影响山羊超数排卵生产原核胚的因素

为了进一步提高并稳定山羊原核胚生产的效率,本文对影响山羊原核胚生产的左右卵巢、体重、FSH剂量、超排季节等影响因素进行了系统分析。结果表明:(1)山羊在超数排卵时,左右卵巢排卵数差异不显著;(2)山羊体重在25~50 kg对超排结果没有差异;(3)山羊超排FSH剂量与体重之比(IU/kg)在5.5~7.0之间效果差异不显著,可以取得比较好的超排效果;(4)山羊在春季和冬季的超排效果没有差异。     

采胚时间对黑头萨福克绵羊胚胎质量和移植效果的影响

为了选择适宜的采胚时间,提高胚胎移植效果,试验通过对相同饲养管理条件下的黑头萨福克羊配种后5~7 d的采胚效果和有效胚移植效果进行了比较研究。结果表明:黑头萨福克羊配种后第5天采集的胚虽然退化胚较少(1.55%),但平均采胚数和有效胚数分别为10.59枚和9.98枚,均低于第6~7天采集胚,而且有效胚移植受胎率相对较低;第7天采集的胚(7日龄胚)退化比率也较高(4.85%),单胚移植受胎率也较高,达57.0%,但双胚移植受胎率69.47%,低于6日龄胚胎;第6天平均采胚数和有效胚数分别为11.64枚和10.90枚。虽然单胚移植受胎率低于7日龄胚,但双胚移植受胎率达71.02%,效果最好。因此,黑头萨福克羊在配种后第6天采集胚胎更有效。     

黑头萨福克绵羊胚胎玻璃化快速冻胚移植效果分析

本试验应用玻璃化胚胎冷冻方法进行黑头萨福克绵羊胚胎冷冻和移植,比较了受体羊卵巢上黄体数量、受体羊的体况、移植胚胎的数量对受体受胎率的影响。受体羊卵巢上有一个黄体的移植受胎率42.7%与有2~3个黄体受体羊移植受胎率44.4%无显著差异;受体的体况对受胎率有显著影响,中上等(含中等)体况水平的受体的受胎率47.2%显著高于中下等的受体的受胎率43.0%(P0.05);使用玻璃化胚胎冷冻法的冷冻解冻胚胎移植受胎率54.2%显著高于常规胚胎冷冻法的冻胚移植受胎率44.0%(P0.05);移植1枚桑葚胚(1M)的受胎率47.5%略高于移植1枚囊胚(1B)的受胎率44.3%(P0.05)。因此,受体羊黄体数、冷冻桑葚胚和囊胚对胚胎移植受胎率没有显著影响,而受体中上等(含中等)体况水平和玻璃化胚胎冷冻法冷冻解冻胚胎移植受胎率显著提高。     

肉用黑萨福克绵羊超数排卵和配种授精方案的优化

本研究旨在优化肉用黑萨福克绵羊超排方案,筛选生产条件下最佳配种授精方式,提高黑萨福克体内胚胎生产效率,建立高效绵羊胚胎移植体系。供体超数排卵采用不同超排方案、不同FSH剂量、不同配种授精方式、不同侧卵巢超排效果、不同季节以及重复利用6组因素的比较试验。结果表明:采用CIDR+FSH+PMSG递减4d 8针注射法供体平均黄体数16.00个/只、可用胚数14.00枚/只和移植妊娠率71.43%,效果最好(P<0.05);FSH注射剂量范围在200²60 IU,超排平均黄体数、平均可用胚胎数分别为14.87、13.28枚/只,高于160260 IU,超排平均黄体数、平均可用胚胎数分别为14.87、13.28枚/只,高于160²00 IU组和260200 IU组和260³20 IU组(P<0.05);开膣器输精+自然交配+开膣器输精方法供体冲出卵子的受精率97.32%、平均可用胚数11.25枚/只,高于其他2种配种方式(P<0.05);不同侧卵巢超排效果无差别;繁殖季节(秋季)供体平均黄体数13.00个/只、可用胚10.75枚/只,高于非繁殖季节(P<0.05);重复超排效果无明显差异。本研究获得了黑萨福克绵羊超数排卵的技术参数,优化了黑萨福克绵羊超排方法和配种授精方案,建立了高效的胚胎移植体系。     

