黄色链霉菌TRM45540遗传转化系统的构建

黄色链霉菌(Streptomyces luteus)TRM45540是分离自新疆罗布泊土壤的高产放线菌素D的链霉菌新物种,为了深入挖掘其基因功能和代谢活性,需要建立该菌株的遗传转化系统.本研究以整合型载体pSET152和自杀型载体pKC1139为出发质粒,ET12567(pUZ8002)为供体菌,TRM45540为受体...     

链霉菌TRM SA0054 Tubercidin 合成基因簇挖掘

【目的】评估菌株TRM SA0054的代谢潜力,解析其基因组信息研究该菌株次级代谢产物基因资源。【方法】采用Illumina Hiseq测序平台对菌株TRM SA0054进行全基因组测序,并进行生物信息学分析,采用现代分离纯化方法检测鉴定其代谢产物。【结果】菌株TRM SA0054基因组大小为7.2 Mb,共有6 410个蛋白编码基因,GC含量为73.16%;预测到26个次级代谢基因簇,其中Region 36.1基因簇与Tubercidin(杀结核菌素)基因簇相似性为81%,菌株TRM SA0054发酵能够产生Tubercidin。【结论】基于基因组挖掘和LC-MS检测验证菌株TRM SA0054具有产生Tubercidin的能力。     

两株放线菌次生代谢产物的分离和鉴定

通过对两株放线菌的菌落形态特征、培养特征及16S rDNA序列分析,将菌株TRM 46399、TRM 44550分别鉴定为Streptomyces xinghaiensis S187(T)(相似度为98.16%)和Streptomyces enissocaesilis(相似度为100%)。链霉菌TRM46399和TRM44550的发酵产物经D101大孔树脂富集,硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等方法进行分离,得到三个单体化合物;利用~1H NMR和~(13)C NMR数据解析,分别鉴定为染料木素、β-腺苷和大豆苷元。     

新疆荒漠盐碱环境中抗动物病原菌的放线菌筛选与鉴定

【目的】从新疆荒漠地区特殊生境中,分离筛选对动物病原菌具有较高抑制活性的放线菌。【方法】采用皿内琼脂块法和发酵液滤纸片法,对新疆荒漠盐碱土环境中分离到的412株放线菌的拮抗性进行筛选,并对其中拮抗活性高的菌株进行形态特征、培养特征、生理生化特性及16SrRNA序列的分析鉴定,初步确定其分类地位。【结果】筛选结果显示:新疆地区荒漠土中39.6%的放线菌对所选的8种病原菌有拮抗作用,且随着靶标菌数的增加,拮抗比例减小;供试菌对革兰氏阳性菌的拮抗效果优于革兰氏阴性菌,对牛无乳链球菌Ⅰ、Ⅱ和猪金黄色葡萄球菌Ⅰ、Ⅱ的抑菌效果平均为26.0%和22.3%。通过初筛和复筛得到10株抑菌效果较好的拮抗性放线菌,经多相分类鉴定确定为链霉菌属的不同种,具体分类地位如下:XJ 6-2菌株为天蓝褐链霉菌(Streptomyces coeruleofuscus),XJ 1-5-10菌株为粪生链霉菌(Streptomyces fimicarius),XJ 2-9菌株为灰平链霉菌(Streptomyces griseoplanus),XJ 2-5-1菌株为弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae),XJ 19-11菌株为变异链霉菌(Streptomyces variabilis),XJ 1202菌株为苍黄链霉菌(Streptomyces luridus),XJ 1625菌株为微黄绿链霉菌(Streptomyces flavidovirens),XJ 2-9-7菌株为库尔萨诺夫链霉菌(Streptomyces kurssanovii),XJ 617菌株为堆孢链霉菌(Streptomyces massasporeus),而XJ 1-6-5菌株的序列相似度在98%以下,可能为潜在新种,需要进一步鉴定。【结论】新疆地区荒漠土中存在大量拮抗性放线菌,并且获得了10株对动物病原菌有较高抑制活性的放线菌。     

塔里木河淤泥小单孢菌抗生素合成基因筛选及抑菌活性初探

本研究以分离自塔里木河淤泥的31株小单孢菌（分属于14个种）为研究对象，检测菌株所具有的大环内酯类抗生素、安莎类抗生素合成过程中的关键酶基因；选用4种培养基进行小单孢菌小量发酵，经80%甲醇萃取，浓缩发酵液；以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌以及解淀粉欧文氏菌为靶标菌，采用滤纸片法进行抑菌活性检测；对具有抑菌活性的菌株发酵产物做高效液相色谱(HPLC)检测分析。结果表明31株小单孢菌中24株含有PKS-I基因，15株含有AHBA基因；对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌以及解淀粉欧文氏菌有拮抗活性的分别有3株、3株、6株以及14株菌；13株菌同时具有抗生素合成关键酶基因和抑菌活性。青铜小单孢菌（TRM99160）、土壤小单孢菌（TRM99303）、绛红产色小单孢菌（TRM99166）和碳样小单孢菌（TRM99551）菌株的发酵产物具有广谱抑菌活性，可用于深入挖掘次级代谢产物。综上，塔里木河淤泥小单孢菌具有拮抗多种病原菌活性及抗生素生物合成潜力，值得深入挖掘次级代谢产物。     

