菌的耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关。结果表明,猪源沙门氏菌对β-内酰胺类药物具有普遍耐药性,其中头孢他啶尤为严重。TEM、OXA、CTX-M基因是贵州省猪源沙门氏菌主要耐药基因,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有很大的关系。     

不同来源沙门氏菌的毒力基因检测与耐药性分析

[目的]了解不同畜禽中沙门氏菌的携带状况及其毒力和耐药性,为动物源沙门氏菌的流行病学分析和防控提供数据和依据。[方法]从山东、吉林、江西、新疆和云南等地区采集样本,用国标法分离鉴定沙门氏菌,用沙门氏菌血清型试剂盒检测血清型,用PCR方法检测毒力基因,最后用微量肉汤稀释法(MIC)对分离菌株进行耐药性分析。[结果]健康畜禽和发病畜禽样本中的沙门氏菌分离率分别为20.67%(141/682)、6.13%(45/734)。发现4种沙门氏菌优势血清型,分别为德尔卑(42.6%)、印第安纳(26.2%)、肠炎(17.7%)和汤普森(17%)。对分离菌株进行毒力基因分析,检测SPI-1~SPI-5上的5个核心蛋白基因和spv A、B、C、D和R毒力质粒基因,其中健康畜禽样本中沙门氏菌毒力岛上的基因携带率与发病畜禽样本中的携带率基本一致,但发病畜禽中的菌株毒力质粒基因携带率明显高于健康畜禽。耐药性检测结果表明,除多西环素和庆大霉素外,发病动物中的沙门氏菌对抗生素的耐药率均比健康动物中的高。猪源与鸡源沙门氏菌对庆大霉素、头孢噻呋、氧氟沙星、粘杆菌素的耐药率差异显著,对其他抗菌药物略有差异,但不显著。健康畜禽中的多数沙门氏菌株耐药1~2种,占分离菌株总数的55.32%;发病畜禽中耐药10种以上的沙门氏菌占分离株总数的44.44%。[结论]发病畜禽中的沙门氏菌分离率比健康畜禽中的低,但其毒力质粒基因的携带率较健康畜禽中的高,且耐药情况较严重,多重耐药率高。该分析结果可为沙门氏菌的危害评估和防控措施制定提供依据。     

贵州省猪源沙门氏菌对β-内酰胺类药耐药性及耐药基因分析

为了解贵州省猪源沙门氏菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药性及其耐药基因的流行情况,本试验从贵州省9个地区规模养猪场中分离鉴定130株沙门氏菌,采用微量肉汤稀释法测定其对常用的8种β-内酰胺类抗菌药物的敏感性,并用PCR法对β-内酰胺酶耐药基因进行检测。结果显示,沙门氏菌对常用的β-内酰胺类抗菌药物耐药性十分严重,其中对头孢他啶的耐药率为100%,其次是氨苄西林和阿莫西林,耐药率分别为80.77%和76.15%,耐药率最低的是头孢噻呋和头孢氨苄,均为46.15%。所有菌株均为多重耐药,其中最少为二重,占总数的2.31%,最多为八重,占总数的4.62%,多重耐药主要集中在四至七重,占总数的88.46%。PCR结果显示,SHV耐药基因未检出,TEM、OXA、CTX-M 3种基因检出率分别是85%、75%和46%,细菌的耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关。结果表明,猪源沙门氏菌对β-内酰胺类药物具有普遍耐药性,其中头孢他啶尤为严重。TEM、OXA、CTX-M基因是贵州省猪源沙门氏菌主要耐药基因,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有很大的关系。     

动物源性沙门氏菌的耐药性分析及氟苯尼考类耐药基因的鉴定

为了解动物沙门氏菌的流行情况和药物敏感性及氟苯尼考耐药株的耐药基因分布,本试验对临床上疑似患沙门氏菌病的病料进行病原分离和细菌的多重PCR鉴定;采用K-B法测定分离株对23种抗菌药物的敏感性;选择氟苯尼考耐药菌株扩增floR、fexA、fexB、cfr和pexA基因。结果显示,共鉴定出61株沙门氏菌,其中肠炎沙门氏菌10株,鸡白痢沙门氏菌12株,鼠伤寒沙门氏菌39株。所有菌株对青霉素、红霉素、万古霉素耐药,90.16%对6种及6种以上抗菌药耐药。floR基因广泛存在于鼠伤寒沙门氏菌氟苯尼考耐药菌株中(8/12,66.67%),未发现其他耐药基因。研究结果表明鼠伤寒沙门氏菌是鹅源分离株中的优势血清型;floR基因主要介导沙门氏菌对氟苯尼考耐药性,但可能还存在其他机制。     

