核基质结合区与转基因植物的基因表达

核基质结合区(matrixattachmentregions,MARs)是真核细胞染色质中能与核基质结合的一段DNA序列.当MARs位于外源基因两侧时,能够使转基因植株高效、稳定表达,说明MARs是消除植物转基因沉默的一条可行途径.本文综述了MARs的研究进展,认为MARs的研究与利用对获得高效、稳定的转基因禾谷类作物具有重要的意义.     

人孕酮受休激素结合区基因表达产物的检测与制备

ＰｕＰＲ为含有编码人孕激素受体（ｈＰＲ）激素结合区（ＬＢＤ）基因（６３１－９３３氨基酸）的ｐＵＣ１９重建质粒,在其宿主Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（ＢＬ２１）中,经１ｍｍｏｌ／Ｌ的ＩＰＴＧ诱导,该转化的细菌产生一Ｃ端为６×Ｈｉｓ结尾的蛋白质,分子量４５ＫＤ。该表达产物可利用Ｎｉ－ＮＴＡ ＨＲＰ在ｎｇ水平用Ｗｅｓｔｅｍ印迹检测,并可通过亲和层析的方法,利用Ｈｉｓ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｒｅｓｉｎ（Ｎｉ     

转基因下游MAR在稳定转化的CHO细胞中对基因表达的调控作用

[目的]探讨转基因下游MAR在稳定转化的CHO细胞中对基因表达的调控作用。[方法]将PCR扩增得到的人β-珠蛋白MAR插入到真核表达载体pCATG的下游,构建转基因表达盒3’端含MAR的表达载体。酶切鉴定正确后,转染CHO细胞,G418筛选出稳定转化的细胞株,ELISA分析转基因的表达水平,半定量PCR分析转基因相对拷贝数。[结果]结果表明,表达盒3’端含MAR序列能使转基因表达水平降低,其基因拷贝数则有一定程度的增加。转基因下游β-珠蛋白MAR在一定程度上能抑制外源基因的表达水平;外源基因表达量与基因拷贝数不成正比,未呈现出“拷贝数依赖性”。[结论]该研究结果为进一步研究MAR的调控机制奠定基础。     

人孕酮受体激素结合区基因表达产物的检测与制备

PuPR为含有编码人孕激素受体（hPR）激素结合区（LBD）基因（631-933氨基酸）的pUC19重建质拉,在其宿主Escherichiacoli（BL21）中,经1mmol/L的IPTG诱导,该转化的细菌产生一C端为6×His结尾的蛋白质,分子量45KD。该表达产物可利用Ni-NTAHRP在ng水平用Western印迹检测,并可通过亲和层析的方法,利用His－bindingresin（Ni树脂）从菌体的裂解液中方便地回收到该蛋白质。     

转基因猪外源hDAF基因表达产物的功能研究

应用微量淋巴细胞毒方法对转ｈＤＡＦ基因猪外源基因表达产物的功能进行了初步研究。结果表明：外源ＨＤＡＦ基因在猪淋巴细胞上的表达产物具有生物学功能，活细胞数与总细胞数之比最高者达４４．４４％，从而为转ｈＤＡＦ基因猪的检测提供了一个新方法。     

提高植物疫苗外源蛋白表达量的研究进展

综述了在转基因植物中实现外源基因高效表达的多种途径,其中包括启动子优化,添加5-′3-′非翻译序列,使用增强子,对目的基因进行改造与优化,消除位置效应,内含子在增强基因表达方面的应用,重组蛋白的细胞定位。     

增强外源基因在转基因植物中表达的策略

在转基因研究和生产应用中,人们往往期待目的基因能在转基因生物中高效表达从而实现相关目的--获得具有对杀虫剂、除草剂高抗性的农作物,或以植物作为生物反应器生产具有高附加值的疫苗、抗生素等医药用品以及工业用蛋白、酶类等。综述了各种用于增强外源基因表达效率的策略,从外源基因的整合、转录水平的调节以及外源基因翻译后的蛋白分选三个水平阐述提高外源基因表达的相关策略的利弊,从而为转基因研究提表达供载体构建方面的参考依据。     

