DON、ZEA联合染毒对体外培养鸡脾脏淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的影响

旨在研究DON、ZEA联合染毒对体外培养鸡脾脏淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的影响。DON、ZEA联合染毒剂量为0.012 5μg·mL~(-1)和0.006 25μg·mL~(-1)、0.050μg·mL~(-1)和0.025μg·mL~(-1)、0.2μg·mL~(-1)和0.1μg·mL~(-1)、0.8μg·mL~(-1)和0.4μg·mL~(-1),进行DON、ZEA联合染毒48 h对鸡脾脏淋巴细胞上清液IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ含量及其mRNA表达的影响。结果表明,各染毒组细胞上清液IL-10和IFN-γ蛋白含量,细胞内IL-2、IL-4和IL-10 mRNA水平随毒素剂量的升高而增加(P0.01);各染毒组细胞上清液IL-2和IL-4蛋白含量均随毒素浓度的升高而降低(P0.01);细胞内IFN-γmRNA表达量均随毒素浓度的升高而先升高后降低(P0.01)。DON、ZEA联合染毒导致细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ分泌失衡,且呈剂量依赖性;DON、ZEA联合染毒鸡脾淋巴细胞上调或下降促炎性细胞因子的水平;Th1和Th2细胞因子平衡失调,因此造成细胞免疫损伤,从而对细胞产生毒性。     

银杏叶提取物对体外培养的肉仔鸡脾脏淋巴细胞 增殖及分泌IL-2的影响

为研究银杏叶提取物(EGB)对体外培养的肉仔鸡脾脏淋巴细胞增殖及分泌白介素-2(IL-2)的影响,将不同质量浓度的EGB分别加入到体外培养的由伴刀豆球蛋白A(ConA)诱导的肉仔鸡脾脏淋巴细胞中,培养24 h、48 h和72 h后,再分别采用MTT法、ELISA法测定淋巴细胞增殖的变化和IL-2的分泌量。结果显示,质量浓度为3.33、6.67、13.33、20.00、26.67和33.33 mg.mL-1的EGB能显著促进由ConA诱导的肉仔鸡脾脏淋巴细胞增殖和分泌IL-2(P0.05),其中质量浓度为20.00 mg.mL-1的EGB作用效果较好,表明EGB在体外能促进由ConA诱导的肉仔鸡脾脏淋巴细胞增殖和分泌IL-2。     

板蓝根多糖对体外培养的猪脾脏淋巴细胞增殖及分泌细胞因子和NO的影响

用MTS比色法测定了不同质量浓度的板蓝根多糖对体外培养的猪脾脏淋巴细胞增殖的影响,分别用ELISA法和硝酸还原酶法测定了板蓝根多糖对猪脾脏淋巴细胞分泌IL-2,IL-4,IFN-γ和NO的影响.结果表明,板蓝根多糖能显著促进猪脾脏淋巴细胞的增殖.同时又能协同ConA或LPS诱导的猪脾脏淋巴细胞增殖(P<0.05);能显著促进由ConA诱导的猪脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ,抑制IL-2的分泌,对IL-4分泌的影响不明显;低剂量板蓝根多糖能显著促进NO的分泌(P<0.01).     

亚硒酸钠对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖及细胞因子分泌的影响

[目的]研究亚硒酸钠对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖及脾脏淋巴细胞中细胞因子分泌的影响,进而探讨亚硒酸钠调节机体免疫可能的作用途径。[方法]从BALB/c小鼠脾脏中分离淋巴细胞,采用MTS法检测不同浓度(0、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)和10~(-5) mol/L)的亚硒酸钠培养基培养48 h后的淋巴细胞增殖率并筛选出最适浓度的亚硒酸钠进行脾脏淋巴细胞培养,最后采用ELISA法检测培养48 h后培养液中IFN-γ、IL-1β、IL-4和IL-6的分泌量。[结果]与对照组相比,10~(-7) mol/L亚硒酸钠处理使淋巴细胞增殖率显著提高,且培养液中IFN-γ、IL-1β、IL-4和IL-6的分泌量分别为对照组的10.34、2.15、1.06和6.68倍(P<0.05)。[结论]亚硒酸钠可能通过调节脾脏淋巴细胞增殖和细胞因子的分泌来调节机体免疫功能。     

