光合细菌培养基配方的优化研究

光合细菌培养基的组分是由乙酸钠、氯化铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母膏等5种原料构成。采用L16(45)正交表,将5种原料作为光合细菌生长有影响的因素,通过试验数理统计的直观和理论分析,对其配方进行优化。试验结果表明,当培养基的配方为乙酸钠3.3 g/L、氯化铵0.6 g/L、磷酸二氢钾0.9 g/L、硫酸镁0.5 g/L、酵母膏1.5 g/L、光照3 000 lx和温度(32±2)℃时,培养72 h即可达到生长峰值,细菌总数可以从起初的1.75×109cfu/mL提高到3.19×109cfu/mL。优化的培养基条件能有效促进光合细菌生长。     

光合细菌同化磷能力的初步探究

研究了培养条件、pH、接种量、含磷量、不同碳源等条件对光合细菌解磷能力的影响。在30℃、光照微好氧培养、培养基以苹果酸为碳源、磷质量浓度为0．35g／L、pH6．0、装液量100mL／250mL、接种量为体积分数10％时，光合细菌生物量和解磷率都可达到最高。     

光合细菌对罗非鱼免疫功能的影响

为评价光合细菌在罗非鱼养殖过程中使用效果的生物学指标,本试验设计在养殖罗非鱼的水体里添加不同浓度的光合细菌,通过测定罗非鱼酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、溶菌酶(LZM)五种免疫酶活性指标,探讨在养殖水体里添加光合细菌对罗非鱼的免疫酶活性及生长性能的影响。结果表明:添加光合细菌的浓度为104cfu/mL的鱼血清的ACP活性显著高于其他组,光合细菌的浓度为105cfu/mL的鱼血清的AKP活性显著高于其他组,光合细菌的浓度为103cfu/mL的鱼血清AST活性显著高于其他组,光合细菌的浓度为104cfu/mL和105cfu/mL添加组的鱼血清ALT活性显著高于其他组,光合细菌的浓度为104cfu/mL的鱼血清的LZM活性显著高于其他组,且实验组显著高于对照组。为推广光合细菌在罗非鱼养殖过程中提高免疫功能提供了理论依据。     

芽孢杆菌和光合细菌对异育银鲫鱼种消化酶的影响

将均重为18.0g的600尾异育银鲫鱼种(Allogygenetic crucian carp)随机分成10组,每组设2个重复,分别在其养殖水体中添加不同浓度(5×10~8、5×10~9、5×10~(10)cfu/m~3)的光合细菌、芽孢杆菌或1:1的光合细菌芽孢杆菌混合菌,饲养40d后,测定异育银鲫肠道和肝胰脏的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性。结果表明,综合考虑芽孢杆菌和光合细菌对异育银鲫肠道和肝胰脏蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶三者的影响,在本试验浓度范围内,浓度为5×10~9cfu/m~3的芽孢杆菌效果最好。     

益生菌在凡纳滨对虾育苗中的应用

实验研究了在凡纳滨对虾育苗中添加益生菌(芽孢杆菌、光合细菌或芽孢杆菌 光合细菌)对水体中pH值、H2S、COD、NH 4N、NO-2N和幼体成活率的影响。结果表明:光合细菌对提高水体的pH值有一定作用,而芽孢杆菌对pH值无显著影响;益生菌能显著降低水体中的H2S、NH 4N和NO-2N含量,其中光合细菌去除H2S和NO-2N的效果略优于芽孢杆菌,而芽孢杆菌去除NH 4N的能力比光合细菌强;实验中COD均在较适宜范围,益生菌对COD无显著影响。5mg·L-1芽孢杆菌和1mg·L-1芽孢杆菌 10mg·L-1光合细菌能显著提高育苗成活率。在实验中,1mg·L-1芽孢杆菌 10mg·L-1光合细菌的综合效果最佳,芽孢杆菌和光合细菌具有协同作用。     

光合细菌和复合微生物制剂在西施舌幼虫培育的应用

研究了不换水、添加以光合细菌和芽胞杆菌属为主的复合微生物制剂于水中对西施舌(Coelomactraan tiquata)育苗的影响。以幼虫培育密度为0.5,1ind·mL-1,分2大试验组进行不换水而添加不同浓度光合细菌和复合微生物制剂的试验,结果表明:这2大组中都是添加光合细菌40μL·L-1、微生物制剂2μg·L-1的小组,其幼虫生长最快;幼虫密度为0.5ind·mL-1的试验组,8d内换水与不换水,添加与不添加复合微生物,对于幼虫成活率影响不大,而幼虫密度为1ind·mL-1的试验组必需添加一定量的微生物(光合细菌40μL·L-1、微生物制剂2μg·L-1)才可达到与换水对照组同样高的成活率。     