DNA甲基化调节转基因动物外源基因表达的研究进展

近20年来,动物转基因技术取得了迅猛发展,利用多种转基因手段已经获得了不同的转基因动物。然而,在转基因动物制备过程中,各种转基因方法仍然存在不同的优缺点,需要进一步研究的关键内容之一就是如何提高转基因效率以及目的基因的表达。目前,随着转基因技术研究的深入和表观遗传学的发展,人们开始对转基因动物外源基因表达的表观调控机制产生了兴趣。本文对DNA甲基化修饰与转基因动物外源基因表达调控的有关机制进行了综述,并就其未来的发展趋势进行了展望。     

自然昆虫传粉转Bt基因棉花核质不育系的主要性状研究

研究了昆虫自然传粉条件下转Bt基因棉、常规棉核质不育系及其相应同核异质保持系的主要经济性状。结果表明 :不育系的单株成铃、衣分、霜前籽棉和皮棉产量极显著低于保持系 ,子指显著高于保持系 ;转Bt基因不育系的单铃重显著低于保持系 ,霜前种子产量差异不明显 ;转Bt基因不育系霜前种子产量极显著高于常规不育系 ;转Bt基因不育系昆虫自然授粉率比常规不育系大幅提高。     

一段烟草核基质结合区的分离及对转基因表达的效果

 采用PCR方法，从烟草基因组中分离了一段核基质结合区（matrix attachment region，MAR），将其构建到β-葡糖醛酸酶（β-glucuronidase，GUS）基因（uidA）的两侧翼，形成MARs调控的植物表达载体，将此表达载体与不含MARs序列的植物表达载体通过农杆菌转化烟草。对转基因植株进行GUS活性定量测定，结果表明，MAR可以提高外源uidA基因的表达水平，与不含MAR的转化植株相比，外源基因的平均表达水平提高了1.5倍，最高达6倍，但MAR的引入不能降低转基因植株个体间表达水平的差异。     

Expression of an Episomal Vector in Developing Chicken Embryo and Chicks

The domesticated chicken has important roles in basic and applied research. The vector based on scaffold matrix attachment region （S/MAR） appears to be sufficient to maintain long-term expression in an episomal state in various mammalian cells. To explore the practical use of episomal vector in transgene technology of agricultural chickens, we fused the S/MAR of the human r-interferon gene into the pEGFP vector and transduced it into chickens by sperm-mediated gene transfer （SMGT）. PCR detection indicated the positive rate of transgene chickens was 60%. The RT-PCR detection and fluorescence observation confirmed the expression of the GFP and indicated the existence of the GFP during the chicken embryogenesis and fetal development. The PCR detection and rescue experiments confirmed the episomal state of the pEPI-EGFP in chick embryos and chicks. These results showed that the S/MAR-based vector could function properly in chicken embryos and was a practicable tool combined with the SMGT to study the development of chickens.     

Expression profiling of transgenes (Cry1Ac and Cry2A) in cotton genotypes under different genetic backgrounds

Transgenic cotton carrying the CrylAc gene has revolutionized insect pest control since its adoption,although the development of resistance in insect pests has reduced its efficacy.After 10 years of cultivating Bacillus thuringiensis(Bt) cotton with a single Cry1 Ac gene,growers are on the verge of adopting Bt cotton that carries the double gene(Cry1 Ac+Cry2 A) due to its better effectiveness against insect pests.Thus,the current study was designed to evaluate the role of each gene in the effect...     

甘蓝短散布元件对转基因表达效果的研究*

 为检验甘蓝短散布元件（SINE）对植物转基因表达的影响,采用PCR方法,从甘蓝基因组中克隆了一段短散布元件序列（Short Interspersed Nuclear Element,SINE）,该SINE具有核基质结合区（matrix attachment region,MAR）的结构特征,将其构建到β-葡糖醛酸酶（β-glucuronidase,GUS）基因（uidA）的两侧翼,形成SINE调控的植物表达载体,采用农杆菌介导法,将含SINE序列和不含SINE序列的植物表达载体导入烟草中。对转基因植株进行GUS活性定量测定,结果表明,SINE表现出类似MAR的功能,可以提高外源uidA基因的表达水平,与不含SINE的转化植株相比,外源基因的平均表达水平提高了2倍,但转基因植株个体间表达水平存在较大的差异。     