4种多糖对鸡淋巴细胞中IL-4、IFN-γ mRNA表达的影响

为了研究中药多糖增强免疫的作用和分子机理,用Primer Premier软件设计了1对白介素-04（IL-4）引物,1对干扰素-γ（IFN-γ）引物。从多糖辅助ConA刺激的鸡外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT—PCR技术扩增出目的基因片段,并对其进行了酶切鉴定和测序。用荧光定量PCR方法测定黄芪多糖（APS）、板蓝根多糖（IRPS）、山药多糖（CYPS）、牛膝多糖（ARPS）4种多糖对鸡外周血T淋巴细胞IL-4、IFN-γ的mRNA表达的影响。结果表明,合适剂量的APS、IRPS、ARPS和CYPS均能提高淋巴细胞IL-4、IFN-γ的mRNA表达水平,并且APS、IRPS的效果优于ARPS、CYPS,这可能是多糖增强机体免疫的分子机制之一。     

DON、ZEA及其联合作用对小鼠T淋巴细胞活化及MAPK信号通路的影响

为揭示脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEA)及其联合作用的免疫抑制机制,试验研究霉菌毒素DON、ZEA单独及联合染毒对小鼠离体脾脏淋巴细胞活性、T淋巴细胞活化及其MAPK信号通路的影响。以小鼠原代混合淋巴细胞为材料,以刀豆蛋白A (Con A)为混合淋巴细胞活化刺激剂,设ZEA、DON单独及联合染毒组, CCK-8法检测不同毒素组处理细胞24 h后细胞活性的变化;流式细胞术检测T淋巴细胞活化标识分子CD25以及共刺激分子CD278(ICOS)的表达情况; Western blot检测T淋巴细胞内MAPK通路相关蛋白ERK、JNK、p38等表达情况。结果表明:与细胞对照组相比, Con A组混合淋巴细胞相对存活率极显著上升;与Con A组相比, ZEA或DON单染组及联合染毒组细胞相对存活率显著或极显著下降。与对照组相比, Con A组CD4~+CD25~+/CD4~+及CD4~+CD278~+/CD4~+比例均极显著上升;与Con A组相比, ZEA、DON及联合染毒组CD4~+CD25~+/CD4~+比例均极显著下降, CD4~+CD278~+/CD4~+比例均不同程度下降,染毒浓度越高下降越明显。此外,不同浓度毒素处理组对T淋巴细胞MAPK通路相关蛋白ERK、JNK、p38等表达均有促进作用。这一研究提示, DON、ZEA及其联合可通过抑制CD25、CD278(ICOS)的表达来干扰T淋巴细胞的活化过程, DON、ZEA及其联合作用通过对MAPK信号通路的影响调控T淋巴细胞的存活。     

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-12 mRNA表达量的影响

【目的】中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-12 mRNA表达量的影响。【方法】采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为100、75、50、0μg/mL中药复方多糖共培养24 h,收集细胞,采用Real-time PCR方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量。【结果】(1)与对照组相比,不同剂量中药复方多糖均能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量(P0.05)。(2)中药复方多糖剂量为50μg/mL时,AA、BC基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量最高,中药复方多糖剂量为100μg/mL时,BB基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量最高。【结论】中药复方多糖能不同程度的促进各MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12 mRNA的表达,且不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量不同。     

胸腺素α1对离体培养的鸡脾脏淋巴细胞分泌功能及基因表达的影响

采用MTT比色法、RIA法和相对半定量RT-PCR法分别研究了不同浓度的人工合成胸腺素α1(Tα1)对离体培养的鸡脾脏淋巴细胞增殖转化、白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素6(IL-6)分泌及基因表达的影响. 结果表明,采用1和10 μg·mL-1的Tα1处理细胞36 h,能显著增加由ConA诱导24 h的脾脏淋巴细胞的增殖转化率,显著提高细胞培养上清液中IL-2的含量(P<0.05),而对IL-6的分泌无显著影响(P>0.05);同时发现,在10 μg·mL-1 Tα1处理淋巴细胞36 h后用ConA诱导12 h,对淋巴细胞IL-2和IL-6基因的表达无显著影响(P>0.05). 提示Tα1可通过促进IL-2的分泌,进而促进脾脏淋巴细胞增殖转化,而且其可能主要在基因转录后翻译水平上对IL-2分泌发挥影响.     