渔源解淀粉芽孢杆菌CQN-2菌株培养基及发酵条件优化

CQN-2是一株具有抗病、促生长等多种功能的肠道内源性解淀粉芽孢杆菌。为研究其最佳培养条件,从而为规模化生产发酵提供依据,本文以菌体生物量为指标,采用单因素试验和正交试验对CQN-2菌株的最适培养基及发酵条件进行优化。结果表明,CQN-2菌株的最适碳源为可溶性淀粉,最适氮源为细菌学蛋白胨,经优化后的最佳培养基配方为可溶性淀粉20 g/L、细菌学蛋白胨30 g/L、糖蜜50 g/L、KH_2PO_4 0.5 g/L、MgSO_4 0.5 g/L、NaCl 0.3 g/L、Mn~(2+) 5 mmol/L、Al~(3+) 1 mmol/L;最佳发酵培养条件为初始pH值7.0,接种量为3%、装液接种量25 mL/250 mL;使用优化后的培养基将CQN-2接种于5 L发酵罐进行高密度发酵培养36 h后的活菌数为3.03×10~(12) CFU/mL。     

抗弧菌光合细菌的分离鉴定及对氨氮和亚硝态氮的降解特性

该研究采用双层平板涂布法和划线法,从不同地区的海洋环境样品中分离纯化光合细菌,以副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)、创伤弧菌(V.vulnificus)、鳗弧菌(V.anguillarum)为指示菌,采用牛津杯法测定海洋光合细菌菌株的抑菌作用,采用靛酚蓝分光光度法和盐酸萘乙二胺分光光度法测定不同菌株对氨氮(NH_4~+-N)和亚硝态氮(NO_2~--N)的降解作用,筛选出具有抗弧菌并高效降解NH_4~+-N和NO_2~--N复合功能的优良菌株。结果显示,从30个海水、海泥等样品中分离得到3株光合细菌,分离自连云港车牛山岛海水样品的菌株P-3,对3种弧菌均具有较强的抑制作用,其中对鳗弧菌的作用最强,抑菌圈直径为5.3 mm。3株光合细菌均具有一定的降解NH_4~+-N和NO_2~--N作用,菌株P-3的降解作用最强,在含有50 mg·L~(-1) NH_4~+-N和NO_2~--N的培养基中培养4 d,降解率分别为89.68%和94.98%。经形态学观察、生理生化试验和16S rDNA序列分析,确定P-3为沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。     

来自鳗鲡的二株益生菌适宜培养基的研究

用正交试验法,通过研究培养基基础成分、主要添加成分和无机盐对养殖鳗鲡(Anguilla japonica)肠道益生菌枯草芽孢杆菌(A40209CDC4)和少动鞘氨醇单胞菌(A31009NA)的生长影响,确定了优化的培养基。菌株A31009NA的优化配方为:蛋白胨1.0%,牛肉膏0.1%,食盐0.5%,酵母膏0.5%,葡萄糖1.0%,硫酸铵0.05%,MgSO4.7H2O 0.1 g/L,CuSO4.5 H2O 0.15 mg/L,MnSO4.H2O 1.5 mg/L,CoCl.H2O 0.15 mg/L;A40209CDC4优化培养基配方为:蛋白胨1.0%,牛肉膏0.1%,食盐1.0%,酵母膏0.5%,硫酸铵0.05%,MgSO4.7 H2O 0.1 g/L,MnSO4.H2O 1.5 mg/L,CoCl.H2O 0.15 mg/L,CaCl20.02 g/L。优化培养基与普通营养肉汤(蛋白胨1.0%,牛肉膏0.3%,食盐0.5%)培养对照试验结果表明,优化培养基有效地提高了细菌产量。     

光合细菌在观赏鱼饲养中的应用试验

从市场购回光合细菌原液，自配液体培养基进行富集扩大培养，获得棕红光合细菌培养液，在观赏鱼养殖中应用后表明：光合细菌在净化水质、防治疾病、培育苗种等方面有显著效果。     