一株菌的聚酮合成酶基因验证及其鉴定

采用土壤微生物稀释平板法分离技术,从烟草根际土壤分离到一株活体纯培养物,将其编号为ZMD1。ZMD1菌株与2种病原的拮抗试验均显示出一定的抗菌活性;通过聚酮合成酶(PKS)基因的兼并引物对ZMD1进行了克隆验证,测序结果与其他物种的PKS基因序列具有较高的相似性,故将ZMD1初步定性为产聚酮合成酶活性菌株。综合ZMD1菌株的一般形态特征、生理生化特征和菌株的16S rDNA保守序列特征分析,初步将ZMD1确定为链霉菌属(Streptomyces)菌株,暂命名为Streptomyces sp.ZMD1。ZMD1可作为烟草病害生防菌剂、土壤保育菌剂和专用菌肥等开发的良好备用材料。     

链霉菌TRM 44001中拒霉素分离鉴定及其对表皮葡萄球菌的抑菌作用

[目的]从一株对表皮葡萄球菌有拮抗活性的放线菌中寻找具有奶牛乳房炎防治潜力的抗生素.[方法]对菌株TRM 44001进行16S rRNA鉴定,硅胶柱层析及制备薄层层析法分离该菌的次生代谢产物,活性追踪获得活性化合物,采用1 H NMR、13C NMR谱并结合二维谱解析化合物结构,检测化合物对表皮葡萄球菌抑菌活性,采用流式细胞仪分析化合物对表皮葡萄球菌细胞膜通透性的影响.[结果]经16S rRNA序列对比分析,鉴定TRM 44001为暗红灰链霉菌(Streptomyces erythrogriseus).从该菌的发酵液中分离到2个化合物,分别鉴定为拒霉素(resistomycin,1)和特曲霉素D(tetracenomycin D,2).拒霉素对表皮葡萄球菌有较强抑制作用,最低抑菌浓度为2.0 μg/mL;流式细胞仪分析结果表明拒霉素可以增大表皮葡萄球菌的细胞膜通透性,并呈明显的量效关系.[结论]从暗红灰链霉菌(S.erythrogriseus)发酵液中分离鉴定拒霉素,拒霉素通过增大表皮葡萄球菌细胞膜的通透性起到抑菌作用.     

抗茄链格孢菌放线菌的筛选及鉴定

以茄链格孢菌为靶标菌,采用平板对峙法和生长速率法对分离自药用植物的221株放线菌进行筛选,通过生理生化特征、培养特征、形态特征和基于16S rRNA基因序列的相似性分析对活性菌株的种属进行了鉴定。结果表明,抑菌率75%以上放线菌有3株,其中菌株3150被鉴定为环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)的一个菌株,菌株3679被鉴定为氢化链霉菌(Streptomyces hydrogenans)的一个菌株,菌株4536被鉴定为链霉菌属(Streptomyces sp.)菌株。薄层色谱分析结果显示菌株3679代谢产物丰富且分离度好,进一步分离可望得到具有较好生防作用的化合物。     

小麦赤霉病拮抗菌的筛选及应用

为了探索生物防治赤霉病的方法,本试验利用稀释涂布平板法、平板对峙法从多种植物体内及其土壤中分离、筛选抗小麦赤霉病的拮抗菌,并在盆栽和大田条件下研究拮抗菌对小麦赤霉病的防治效果。研究结果显示:分离获得了300株菌株,其中30株菌株对禾谷镰刀菌有明显的抑制作用,菌株NS-QCT的抑菌活性最强。对NS-QCT菌株PCR扩增获得的16S rDNA基因进行测序、比对,发现NS-QCT菌株与Streptomyces malaysiensisMJM1968菌株相似性为99%,表明其应该是一株链霉菌(S.malaysiensis)。盆栽和田间试验结果表明,NS-QCT菌株对小麦赤霉病有一定的抑制作用。     