临床3种常见病原菌的耐药性分析

为了解临床常用抗生素的耐药性,通过K-8纸片法,进行3种病原菌对13种常用抗生素的敏感性测定,并选用微量稀释法测定其最小抑菌浓度(MIC),进而分析3种病原菌对13种抗生素的耐药性.试验结果表明,大肠杆菌对青霉素、诺氟沙星耐药率最高达100％,对乙酰甲喹耐药率最低为10％;沙门氏菌对青霉素耐药率最高达100％,对氟苯尼考耐药率最低为12.5％;链球菌对红霉素耐药率最高达100％,对头孢噻吩耐药率最低为11.1％.     

食品动物源沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测与分析

为了解食品动物源沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药性(Plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR),采用微量肉汤稀释法和PCR方法,检测了316株食品动物源沙门氏菌对20种抗菌药物的敏感性,以及菌株中PMQR基因的携带率.结果显示:316株沙门氏菌对20种抗菌药物呈不同程度的耐药性,95.57％菌株为多重耐药菌;316株菌中未检出qnrA、qnrC、qnrD、qnrS和qepA基因,7.91％菌株检出qnrB基因,15.19％菌株检出aac(6 ′ )-Ib-cr基因,7.91％菌株检出oqxA基因,8.86％菌株检出oqxB基因,这是首次在沙门氏菌中发现oqxAB基因;98.11％PMQR阳性菌同时携带2种及以上的耐药基因,呈8～17耐的多重耐药性,其中以qnrB和aac(6′)-Ibcr基因型为主;53株PMQR阳性菌分属于5种不同的基因型,耐药表型或耐药基因型不同的菌株却有相同的PFGE谱型.本次检测的316株食品动物源沙门氏菌耐药较为严重;菌株主要携带qnrB、aac(6 ′ )-Ib-cr及oqxAB基因;不同来源菌株存在同一耐药克隆株的流行.     

规模化猪场猪源沙门氏菌的耐药性及相关耐药基因检测

为了解贵州省某规模化猪场猪源沙门氏菌分离株的药物敏感性和耐药基因的存在情况,也为进一步研究细菌耐药的分子机制和临床用药提供资料,利用K-B法检测了6株猪源沙门氏菌对15种药物的敏感性,采用PCR方法检测了9种常见耐药基因在分离株中的分布情况。结果显示,所有菌株对青霉素、氨苄西林和吡哌酸的耐药率最高均为100%,对头孢克洛、链霉素和庆大霉素的耐药率最低。从9种常见耐药基因中扩增到3种β-内酰胺类耐药、3种氨基糖苷类、2种氟喹诺酮耐药基因。研究表明,沙门氏菌极易产生耐药性,耐药基因广泛存在于耐药菌株中,但耐药表型与耐药基因之间无绝对相关性。     

鸡源性沙门氏菌耐药基因检测与耐药相关性分析

为研究沙门氏菌耐药基因与其耐药性之间的关系,本研究以K-B纸片法对临床分离的29株鸡源性沙门氏菌进行10种抗菌药物敏感性测定,应用PCR技术进行这些抗菌药物相关耐药基因检测.并通过质粒接合试验证明了耐药性及耐药基因的转移.结果显示:29株分离株对氨苄西林耐药率为31.0％,对头孢唑啉耐药率为10.3％,对四环素耐药率为44.8％,对复合磺胺耐药率为41.4％,对氯霉素耐药率为3.4％,对环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星的耐药率均为37.9％,但对庆大霉素和卡那霉素均敏感.本实验共检测到8种耐药基因,其中blatem-1阳性率为31.0％,tetA和tetB阳性率为44.8％,sull和sul2阳性率为41.3％,aadAl阳性率为3.4％,dfrA1阳性率为10.3％,qnr阳性率为37.9％,而tetG、blaCMY-2和catI均未检出.此外,通过与非耐药菌接合后绝大部分接合子均获得了供体菌质粒编码的相应抗性表型,耐药基因在接合过程也发生了转移,赋予被接合细菌新的耐药性.以上结果表明沙门氏菌的耐药性与其相关耐药基因的检出率基本一致,而且耐药性通过质粒进行转移.     