黑安格斯牛体内性控胚胎生产影响因素的研究

为了对黑安格斯牛体内性控胚胎生产过程中的相关影响因素,如月龄、卵泡刺激素(FSH)剂量和精液质量进行研究,试验使用性控分离精液生产黑安格斯牛体内性控胚胎,选择90头13~25月龄黑安格斯牛为供体,分别使用260 mg、340 mg FSH对供体进行超数排卵(简称超排)处理,同时选择3头公牛性控分离精液进行人工授精。结果表明:260 mg、340 mg FSH对不同月龄供体超排获得的平均胚胎数、平均可用胚胎数、平均不可用胚胎数、供体卵巢平均黄体数差异均不显著(P0.05);使用3头不同公牛性控精液进行人工授精后获得的平均胚胎数分别为10.44枚、10.89枚、9.30枚,且差异不显著(P0.05);使用♂1和♂2性控分离精液获得的平均可用胚胎数分别为2.78枚、4.11枚,显著高于♂3性控分离精液获得的平均可用胚胎数(0枚)(P0.05);使用♂1和♂2性控分离精液获得的平均不可用胚胎数分别为7.66枚、6.78枚,显著低于♂3性控分离精液获得的平均不可用胚胎数(9.30枚)(P0.05)。因此,使用低剂量FSH对较早月龄黑安格斯牛进行超排,同时选择受精力高的性控分离精液能够进行体内性控胚胎生产。     

受体因素对萨福克羊鲜胚及杜泊羊冻胚移植效果的影响

文章分析了新疆地区一次萨福克羊鲜胚及杜泊羊冻胚的移植实验数据,旨在讨论受体因素对胚胎移植效果的影响。结果表明:受体羊在发情后7 d时移植胚胎,杜泊羊冻胚桑椹胚移植后产羔率显著高于囊胚(P0.05)。萨福克羊鲜胚移植时胚胎发育阶段及移植数量对移植后产羔率无显著影响(P0.05)。受体母羊先前手术次数对萨福克羊鲜胚移植后产羔率有显著影响(P0.05),手术2次及以上次数的母羊产羔率极显著低于初次胚胎移植的母羊(P0.01)。受体母羊卵巢黄体数超过1个后,黄体数对产羔率无显著影响(P0.05)。     

不同激素组合对萨福克绵羊超数排卵的影响

家畜胚胎移植过程中,供体、受体的同期发情处理以及超数排卵会对胚胎移植的效果产生显著影响。以萨福克绵羊为供体,小尾寒羊为受体,比较加拿大产的Folltropin-V与国产FSH组合用药对萨福克绵羊同期发情和超数排卵的效果。结果表明:采用加拿大产Folltropin-V的平均黄体数为1072枚,平均可用胚胎数为657枚;而国产FSH混合用药的平均黄体数为1018枚,平均可用胚胎数为647枚,两者效果未见显著差异。     

绵羊体内冻胚与体外冻胚移植效果对比观察

在繁殖季节10月，利用萨福克、无角道塞特和边区莱斯特品种羊的体内和体外冷冻胚胎，以小尾寒羊为受体进行胚胎移植，结果如下：受体羊的同期发情率达82.3%，体内冻胚的受胎率（54.5%）和胚胎利用率（50.0%）均明显高于体外冻胚的受胎率（30.6%）和胚胎利用率（27.3%）,差异极显著（P<0.001）。     

影响绵羊冻胚移植妊娠率的因素分析

本研究对胚胎质量、胚胎移植数量、胚胎发育阶段、冷冻方法、移植方法及饲养管理水平等因素对移植产羔率的影响进行研究,以提高绵羊胚胎移植效率。结果表明:采用1.5mol/L乙二醇做冷冻保护剂对胚胎进行常规冷冻,冻前A级胚胎冷冻/解冻后可用胚率、存活率、降级率均高于B级,差异极显著(P<0.01)。移植1枚冷冻解冻后A级、B级或2枚(A+B)胚胎的受体移植产羔率分别为44.48%、46.84%和44.81%。经χ2检验分析,三者之间无显著差异(P>0.05)。移植双胚的受体双羔率为22(%53/241),以胚胎为单位计算,产羔率仅为33.40%。A级囊胚和桑椹胚的产羔率之间无显著差异(P>0.05)。1.5 mol/L乙二醇常规冷冻保存的体内胚胎移植产羔率高于EFS40玻璃化冷冻保存,但经统计学分析,二者无显著差异(P>0.05)。子宫手术移植和腹腔内窥镜法子宫移植之间产羔率不具统计学差异(P>0.05)。在牧场条件下大规模移植的平均产羔率为43.95%,范围在20%￣70%之间,受体饲养管理水平对绵羊移植产羔率有较大影响。     

萨福克绵羊的概况与品种特性

萨福克绵羊在十九世纪初，用南邱公羊与古老的黑面有角诺福克母羊杂交培育而成。以早熟和繁殖能力高而著称（产羔率约１３０％），并具有良好的母性，羊肉品质好等优良特性，萨福克广泛的用于杂交父本，生产肥羔，效果很好。     

