人参组织和细胞培养的研究 Ⅰ.环境因子对人参愈伤组织生长的影响

人参(Panax ginseng)是我国传统的名贵药材,不仅在临床医学上用于治疗多种疾病,而且在保健食品、保健饮料中的应用也越来越广泛。随着人们生活水平的提高,对人参的需求量也越来越大。由于人参栽培需要特殊的气候、土壤条件,我国只在部分地区种植,而且需要种植5—6a才能收获,年产量不能满足人们的需求。为了改进入参药材的品质和增加市场供应量,有必要利用近代生物技术开展人参组织和细胞培养的研究,探讨人工培养工业化生产人参的技术路线。     

人参叶片愈伤组织诱导数学模型分析

取人参叶片作为外植体诱导愈伤组织,利用二元二次通用旋转组合设计数学模型筛选植物激素浓度组合,结果表明:2,4-D与KT对人参叶片外植体诱导愈伤组织方程为:Y=0.653 30+0.229 63X1+0.140 85X2-0.130 83X12-0.197 48X22+0.100 00X1X2;叶片诱导愈伤组织最佳培养基为MS附加7 mg·L-12,4-D和0.9 mg·L-1KT,诱导率最高可达80%以上。     

影响月季叶片愈伤组织诱导因素的初步探讨

利用温室中的月季植株叶片作为外植体，研究了3种激素不同浓度配合使用对月季叶片愈伤组织诱导的影响，筛选出诱导愈伤组织的最佳培养基Ms 2，4-192．0mg／L 6-BA0．2mg／L 活性炭0．3g／L，其最高诱导率达100％，同时还比较了不同品种间的差异。     

抗生素对山茶愈伤组织诱导和生长的影响

研究了卡那霉素、潮霉素对浙江红山茶、大花红花油茶愈伤组织的生长及对攸县油茶幼苗叶片诱导愈伤的影响,确定作为选择压力的卡那霉素质量浓度为50～60mg·L-1,潮霉素为25～30mg·L-1。在3种抑菌性抗生素中,羧苄青霉素促进愈伤组织诱导,对愈伤组织的生长没有影响,头孢霉素则有抑制作用,而羟氨苄青霉素轻微抑制愈伤组织的生长,但对愈伤组织的诱导影响不大。考虑到抑菌效果,适于在转基因研究中使用的羧苄青霉素的抑菌质量浓度为250mg·L-1,羟氨苄青霉素为125mg·L-1。     

诱导红金银花愈伤组织的影响因素研究

以红金银花顶芽和叶片为实验材料,采用L16(44×23)混合水平的正交试验设计,对红金银花诱导愈伤组织进行了研究,结果表明红金银花外植体类型、培养基类型、6-BA浓度、NAA浓度以及蔗糖浓度和培养温度对愈伤组织的产生均有影响;顶芽诱导率高于叶片诱导率,MS 6-BA0.5mg/L NAA0.2mg/L为最佳培养基;最适蔗糖浓度为30.0g/L,最适温度为23℃~25℃。     

不同种（品种）三叶草愈伤组织诱导及分化影响因素研究

以9个三叶草品种的上胚轴、下胚轴、叶片和子叶为外植体,研究了影响三叶草愈伤组织诱导和再分化的主要因素。结果表明,不同品种不同外植体愈伤诱导率差异较大,下胚轴为较适宜的外植体,其平均愈伤组织诱导率和愈伤分化率为97％和10．3％,改良SH＋2,4-D8．0mg／L＋6-BA0．2mg／L＋KT0．2mg／L为最佳胚性愈伤组织诱导培养基,所形成的愈伤组织的愈伤分化率也最高。     

皂质芦荟诱导愈伤组织影响因素的初步研究

文章探讨外植体种类、基本培养基类型以及外源激素配比3方面对皂质芦荟诱导愈伤组织的影响,并对其愈伤组织生长增殖进行了实验研究。结果表明,皂质芦荟根段是诱导愈伤组织较适宜的外植体;在MS培养基上诱导的愈伤组织在出愈率和增殖上都好于B5、ER。对6-BA、NAA、2,4-D进行L9(3)3正交试验设计,分析可知,激素对诱导愈伤组织无显著差异;观察愈伤组织生长状况,综合因素认为6-BA3.0mg.L-1 2,4-D3.0mg.L-1 NAA2.0mg.L-1的激素组合诱导效果最佳,愈伤组织收获鲜重最高,达5.661g。在愈伤组织增殖过程中,添加水解乳蛋白的增殖效果比氨基苯甲酸明显,以6-BA3.0mg.L-1 2,4-D3.0mg.L-1 NAA2.0mg.L-1 水解乳蛋白100mg.L-1 对氨基苯甲酸100mg.L-1组合的愈伤组织增殖率最高,达5.86。愈伤组织生长周期为35d,15d开始进行对数生长期,最大生物量达6.62g。     