甘蓝短散布元件对转基因表达效果的研究

为检验甘蓝短散布元件(SINE)对植物转基因表达的影响,采用PCR方法,从甘蓝基因组中克隆了一段短散布元件序列(Short Interspersed Nuclear Element,SINE),该SINE具有核基质结合区(matrix attachmentregion,MAR)的结构特征,将其构建到β-葡糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUS)基因(uidA)的两侧翼,形成SINE调控的植物表达载体,采用农杆菌介导法,将含SINE序列和不含SINE序列的植物表达载体导入烟草中。对转基因植株进行GUS活性定量测定,结果表明,SINE表现出类似MAR的功能,可以提高外源uidA基因的表达水平,与不含SINE的转化植株相比,外源基因的平均表达水平提高了2倍,但转基因植株个体间表达水平存在较大的差异。     

合浦珠母贝不同壳基质蛋白基因的表达水平比较

采用荧光定量PCR 技术分析了不同壳基质蛋白基因之间的表达水平差异,组织表达特征以及育珠对表达水平的影响。结果显示,msi31,aspein,msi7 基因只在外套膜组织中表达;nacrein 和n19 基因除在外套膜表达外,在珍珠囊中也有表达;而accbp 在外套膜、闭壳肌、性腺、消化腺、腮和珍珠囊中都有表达,在外套膜中表达量最高,其次为性腺。accbp、msi31、msi7和nacrein基因在育珠贝和非育珠贝外套膜中的表达水平有显著性差异,aspein与n19 无显著性差异;其中msi31 基因在育珠贝外套膜的表达量上调,accbp尧msi7与nacrein 下调。不论在育珠贝还是非育珠贝的外套膜组织中,msi31的表达水平最高,n19 最低;但在珍珠囊中n19的表达量最高,且远高于在外套膜中的表达水平。     

鲤春病毒血症病毒基质蛋白基因的原核表达及多克隆抗体的制备

根据鲤春病毒血症病毒(SVCV)基因组序列(GenBank:NC_002803),人工合成M基因开放阅读框序列,克隆至原核表达载体pET-32a(+),转化工程菌株BL21 (DE3),在0.1 mmol·L-1 IPTG、37℃下诱导5h,获得高效表达的M蛋白,但其主要以包涵体的形式存在,经超声破碎、包涵体纯化后,再...     

马铃薯StERF3超量表达载体转基因植株矮化原因初探

基于马铃薯StERF3超量表达载体转基因株系中出现了部分矮化植株,通过基因表达量检测、组织切片分析和转基因试管苗添加外源生长调节剂等方面对矮化原因进行了初步探讨.结果表明:矮化株中StERF3基因表达比对照降低;矮化株木质部和薄壁细胞明显变小,栅栏组织和海绵组织较致密;培养基中添加0.5 mg/mL GA3能够使矮化株...     

高山离子芥冷诱导基因转化甘蔗二元植物表达载体构建

[目的]利用载体重组技术分别将高山离子芥冷诱导基因(Cbcor15a)和报告基因eGF插入载体pCambia1300-bar,并引入玉米泛素基因启动子UBi-1代替载体本身启动子CaMV 35s,重组为适合甘蔗转基因的二元植物表达载体pCambia 1300-cbcor 15a-bar.[方法]参照pCambia1300-bar载体多克隆位点和基因Cbcor15a、eGFP和启动子UBi-1的核苷酸序列设计引物,通过载体重组技术将基因和启动子分别插入相应的位点.利用基因枪分别将pCambia1300-bar载体和重组载体导入洋葱表皮细胞,用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察.[结果]与导入pCambia 1300-bar载体的洋葱表皮细胞相比较,导入重组载体pCambia1300-cbcor15a-bar的洋葱表皮细胞内有强烈的绿色荧光信号.[结论]重组甘蔗转基因二元植物表达载体启动子Ubi-1能够调控下游冷诱导基因Cbcor15a和报告基因eGFP的正常高效表达,为外源基因Cbcor15a转化甘蔗提供保障.