绵羊玻璃化冷冻胚胎直接移植试验研究

应用EFS40玻璃化液对6.5～7日龄的绵羊胚胎进行玻璃化冷冻及解冻后直接移植试验.结果:桑椹胚、囊胚冷冻解冻后移植的妊娠率分别为37.50%(3/8)和54.55%(6/11),胚胎存活率分别为33.33%(3/9)和50.00%(6/12),差异均不显著(P＞0.05);胚胎解冻后用0.5 mol/L蔗糖脱防冻剂与直接用胚胎存放液脱除防冻剂的妊娠率分别为44.44%(4/9)和50.00%(5/10),胚胎存活率分别为40.00%(4/10)、45.45%(5/11)差异不显著(P＞0.05);10枚解冻后的胚胎细管内脱防冻剂后,直接装管移植给8只受体,妊娠率为50.00%(4/8),胚胎成活率为40.00%(4/10),与同期常规冷冻解冻组相比无显著差异(P＞0.05).     

不同因素对绵羊卵母细胞体外受精效果的影响

本试验研究了发情羊血清、不同个体的冷冻精液和新鲜精液、精子密度、受精时颗粒细胞的有无及不同培养液对绵羊体外受精效果的影响。结果表明,发情3d的血清与发情当天的血清相比,对卵裂率和囊胚率有极显著的影响(P0.01);不同个体的冷冻精子对卵裂率和囊胚率都有显著的影响(P0.05),但鲜精和冷冻精子的受精效果与个体有关;精子密度在2×106～6×106个/mL之间对受精效果没有影响(P0.05);颗粒细胞对受精的作用不明显(P0.05);不同的培养液对受精效果没有显著影响(P0.05)。因此,选用好的公羊个体精子,用发情3d的发情羊血清能显著提高受精效果。     

Viability of OPS Vitrified Sheep Embryos After Direct Transfer

The aim of this study was to evaluate the viability in the effect of open pulled straw (OPS) vitrification procedure of sheep embryos after direct transference. Embryos were produced in vivo and cryopreserved in slow freezing or OPS vitrification. The survival rates of cryopreserved embryos were compared to non-frozen standard pattern. In a first set of experiments, embryos at morula and blastocyst stages were dived in ethylene glycol (1.5 M) and frozen in an automatic freezer. After being thawed, they were directly or indirectly transferred to ewes recipient. A second group of embryos were drawn into OPS and plunged into liquid nitrogen after being exposed at room temperature for 1 min and 45 s in 10% EG plus 10% dimethyl sulphoxide (DMSO), then again for 30 s in 20% EG + 20% DMSO + 0.5 M sucrose. After being warmed, embryos were also directly transferred using a French mini straw as the catheter for the transplantation process or after in vitro dilution of cryoprotectants (two-step-process). No significant difference was observed among fresh, frozen or vitrified embryos on pregnancy rate (50.0%, 38.6% and 55.8%). However, when we evaluated only the direct transference, the pregnancy rate of OPS vitrified embryos was higher than that of frozen embryos (57.1% vs 34.8%) (p = 0.07). In addition, vitrified morulae had a higher pregnancy rate than the one with frozen embryos (64.0% vs 38.9%) (p = 0.07). Finally, our results indicate that OPS vitrification technique in association with direct transference improves the viability of sheep embryos with potential applications to field conditions.     

受体绵羊人工授精后移植胚胎的试验

试验通过使用人工授精后绵羊作为受体进行胚胎移植,以寻找一种更加有效的方法提高绵羊胚胎移植的经济效益。试验中使用FSH对10只无角道赛特绵羊进行超数排卵处理,同时对60只受体小尾寒羊进行同期发情。供体羊在发情配种后4.5～5.0d从子宫角收集胚胎。同时,将胚胎移植到同期发情并进行人工授精的受体羊子宫内。总共有57枚可用胚移植给44只受体小尾寒羊,32只怀孕到分娩,共产下羔羊51只(无角道赛特羔28只,道赛特与小尾寒羊杂种羔23只)。此外,经人工授精但未进行手术移植的7只小尾寒羊产下15只杂种羔羊。移胚植受体妊娠率72.7%(32/44),移胚受体繁殖率118%(51/44),受体利用率88.3%(53/60)。移胚受体总妊娠率和受体利用率均显著高于常规ET组(P<0.01)。与常规胚胎移植相比,受体羊人工授精后移植胚胎不仅提高了无角道赛特母羊的繁殖率,而且提高了受体羊的利用率。     