一株水产用益生枯草芽孢杆菌液体发酵初步研究

为解决工业化生产中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)活菌数量低、成本高的问题,通过正交试验、单因素试验和100 L发酵罐中试,确定了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HJ02工业生产用的优化液体培养基和发酵工艺条件。最佳培养基配方为:葡萄糖10 g/L、玉米粉8 g/L、豆粕粉25 g/L、硫酸锰30.8 mg/L、硫酸镁5 g/L、磷酸二氢钠0.52 g/L、磷酸氢二钠2.33 g/L;最优发酵工艺条件为:培养温度30℃,初始pH 7.0;最佳接种菌龄是18 h。优化后培养基成本降低了50%以上,细菌浓度达到了7.19×109个/mL。     

鱼体内环境激素ＤＭＰ和ＤＥＰ的检测方法

建立同时检测鲫(Carassuys auratus Linnaeus)血浆和肌肉中邻苯二甲酸二甲酯(DMP)和邻苯二甲酸二乙酯(DEP)的高效液相色谱方法,进行初步的代谢动力学研究.血浆样品经液-液萃取,肌肉样品经液-液萃取和固相小柱处理后,以乙腈:水= 40:60(V/V)为流动相,流速1.0 mL/min,采用SHIMADZU ODS柱(150 mm×4.6 mm; i.d., 5 μm)色谱柱分离.测定鲫经口染毒后血浆和肌肉中DMP和DEP的浓度.结果表明,标准曲线线性范围为0.05～10.0 μg/mL,线性关系良好(r>0.99),定量限为0.05 μg/mL,回收率95%以上,日内变异系数和日间变异系数均低于15%.经口染毒48 h内,鲫血浆和肌肉中均能检测到DMP和DEP的残留.该法操作简便、快速、灵敏、准确,已经初步用于鲫血浆和肌肉中DMP和DEP的代谢动力学和残留研究.     

微生态制剂对糙海参生长、消化酶活性及水质的影响

以受精后24 h孵化出的糙海参(Holothuria scabra)耳状幼体为研究对象,探讨养殖水体不同微生态制剂对糙海参苗期生长、存活、消化道消化酶活性和养殖水体水质变化的影响。实验设5个处理组,每隔5 d分别向4个试验组育苗池泼洒乳酸菌(浓度为1×108cfu·mL-1)15g(G1)、芽孢杆菌(总菌数为5×109·g-1)10 g(G2)、光合细菌(浓度为1×1011cfu·mL-1)50 mL(G3)和复合菌(G4,包含光合细菌30 mL、乳酸菌10 g和芽孢杆菌3 g),对照组(C)不添加微生态制剂。实验结果表明:试验组的糙海参出苗体重显著高于对照组(P0.05),而G1的体重明显大于其余试验组(P0.05),G3和G4之间的差异不显著(P0.05);成活率由高到低依次为G4、G3、G2、C、G1,其中G2和C之间差异不显著(P0.05),其余组之间差异显著(P0.05)。微生态制剂的添加还能不同程度地影响糙海参苗体消化道的蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶活性,G3和G4的蛋白酶和淀粉酶活性显著高于其它组(P0.05),两组之间差异不显著(P0.05);G1和G4的纤维素酶活性显著高于其它组(P0.05),两组之间差异不显著(P0.05)。各试验组苗池水质的氨氮、亚硝酸盐和COD值分别在实验第10天、20天和30天显著低于对照组,微生态制剂对糙海参苗期养殖池的总磷(TP)影响不大(P0.05)。研究结果表明,糙海参育苗池中泼洒微生态制剂可以促进幼体的生长,提高消化酶活性和成活率,并有改善育苗水体水质的作用。     

微生物制剂对养殖池塘细菌群落影响的PCR-DGGE分析

为了解微生物制剂在水产养殖环境修复中的作用机制,采用聚合酶链式反应—变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)方法,研究不同微生物制剂对养殖池塘上覆水和沉积物中细菌群落的影响。结果显示,施用微生物制剂前后,试验塘上覆水样品中细菌的DGGE优势条带无明显变化,细菌群落组成没有明显差异,提示微生物制剂对试验塘上覆水中的细菌群落组成影响很小。相对而言,施用过微生物制剂的池塘相对于对照池塘其细菌群落结构发生的变化较大;泼洒EM菌原粉3 000 g/hm2加芽孢杆菌原粉750 g/hm2的试验塘沉积物中细菌群落2 d内发生了较大变化,之后相对稳定,对照池塘和泼洒EM菌原粉3 000 g/hm2加光合细菌原粉1 500 g/hm2的试验塘沉积物中细菌群落组成变化很小。     