陕西及宁夏盐渍土中拮抗放线菌资源研究

以分离自盐渍土中的放线菌作为供试菌株,以养殖业中常见的9种动物病原菌作为靶标菌进行拮抗放线菌研究,并对4株优良拮抗菌株进行初步鉴定。结果表明,供试的1 172株放线菌主要以链霉菌属为主,占到88.82%,有拮抗活性的菌株551株,占到47.01%;供试放线菌对不同靶标菌的抑菌作用差异较大,对金黄色球菌和无乳链球菌拮抗效果较好;菌株01F10为白孢类群,与Streptomyces qinglanensis亲缘关系最近,序列相似度为99.11%;菌株02H13和14H03为粉红孢类群,与Streptomyces gobitricini序列相似度达到100%;菌株07F10为灰褐类群,与Streptomyces sparsus亲缘关系最近,序列相似度为99.69%。     

罗中链霉菌耐碱菌株一新亚种的多相分类及基因组分析

耐碱微生物是新天然产物的重要来源,TRM49041是从新疆罗布泊地区渠沟沉积物中分离的一株耐碱菌株,可在pH8～10环境下正常生长。为探究该菌株分类学地位及代谢潜能,本研究从菌株形态特征、基因型特征、生理生化特征以及化学特征等方面对其进行鉴定,同时,对该菌株进行全基因组测序及分析。结果表明其具有链霉菌的典型特征,与罗中链霉菌相似,但又有明显区别,根据其特性确定为罗中链霉菌的新亚种,命名为罗中链霉菌耐碱亚种(Streptomyces luozhongensis subsp.alkalitolerant);其基因组全长为7 019 135 bp,共编码6 212个基因,GC含量为73.99%;通过antiSMASH预测分析,发现其中存在27个潜在的次级代谢产物生物合成基因簇,具有产生链霉素、衣霉素、星孢菌素、Ikarugamycin、JBIR-126和尼日利亚菌素的潜力,是一株新型化合物挖掘的候选菌株。菌株的鉴定及基因组分析为丰富物种资源库及次级代谢产物的深度挖掘奠定了理论基础。     

农抗链霉菌BMIO菌株的初步研究

[目的]开发农用抗生素新品种.[方法]对该实验室2005年从海南霸王岭原始森林土壤中分离筛选获得的BM10生防菌株进行分类鉴定,并测定其抑菌活性.[结果]链霉菌BM10菌株的孢子丝形态、生理生化特性和细胞壁化学组分与Streptomyces albogriseus基本一致,但在菌落颜色、产黑色素和棉子糖利用等方面存在不同.BM10菌株与Streptomyces albogriseus的16SrDNA序列同源性为99.67%.[结论]初步判定BM10菌株为白浅灰链霉菌的新菌株.     

北极海洋沉积物中放线菌多样性及抑菌活性筛选

采用平板涂布法利用6种培养基从北极海洋沉积物中共分离出109株放线菌。选取34株代表菌株进行16S rDNA测序分析。结果表明,它们分属于链霉菌属(Streptomyces)、假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)和拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis),其中Streptomyces为优势菌属;不同采样点获得放线菌的种类和数量有较大不同,站位点P37分离到的放线菌数量和种类最多;在109株放线菌中,有39株对病原菌有抑菌活性,其中有21株、11株和17株放线菌分别对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生长有抑制作用。     

链霉菌Streptomyces tz92发酵液的抗真菌谱及稳定性

研究了链霉菌Streptomyces tz92发酵液的抗真菌谱及稳定性.结果表明,菌株Streptomyces tz92发酵液对水稻纹枯病菌、番茄灰霉病菌等31种植物病原真菌的抑菌圈直径在20mm以上,其中对水稻纹枯病菌的抑菌效果最好.抑菌圈直径达52.45 mm;发酵液中的抗菌物质对温度变化、光照、紫外光以及在碱性条件下都比较稳定,但在强酸环境中不稳定;菌株Streptomyces tz92连续传接10代,抑菌活性仍然稳定.     

农抗链霉菌BM10菌株的初步研究

[目的]开发农用抗生素新品种。[方法]对该实验室2005年从海南霸王岭原始森林土壤中分离筛选获得的BM10生防菌株进行分类鉴定,并测定其抑菌活性。[结果]链霉菌BM10菌株的孢子丝形态、生理生化特性和细胞壁化学组分与Streptomyces albogriseus基本一致,但在菌落颜色、产黑色素和棉子糖利用等方面存在不同。BM10菌株与Streptomyces albogriseus的16SrDNA序列同源性为99.67%。[结论]初步判定BM10菌株为白浅灰链霉菌的新菌株。     