虎杖不同组织部位及其愈伤组织中白藜芦醇含量的测定

通过超声波提取虎杖根状茎中不同组织部位及其不同愈伤组织中的白藜芦醇，并采用HPLC方法检测分析白藜芦醇含量。结果表明：在虎杖根状茎不同组织部位中，白藜芦醇含量（质量分数计）依次为：根状茎芽〉髓〉木质部〉韧皮部〉周皮，其中根状茎芽中白藜芦醇质量分数高达0．4251％，髓中白藜芦醇质量分数为0．2664％。在同一批根状茎芽诱导的不同颜色愈伤组织体系中，棕褐色愈伤组织中白藜芦醇质量分数最高为0．0550％，淡黄绿色愈伤组织中仅为0．0005％。光照培养条件下的愈伤组织中白藜芦醇质量分数为0．0104％，黑暗培养条件下为0．0075％。不同外植体诱导的愈伤组织中白藜芦醇质量分数依次为：根状茎芽〉茎〉叶，以根状茎芽诱导的愈伤组织中白藜芦醇的质量分数最高，为0．0550％。不同组织部位诱导的愈伤组织中白藜芦醇质量分数为：鲜茎（根状茎中韧皮部）〉根状茎中木质部〉根状茎中髓，鲜茎中达到0．0090％。     

广藿香愈伤组织的诱导和增殖

以广藿香的幼叶、茎段为外植体,接种于附加不同浓度的2,4-D、NAA、6-BA、KT、TDZ及其组合的MS固体培养基上进行愈伤组织的诱导,结果表明:单独使用5种激素在一定范围内均能诱导出愈伤组织;最佳组合培养基为MS+6-BA 1.0 mg.L-1+2,4-D 0.1 mg.L-1。进一步研究发现,茎段和叶片诱导的愈伤组织的生长曲线都呈“S”型,且生长周期均为18 d。     

花旗松扦插中愈伤组织的形成

花旗松扦插诱导愈伤组织试验结果表明:硬枝扦插形成愈伤组织好于嫩枝扦插,3月份(树液流动前)是花旗松硬枝扦插形成愈伤组织的最佳时间.扦插基质以河沙1 黄土1为佳.扦插地点的地表温度低于20℃不利于愈伤组织产生,花旗松形成愈伤组织需要2个月时间.     

高杆女贞愈伤组织诱导研究

选取高杆女贞的幼嫩叶片作为外植体,进行愈伤组织的诱导。结果表明:愈伤组织诱导最适培养基为:MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+6.5g/L琼脂粉+30g/L蔗糖,p H调为5.8~6.0,诱导率可达86.7%,且愈伤组织生长状况良好。     

耐冬山茶愈伤组织诱导研究

重点探讨耐冬山茶愈伤组织诱导过程中不同植物生长调节剂、培养基pH值、不同培养基及不同类型外植体对愈伤组织诱导效应的影响。研究结果表明:MS+6-BA 2.0 mg.L-1+2,4-D 0.5 mg.L-1培养基是耐冬山茶愈伤组织诱导的最佳培养基;耐冬山茶愈伤组织诱导培养基pH值以5.5较为合适;耐冬山茶叶柄作为外植体,诱导率和生长状况最佳。     

湿地松愈伤组织的诱导研究初报

取湿地松成熟胚作为外植体,在添加不同BA、NAA浓度配比的MS培养基上,诱导愈伤组织的最适培养基是MS+BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+0.6%琼脂+25g/L蔗糖。实验同时证明,NAA是胚诱导愈伤组织的必需因子。     