细胞因子对绵羊体外受精胚胎发育的影响

绵羊卵巢采自乌鲁木齐市屠宰场，卵母细胞体外成熟24－25h后，由体外获能的附睾精子授精，50h后，将卵裂至2－8细胞的绵羊胚胎移入添加了不同浓度细胞因子的培养液中继续培养，结果表明，加入5、10、15μg/ml胰岛素（Insulin)分别得到17.46%、23.81%、22.95%的囊胚率，与对照组9.52%相比差异显著（P＜0.05)。高浓度（500μg/ml)的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（Granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)可获得21.82%的囊胚率，与对照组7.27%相比差异显著（P＜0.05)。胚胎培养液中分别加入10、100、500ng/ml的白细胞介素－3（Interleukin-3,IL-3)、白细胞介素－8（IL－8）和神经生长因子（Nuclear growth factor,NGF)与对照组相比，囊胚率差异不显著。本研究表明，胰岛素、GM－CSF对绵羊体外受精胚胎早期发育有促进作用，IL－3、IL－8、NGF对绵羊胚胎的早期发育无明显作用。     

绵羊胚胎FGF5基因单碱基突变体系的建立

研究旨在利用单碱基编辑技术定点修饰绵羊（Ovis aries）成纤维细胞生长因子5（fibroblast growth factor 5，FGF5）基因第1外显子以引入终止密码子，获得定点编辑类型的绵羊胚胎，为培育具有长毛性状的绵羊提供试验材料。首先设计合成4个单导向RNA （single guide RNA，sgRNA）寡核苷酸链（sgRNA-T1~sgRNA-T4），构建4组不同的重组表达载体；将构建好的pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin和pCMV-AncBE4max-P2A-GFP质粒以共转染的方法分别转入4组绵羊成纤维细胞，随后用Cruiser^TM酶对转染的细胞进行活性检测并在胚胎水平进行测序验证。结果显示，sgRNA-T1和sgRNA-T4组细胞的PCR产物可被Cruiser^TM酶酶切，且测序结果表明都具有靶向效果，编辑效率分别为68.75%和47.37%。利用显微注射技术将不同浓度的AncBE4max mRNA与有效sgRNA混合注射到绵羊孤雌激活胚胎中，并检测胚胎卵裂率、囊胚率和编辑效率，结果显示，胚胎水平的最佳注射浓度组合为AncBE4max （ng/μL）∶sgRNA （ng/μL）=100∶50，从该浓度组中随机挑选的单枚胚胎测序结果显示，引入终止密码子的编辑效率为80%。而sgRNA-T1在不同浓度组合的注射胚胎中均未检测到编辑。本研究针对FGF5基因的第1外显子，通过在成纤维细胞转染表达载体，成功筛选到高效靶向绵羊FGF5基因的2个sgRNA （T1、T4）；通过显微注射绵羊孤雌激活胚胎，成功在胚胎上实现FGF5基因第1外显子打靶位点C→T的转变，为后期FGF5基因定点编辑羊的生产奠定基础。     

FSH用量对供体羊超数排卵胚胎质量比较

Wang Gailan     

影响小鼠早期胚胎发育的几个重要因素

以Ｗｈｉｔｅｎ氏液为基本培养液,研究了卵丘细胞、谷氨酰胺及不同浓度的葡萄糖对ＨＣＧ注射后１７～１８ｈ、２５～２７ｈ和３６～３８ｈ昆明小鼠胚胎体外发育的影响。结果表明,不论葡萄糖或谷氨酰胺存在与否,卵丘细胞与受精卵的共同培养对胚胎克服体外发育阻断无明显效果。葡萄糖能抑制１－细胞胚胎发育,促进４－细胞以后的胚胎发育。谷氨酰胺是小鼠早期胚胎发育的良好能源物质,可使９６％（３０８／３２１）的体外发育到２－细胞的胚胎克服阻断而继续发育到４－细胞。谷氨酰胺与葡萄糖联合使用,则可使小鼠受精卵的囊胚发育率达５７．５％（２２９／３９８）。ＨＣＧ注射后３６～３８ｈ的小鼠胚胎能利用葡萄糖。     

家兔显微受精影响因素及显微受精胚胎超微结构

以家兔为实验动物，利用胞质内精子注射技术和透明带下精子注射技术，对卵龄、精子获能、注射针管口径、操作室温和操作方法等影响显微受精的因素以及显微受精胚胎的超微结构进行了研究。结果显示：（１）胞质内单精子注射，ｈＣＧ后１５－１７ｈ卵的存活率为６９．４％，显著（Ｐ〈０．０５）高于ｈＣＧ后１９－２１ｈ卵的存活率（４７．３％）；而受精率和卵裂率（分别为５２．９％和４１．２％）分别低于ｈＣＧ后１９－２１ｈ卵的