污染严重的海带配子体分离纯化

针对海带(Saccharina japonica)配子体保存过程中严重污染材料的分离纯化进行研究。(1)液相培养分离纯化法:将克隆材料经超声波细胞粉碎仪打碎后重新附着到90 mm培养皿中,利用微毛细吸管在显微镜下分离出状态好且无菌丝附着的细胞段,继续保存。(2)固相培养分离纯化法:将克隆材料4 000 r/min离心5～10 min,弃上清,加灭菌PESI培养液重新悬浮藻液,利用5 mL无菌注射器吸取2 mL粉碎后的配子体细胞,逐点注射入固相平板上,接种后利用Parafilm封口膜密封培养皿,平板培养约60～120 d后观察,将未长出菌落且藻斑直径达2 mm的克隆团挑出,然后在PESI液体培养基中复苏继续保存。     

富集光合细菌培养基的优化研究

采用正交实验设计,对一种富集光合细菌的培养基进行优化,试验结果表明酵母膏和NaHCO3在培养基中的浓度对富集红螺菌科的光合细菌有显著的影响。若以达到相同生长量(OD660值)做指标,应用优选出来的培养基进行富集比原培养基要提前5～6d。     

一株光合细菌对养殖水体净化效果的研究

以一株自筛选的光合细菌为试验对象,通过设置不同浓度处理组(菌液添加浓度分别为7.5×10~2、1.5×10~3、3×10~3、6×10~3、9×10~3、1.2×10~4、1.5×10~4 cell/mL),并以无添加组为空白对照,检测其对罗非鱼池塘水体中的化学需氧量(COD)及氨态氮(NH~+_4-N)、亚硝态氮(NO~-_2-N)含量的影响,研究其对水产养殖水质的净化效果。试验周期为9 d。结果显示:各处理组水体的COD随着试验时间的延长先降低后升高,NH~+_4-N含量随着时间的延长先上升后下降,NO~-_2-N含量随着时间的延长逐渐升高。结果表明,该光合细菌以1.5×10~3～3×10~3 cell/mL施用时,可以有效降低养殖水体的COD和NH~+_4-N含量,但是对于NO~-_2-N没有降解或清除作用。     

鱼体内环境激素DMP和DEP的检测方法

建立同时检测鲫(Carassuys auratus Linnaeus)血浆和肌肉中邻苯二甲酸二甲酯(DMP)和邻苯二甲酸二乙酯(DEP)的高效液相色谱方法,进行初步的代谢动力学研究。血浆样品经液-液萃取,肌肉样品经液-液萃取和固相小柱处理后,以乙腈∶水=40∶60(V/V)为流动相,流速1.0mL/min,采用SHIMADZU ODS柱(150mm×4.6mm;i.d.,5μm)色谱柱分离。测定鲫经口染毒后血浆和肌肉中DMP和DEP的浓度。结果表明,标准曲线线性范围为0.05~10.0μg/mL,线性关系良好(r>0.99),定量限为0.05μg/mL,回收率95%以上,日内变异系数和日间变异系数均低于15%。经口染毒48h内,鲫血浆和肌肉中均能检测到DMP和DEP的残留。该法操作简便、快速、灵敏、准确,已经初步用于鲫血浆和肌肉中DMP和DEP的代谢动力学和残留研究。     

鱼诺卡氏菌培养条件及培养基的优化

对鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolea)ZJ0503的增菌培养基和生长条件进行优化。研究了温度、盐度、初始pH对鱼诺卡氏菌生长的影响,并通过单因素试验对培养基的碳源、氮源和无机盐成分进行了筛选,采用正交试验法对培养基各主要成分的添加量进行了优化。结果表明,鱼诺卡氏菌最适宜生长条件为温度25℃、盐度5、pH 6.5±0.2;经筛选,鱼诺卡氏菌培养基中最佳碳源是葡萄糖,最佳氮源是酵母粉,促生长作用最强的2种无机盐是磷酸氢二钾(K2HPO4)和氯化钙(CaCl2);确立了培养基优化配方为葡萄糖20 g·L-1,酵母粉15 g·L-1,K2HPO40.75 g·L-1,CaCl20.2 g·L-1(单独灭菌),氯化钠(NaCl)5 g·L-1,pH 6.5±0.2。     

臭氧,光合细菌综合生物效应对提高工业化罗氏沼虾育苗的应用

臭氧处理育苗用水,科学配合投放光合细菌所产生的综合生物效应对提高罗氏沼虾高密度工业化育苗量的试验,获单位育苗量每m~35.2万尾,同时显示出苗壮、无病害的优点。方法:5—7d投放1—1.5g/m~3臭氧处理育苗用水,并施加10ppm浓度光合细菌。