牡丹愈伤组织的诱导及愈伤褐化抑制的研究

以凤丹为试验材料,比较不同外植体,不同基本培养基,不同激素组合对愈伤诱导率的影响;结果表明,以子叶和胚轴为外植体,在培养基1/2改良WPM+2,4-D1.0 mg·L-1+6-BA1.0 mg·L-1+水解酪蛋白500mg·L-1+L-谷氨酰胺150 mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂7g·L-1的培养基中诱导率最高,可达100%。同时研究了愈伤褐化抑制,结果表明,以1/2改良WPM为最佳基本培养基;PVP和植物凝胶的效果最好,褐化指数分别为31.11%与30.00%;黑暗、低温、较短的继代周期都能不同程度的减缓愈伤褐化。     

银杏愈伤组织超低温保存的研究

本文对银杏子叶愈伤组织进行了超低温保存研究。结果表明 ,冰冻保护剂、冷冻速度对解冻后材料相对存活率影响较大 ,冻前预培养和预冻至某一温度停留一段时间也较为重要。在含高浓度山梨醇或甘露醇的培养基上预培养 2d的愈伤组织 ,用 10 %二甲基亚砜 +0 .5mol·L- 1 山梨醇作为冰冻保护剂 ,以 1℃·min- 1 速度降温 ,在 - 15℃、- 35℃分别停留 10min和 30min后 ,投入液氮中保存 1d ,细胞相对存活率可达 6 0 %以上。再培养时 ,细胞能恢复生长。     

中华结缕草愈伤组织诱导和再生的影响因素研究

以中华结缕草成熟胚为外植体,研究预处理温度、时间以及不同碳源、氮源、pH值、琼脂浓度、培养温度、激素配比对中华结缕草成熟胚愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明:成熟胚预处理使用30℃的30%NaOH处理60min可显著提高愈伤组织的诱导率。最佳诱导培养基为MS+酶水解酪蛋白500mg/L、蔗糖3%、葡萄糖2%、琼脂6.5/L,附加2,4-D2mg/L、6-BA0.1mg/L、VB11mg/L、VB21mg/L,灭菌前pH值调至6.0~6.1,最佳培养温度为25℃±2℃。最佳分化培养基为MS,附加6-BA0.3mg/L、NAA0.5mg/L、蔗糖3%、琼脂6.5g/L。     

加拿大红枫愈伤组织诱导研究

以健康生长的加拿大红枫的叶片、叶柄、顶芽、侧芽为外植体,采用愈伤组织诱导培养方法,通过比较不同的外植体、光照时长、温度、湿度和植物生长调节剂及其配比对加拿大红枫愈伤组织诱导的影响。结果表明:愈伤组织诱导的最适外植体是顶芽;愈伤组织诱导的最适培养基是1/2MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA3 0.1mg/L;生长的最适培养条件为温度(25±2)℃,湿度65%,光照24h/d,光照强度15 00～2 000lx。     

银杏愈伤组织生长和黄酮类化合物积累的关系

本文以银杏幼苗戏段为外植体诱地产生愈伤组织,测定了其中的黄酮灰类化合物的积累量,并初步探索了愈伤组织生长与黄酮类化合物积累的关系和影响积累的有关因素。研究结果表明：诱导幼苗茎段愈伤组织产生的最适培养基为ＭＳ＋２．５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１ｍｇ＝Ｌ ＫＴ＋２００ｍｇ／Ｌ ＬＨ＋３０ｇ／Ｌ蔗糖;愈伤组织生长周期约３０ｄ;为使愈伤组织维持较长时间的生长,要在其生长２５－３０ｄ时用中等盐分工的基本培养基继代培     

牡丹愈伤组织扫描电镜观察

为揭示牡丹愈伤组织分化过程中的细胞变化规律,以牡丹品种“凤丹”花瓣诱导的愈伤组织为材料,利用电镜扫描的方法,观察了不同培养时间愈伤组织表面结构的变化过程。结果表明：牡丹花瓣愈伤组织类型不同,表面结构有较大差异,同一块愈伤组织上存在不同的发育时期,继代的时间不同,愈伤组织的表面结构也会随之发生变化,继代后15[XC~.TIF]20 d为愈伤组织结构变化最大的时期。初步了解了愈伤组织分化植株的过程,为建立牡丹高效再生体系奠定理论基础。     

金边瑞香离体培养中芽和愈伤组织诱导初步研究

以MS为基本培养基，附加激素KT、NAA、6-BA、IAA、ZT进行试验，发现不同的激素组合、不同的激素水平处理对芽及愈伤组织诱导影响较大，其中以MS附加ZT1．0mg／L的培养基上芽的诱导率最高．高达94％．且诱导时间短，芽生长健壮。