中药多糖对体外培养猪脾脏淋巴细胞转化功能的影响

为选择具有免疫增强活性的中药多糖及其最佳作用剂量,用淋巴细胞转化试验测定了不同浓度的紫锥菊多糖(EPPS)、板蓝根多糖(IRPS)、黄芪多糖(APS)、山药多糖(CYPS)和牛膝多糖(ABPS)等5种中药多糖对体外培养猪脾脏淋巴细胞增殖功能的影响.结果表明,EPPS,IRPS,APS,CYPS,ABPS均能显著地直接或协同LPS,ConA诱导的猪脾脏淋巴细胞增殖(P<0.05);5种多糖促进猪脾脏淋巴细胞增殖的作用与多糖浓度密切相关,且不同多糖促进淋巴细胞增殖的最佳剂量不同.     

镉对体外培养鸡脾淋巴细胞膜蛋白组分影响的研究

以分组对比的方法(加镉组、对照组)研究镉对体外培养的鸡脾淋巴细胞膜蛋白组分的影响。通过体外分离培养鸡脾淋巴细胞,加镉组在培养体系中加入终度为10μmoL/L氯化镉,而对照组加入同体积10.0mmoL/L的PBS,分别培养12、24、36、48和72h后收集细胞,提取膜蛋白,用SDS-PAGE的方法对膜蛋白组分进行分析。结果表明:区带Ⅲ、Ⅳ、Ⅶ蛋白的百分含量变化不明显;区带Ⅰ和区带Ⅷ蛋白的百分含量呈增加趋势,区带Ⅱ、区带Ⅴ和区带Ⅸ蛋白的百分含量降低,而且在48和72h加镉组的电泳图前沿出现了高分子聚合物,分子量为70900.00。可以得出镉对体外培养的鸡脾淋巴细胞的膜蛋白组分产生损伤的结论。     

施肥对菜地土壤、蔬菜、径流中δ15N组成的影响

为了解施肥对蔬菜地土壤、蔬菜和地表水体中δ¹⁵N丰度的影响,选择2012至2018内施用不同肥料的28块蔬菜地（包括13块施用化肥蔬菜地、8块施用畜禽粪蔬菜地和7块施用商品有机肥加化肥蔬菜地）,采样分析表层土壤、蔬菜地上部分和地下部分及地表径流样的δ¹⁵N丰度。结果表明：施肥种类对土壤、蔬菜和地表径流中δ¹⁵N丰度均可产生显著影响,其丰度值由高至低依次为：畜禽肥>商品有机肥加化肥>化肥。蔬菜和地表水与土壤之间的δ¹⁵N丰度存在正相关。分析认为,蔬菜产品中氮同位素组成可以作为鉴定有机蔬菜的辅助依据,地表水体中δ¹⁵N丰度可作为水体中氮素污染源的指标。     

运输应激对猪脾脏IL-2、IL-6和IL-10 mRNAs表达的影响及其调控机制

【目的】探讨不同时间运输应激对猪脾脏中IL-2mRNA、IL-6mRNA、IL-10mRNA及其IL-2RmRNA、IL-6RmRNA表达的影响,并探讨P38MAPK-NF-κB信号途径对其表达的调控作用。【方法】将19头体重50kg左右的猪随机分为4组,分别进行0、1、2和4h公路运输,运输结束后立即扑杀取脾脏,液氮保存,用荧光定量PCR的方法对3种细胞因子及其IL-2RmRNA、IL-6RmRNA进行定量;另用ELISA方法检测试验猪脾脏组织匀浆液中P38MAPK含量的动态变化;激光扫描共聚焦显微镜观察NF-κB运输前后在脾脏细胞中的分布。【结果】经1、2和4h的运输应激后,脾脏中IL-10、IL-6及IL-6RmRNA的表达发生了显著的变化,P38MAPK变化不明显,NF-κB在脾脏中的表达是先上升,随后稍微下降,到4h时又升高并高于其它3个组;且NF-κB的入核率也呈现同样的变化趋势。【结论】运输应激可引起猪脾脏IL-6mRNA、IL-10mRNA和IL-6RmRNA表达的显著变化,且存在时效性;相关性分析表明,在所检测的3种细胞因子中,脾脏主要对运输过程中IL-6水平起重要的调节作用,结合细胞因子表达调控的信号机制表明,NF-κB可能对运输过程中猪脾脏相关细胞因子变化起重要的调控作用。     