TRM43355放线菌中蛋白对白色念珠菌生物膜形成的影响

白色念珠菌是条件致病菌,形成生物膜后耐药性增加,从放线菌次级代谢产物中获得能抑制生物膜形成的蛋白有一定应用前景。采用硫酸铵盐析法提取发酵液中的粗蛋白;微孔板半定量法检测菌株TRM43355发酵液粗提物、粗蛋白及不同理化因素处理后的粗蛋白对白色念珠菌生物膜形成能力的影响。结果显示,菌株TRM 43355的粗蛋白对白色念珠菌生物膜形成具有很好的抑制效果,蛋白浓度为2 mg/mL时抑制白色念珠菌生物膜形成效果最好,其抑制率可达92%以上。蛋白耐酸,但不耐高温,80℃以上的高温蛋白失活。经有机溶剂和金属离子处理后的粗蛋白对白色念珠菌生物膜的抑制率都有所提高。菌株TRM43355发酵液中的蛋白具有较强抑制生物膜活性。     

新疆达坂城盐湖嗜盐细菌分离鉴定及活性分析

【目的】研究新疆盐湖嗜盐微生物资源及发掘菌株发酵液的农用和医药活性。【方法】采集达坂城区达坂城盐湖湖边的淤泥样品进行菌株分离鉴定,采用4种不同分离培养基,使用平板稀释涂布法结合16S rRNA进行分离鉴定;并用平板对峙法对分离到的放线菌进行植物病原菌拮抗活性研究,用HepG2细胞增殖测定其抑制肿瘤活性。【结果】获得细菌18株,鉴定为14个属,其中芽孢杆菌属(Bacillus)、链霉菌属(Streptomyces)、拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)为优势种群。有3株放线菌具有拮抗植物病原菌活性,其中菌株Tsukamurella sinensis DBC26和Nocardiopsis crassaminis DBC31有拮抗棉花枯萎菌活性,Streptomyces longispororuberDBC5有拮抗水稻恶苗菌活性。菌株DBC5、DBC9和DBC10对HepG2细胞增殖的抑制率分别为96.4%、91.8%和87.8%。【结论】达坂城盐湖细菌在数量和种类上存在丰富的多样性,且稀有放线菌种类较为丰富,并且其发酵液具有拮抗植物病原菌活性和抑制肿瘤细胞增殖活性。     

毛泡桐内生放线菌及根际放线菌的筛选、鉴定及代谢产物分析

以5种植物病原真菌为靶标菌,采用平板对峙法和生长速率法对分离自河南省新乡市毛泡桐及根际的41株放线菌进行筛选;通过生理生化特征、培养特征、形态特征和基于16S rRNA基因序列的分析,对活性菌株进行鉴定;利用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对活性菌株发酵液的乙酸乙酯提取物进行分析。结果表明:从41株放线菌中筛选出2株高活性菌株,菌株6002为淀粉酶链霉菌一个亚种(Streptomyces diastaticus subsp.diastaticus),菌株6026为浅紫链霉菌(Streptomyces violascens)。通过GC-MS分析从菌株6002和菌株6026发酵液乙酸乙酯相中分别鉴定出15种和14种化合物。鉴定出的成分中3-羟基-2-甲基-4-吡喃酮、3-异丁基-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮具有很好的生物活性,邻苯二甲酸二丁酯是重要化工原料。     

1株链霉菌BCG36的鉴定及抗菌活性研究

对分离自广西北海红树林根际土壤中的l株放线菌BCG36进行抗菌活性及生理生化特性的研究,并对其进行16S rDNA序列分析.结果显示:放线菌BCG36革兰氏染色呈阳性;有淀粉酶、纤维素酶、脂肪酶活性;牛奶先凝固后冻化,可使硝酸盐还原,不产硫化氢,不产黑色素,不使明胶液化;对大肠埃希菌、普通变形杆菌、乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌和白假丝酵母菌均有较好的抑制作用.16SrDNA测序后比对显示,放线菌BCG36菌株属于链霉菌属(Streptomyces).     

特殊生境中土壤放线菌的筛选与鉴定

采用土壤稀释法分离采自江苏及广西农化厂周边的6份土样,获得50株放线菌。以大丽花轮枝孢、尖镰孢萎蔫专化型和尖镰孢西瓜专化型为靶标菌,通过皿内试验及盆栽试验筛选出5株具有较强拮抗活性的放线菌。菌丝生长和孢子萌发抑制试验表明,菌株JSGF4、JSGF10和GXCK1对靶标菌有较强拮抗作用;盆栽试验表明,5株放线菌对茄子黄萎病有良好防治效果,其中菌株JSGF10对茄子黄萎病的防效高达90.0%;对防效较高的4株放线菌进行形态特征、培养特征及生理生化特性分析,鉴定菌株JSGF4为龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus),菌株JSGF10和GXCK1为白色链霉菌(Streptomyces albus),GXDM6为灰色链霉菌(Streptomyces griseus)。