内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌耐药性分析及ESBLs基因检测

为研究内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌的耐药特性及ESBLs基因流行特征,试验采用微量肉汤稀释法测定了22种兽医临床常用抗菌药物对临床分离沙门氏菌的最低抑菌浓度(MICs),并对其多重耐药特性进行了分析;采用PCR法对具有β-内酰胺类药物耐药表型的菌株进行了8种动物源沙门氏菌常见ESBLs基因的检测。结果显示,内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌对甲氧苄啶(97.4%)及磺胺甲基噁唑(94.7%)的耐药率最高,对多数β-内酰胺类、氨基糖甙类、氯霉素类及四环素类药物的耐药性也较为严重(耐药率为40%~80%),所有菌株对氟喹诺酮类药物均敏感;菌株的多重耐药率为94.7%,有29株菌(76.3%)同时对6类抗菌药物具有耐药性;35株对β-内酰胺类药物耐药的菌株中,有30株(85.7%)为ESBLs基因阳性,共检出6种ESBLs基因,其中CTX-M型基因检出率最高(40.0%),未检出SHV和PSE型基因;共发现15种ESBLs基因型,9种ESBLs基因型组合,有16株菌(45.7%)同时携带两种或两种以上ESBLs基因。结果表明,内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌对兽医临床常用抗菌药物的耐药性较为严重,且ESBLs基因的流行模式较为复杂,提示兽医临床抗菌药物不合理使用可能是造成该地区奶牛源沙门氏菌耐药性产生的原因。     

一株食源性伤寒沙门氏菌的多重耐药性分析与小鼠致病性研究

为研究从山东省某肉鸭屠宰场分离到的一株伤寒沙门氏菌的耐药性和对小鼠的致病性,从而了解其对食品安全和人类健康的危害,使用纸片扩散法测定该分离株的药敏性;设计22对耐药基因和I类整合子保守区的引物,对其耐药基因和I类整合子进行检测和分析;利用Balb/c小鼠,腹腔注射该分离株菌液,研究其对小鼠的致病性。结果显示:该伤寒沙门氏菌分离株对9大类20种抗菌药中的16种都产生了较强的耐药性,PCR扩增测序结果与抗生素敏感性表型一致;该菌可引起试验小鼠剧烈腹泻,直至死亡。结果表明,该分离株耐药严重,且对小鼠具有很强的致病性,存在影响食品安全和人类健康的潜在威胁。     

四川省动物性食品源沙门氏菌的耐药性监测与分析

近年食源致病菌耐药性较严重,为了解四川省动物性食品源沙门氏菌（Salmonella spp.）耐药情况,本试验采用肉汤微量稀释法,对源自四川省动物性食品的76株沙门氏菌进行了25种抗生素(组合)的敏感性试验。结果表明76株沙门氏菌对利福平（96.05%）、黏菌素（78.95%）、磺胺异噁唑（64.47%）、先锋唑啉（60.53%）、氨苄西林（60.53%）、阿莫西林—克拉维酸（56.58%）、甲氧苄啶（53.95%）及强力霉素（52.63%）耐药率较高。76株沙门氏菌对25种抗生素（组合）共产生了66种耐药谱,多重耐药率达97.37%（74/76）,主要对青霉素类、先锋唑啉、链霉素、四环素类、磺胺类药物及黏菌素表现出多重耐药。结果表明,四川地区食源沙门氏菌耐药性已较为严重,应加强连续监测。     

狐源沙门氏菌的致病性及耐药性试验

为了解秦皇地区狐源沙门氏菌的致病性及耐药性,对23株秦皇地区的狐源沙门氏菌进行了研究。采用小鼠致病性试验、PCR检测毒力基因和KB纸片检测药物敏感性。结果显示,3株沙门氏菌均可致小鼠死亡,死亡率为20%～100%;23株沙门氏菌中有21株检测到毒力基因,分别检出2个～8个毒力基因,毒力基因sseC和sseL未检出,其余17种基因检出率为4.35%～65.22%,spvA、hisJ和stn基因检出率较高;23株沙门氏菌对6种～15种抗菌药物耐药,对14种抗菌药物耐药菌株数最多,占比26.09%(6/23),23株沙门氏菌对土霉素、替米考星和复方新诺明耐药率高达100%,对阿米卡星敏感率最高为30.43%(7/23)。结果表明,23株狐源沙门氏菌均具有致病性,并均携带多个毒力基因,耐药情况较为严重。