运输应激对猪淋巴结IL-2、IL-6和IL-10及其受体mRNA转录的影响

为研究运输应激对猪肠系膜淋巴结中IL-2、IL-6、IL-10及其受体mRNA转录的影响,并探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和核因子κB(NF-κB)对其转录的调控作用,用荧光定量RT-PCR方法对肠系膜淋巴结中3种细胞因子及其受体mRNA进行定量检测,用ELISA方法检测猪肠系膜淋巴结组织匀浆液中P38MAPK含量的动态变化,用激光扫描共聚焦显微镜观察运输前后NF-κB在肠系膜淋巴结细胞中的分布。结果显示:经1、2和4 h的运输应激,肠系膜淋巴结中3种细胞因子的转录均发生了显著变化,且均是4 h时达到最大值,并极显著高于对照组、1 h组和2 h组(P<0.01),而其相应受体的变化趋势不同。NF-κB在肠系膜淋巴结细胞中的表达呈逐渐上升趋势,到4 h时达到最大,其入核率也是同样的变化趋势。运输应激过程中P38MAPK含量没有明显的变化。结论:运输应激可引起猪肠系膜淋巴结细胞因子及其受体mRNA转录的急剧变化,且存在时效性;NF-κB的激活是调控猪肠系膜淋巴结相关细胞因子变化的一个重要因素。     

PjFPS和Pjβ-AS双基因协同作用对珠子参皂苷生物合成的影响

法尼基焦磷酸合酶(PjFPS)和β-香树脂醇合酶(Pjβ-AS)是珠子参皂苷(Panax japonicus saponins,PJS)生物合成途径中可能的关键酶。通过在珠子参(P.japonicus)细胞中同时过表达PjFPS和Pjβ-AS基因,探讨PjFPS和Pjβ-AS对PJS生物合成的协同作用。结果表明,PjFPS和Pjβ-AS是PJS生物合成途径中的关键酶基因,对珠子参皂苷的生物合成具有调节作用。过表达PjFPS和Pjβ-AS的细胞系中,PJS合成途径相关的多个关键酶基因的表达水平有不同程度的提高,且PJS的含量最高为普通细胞系的2.4倍。虽然单独过表达PjFPS也可增加PJS的合成,但双基因(PjFPS和Pjβ-AS)协同调控PJS合成的效果更好。     

乳酸菌对Caco-2细胞分泌APRIL和IL-10的影响

【目的】通过检测促炎细胞因子APRIL和抗炎细胞因子IL-10的分泌水平来观察屎肠球菌和乳酸乳球菌对肠上皮细胞先天性免疫应答的调节作用。【方法】Caco-2细胞分别和PBS（CT组,阴性对照组）、Escherichia coli K88（EC组,阳性对照组）,Enterococcus faecium（EF组）或Lactococcus lactis（LL组）共孵育2 h,以及先分别和Enterococcus faecium或Lactococcus lactis共孵育1 h,再和Escherichia coli K88共孵育2 h（EF-EC组和LL-EC组）。试验结束时,用ELISA方法检测细胞培养上清中APRIL和IL-10的含量。【结果】结果表明,2株乳酸菌都促进正常状态下的肠上皮细胞分泌促炎细胞因子APRIL和抗炎细胞因子IL-10,抑制Escherichia coli K88对APRIL分泌的诱导作用,促进Escherichia coli K88感染的肠上皮细胞分泌IL-10。【结论】体外试验条件下,屎肠球菌和乳酸乳球菌能够诱导肠上皮细胞产生先天免疫应答,分泌APRIL和IL-10,抑制大肠杆菌K88引起的促炎反应,表现出抗炎作用。     

小麦TaeEF1β基因的克隆、同源性及表达分析

真核翻译延伸因子(eukaryotic translation elongation factor,eEFs)是一种重要的多功能调控蛋白,eEF1β是eEF1的组成部分,在蛋白质生物合成过程中发挥着重要的作用。本文通过RT-PCR扩增克隆小麦(Triticum aestivum L.)的eEF1β基因,并命名为TaeEF1β。氨基酸同源性分析发现,TaeEF1β具有高度保守性,且其保守结构域位于137~226 aa处。qRT-PCR结果表明,中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)侵染小麦植株后,可以诱导TaeEF1β基因转录水平的上调表达。另外,本文也进一步分析了TaeEF1β基因在小麦根、茎、叶的表达水平和CWMV侵染不同时间点的表达情况。     

CD58及雌酮对妊娠早期山羊EML分泌IL—2及IL—4的影响

将妊娠17d山羊子宫内膜淋巴细胞(EML)放入含不同剂量PHA-P,CD58和雌酮的介质中进行体外培养,并分别用生物学方法和双抗体夹心ELISA法测定培养上清液中IL-2和IL-4的水平。结果表明,CD58和雌酮处理组EML分泌的IL-2水平低,与细胞对照组差异不显著,并显著低于PHA-P处理组。3个浓度CD58处理组IL-4分泌水平高达5.40～6.36ng/mL,高浓度雌酮处理组IL-4分泌量也达到4.77ng/mL,与细胞对照组差异均极显著,而且CD58能以剂量依赖方式促进EML对IL-4的分泌。     

氮磷钾配施对戈壁日光温室基质槽培番茄产量和品质的影响

【目的】研究氮、磷、钾肥配施对戈壁日光温室有机基质槽培番茄产量和品质的影响,以探明基质槽培番茄高产优质的适宜氮、磷、钾施用量及配比。【方法】在戈壁日光温室有机基质槽培条件下,以番茄品种吉诺比利为试材,采用氮磷钾3因素5水平正交旋转组合设计,共计20个处理,测定不同施肥处理番茄的产量与品质,然后以氮、磷、钾肥施用量的编码值为自变量,番茄的产量与品质综合评分为因变量进行二次多项式回归分析,得到氮、磷、钾肥与番茄产量和品质之间的回归模型,在此基础上,对氮、磷、钾肥进行主效因子、单因子以及互作效应分析,最终确定了番茄高产优质的氮、磷、钾肥施用量及配比。【结果】建立了氮、磷、钾肥施用量编码值与番茄产量和品质综合评分之间的回归模型,经F检验可知回归关系达极显著水平。主效因子分析结果显示,3种肥料因子对番茄产量和品质的影响均以氮肥最大,钾肥次之,磷肥较小,表明氮是影响戈壁日光温室有机基质槽培番茄产量和品质的首要因素。单因子效应分析结果显示,随着氮、磷、钾施肥量的增加,番茄产量和品质综合评分均先增加后降低。互作效应分析结果显示,氮磷、磷钾、氮钾之间的互作效应对番茄产量的影响达到了极显著水平。利用模型决策分析表明,戈壁日光温室秋冬茬基质槽培番茄目标产量大于80 000 kg/hm²时的施肥方案为：N 284~367 kg/hm²,P₂O₅ 173~228 kg/hm²,K₂O 437~566 kg/hm²;番茄品质综合评分超85分的优化施肥方案为：N 311~407 kg/hm²,P₂O₅ 221~291 kg/hm²,K₂O 454~592 kg/hm²。【结论】戈壁日光温室有机基质槽培番茄产量大于80 000 kg/hm²、品质综合评分超85分的施肥方案为：N 311~367 kg/hm²,P₂O₅ 221~228 kg/hm²,K₂O 454~566 kg/hm²,适宜的 N、P₂O₅、K₂O施用量之比约为1∶0.66∶1.50。     

氮磷钾肥与络氨铜配施对抗虫棉产量,品质及棉株养分的影响

采用均匀设计,研究了氮磷钾肥与络氨铜配施对抗虫棉产量、纤维品质及主茎叶氮磷钾铜养分的影响。结果表明：氨磷钾肥是主要的影响因素;肥铜配施有利于皮棉产量、纤维整齐及度及纤维伸长率的提高,并能提高主茎叶的磷素含量,磷氮比及磷素吸收量。采用频数分析法,模拟出本地上等肥力水平条件下,具有９５％置信度每公顷产皮棉１５００ｋｇ以上的优化方案是：每公顷施Ｎ３０２．２０～３５８．４５ｋｇ,Ｐ２Ｏ５ １２０．８８～１