尼罗罗非鱼不同品系间mtDNA D-loop差异分析

通过PCR扩增获得尼罗罗非鱼88品系(XH)、99品系(AN)和吉富品系(GF)3个主要养殖品系共95尾鱼的mt DNA D-loop序列,并进行碱基测序及对比分析,探究3个品系在遗传结构信息、保种现状和选育潜力的差异。结果表明:13个品系个体序列片段长度为550~556 bp,包括111个变异位点,其中转换、颠换、插入/缺失数依次为65、34、12,多态位点比例为18.64%。23个品系共有27个单倍型,XH、AN、GF单倍型数依次为12、7、10,其中GF、AN共享1个单倍型,XH、GF共享1个单倍型,其他为各品系独有。3个品系的单倍型在NJ系统树上互相交叉,GF有2个单倍型在变异水平上形成独有的进化枝。33个品系间遗传分化指数均大于0.05,存在中等程度的遗传分化,其中XH与AN、XH与GF之间遗传漂变起主要作用,AN与GF之间基因流起主要作用。研究结果表明,目前选育的3个尼罗罗非鱼品系内遗传多样性水平较高;品系间存在中等程度的遗传分化,并具备高比例的独有单倍型,3个品系目前仍具备较高的选育潜力。     

不同品系尼罗罗非鱼生化遗传标志研究

用聚丙烯酰胺凝胶水平电泳分析了吉富、“埃及”、“７８”、“８８”及“美国”五个品系尼罗罗非鱼的生化遗传特征。不同品系尼罗罗非鱼在肝脏ＥＳＴ同工酶的表型上有明显差异。Ｅｓｔ－２谱带为吉富和“埃及”品系所特有，可作为与其他品系尼罗罗非鱼区分的遗传标志。     

不同品系尼罗罗非鱼生化遗传标志研究

用聚丙烯酰胺凝胶水平电泳分析了吉富、“埃及”、“７８”、“８８”及“美国”五个品系尼罗罗非鱼的生化遗传特征。不同品系尼罗罗非鱼在肝脏ＥＳＴ同工酶的表型上有明显差异。Ｅｓｔ－２谱带为吉富和“埃及”品系所特有,可作为与其他品系尼罗罗非鱼区分的遗传标志。     

吉富品系尼罗罗非鱼的选育效果分析

采用闭锁群体继代选育的方法对吉富品系尼罗罗非鱼(GIFT strain of Nile Tilapia)进行提纯选育,并利用选育获得的尼罗罗非鱼亲本作母本和奥利亚罗非鱼作父本进行杂交生产子一代,再对子一代开展网箱养殖对比试验,以养殖试验的结果来评价选育尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的效果。结果表明:(1)选留系后备♀亲本选留数量及留种率都有了很大的提高;(2)"吉奥"杂交组合的产苗量和雄性率都有了不同程度的提高;(3)经过选育的"吉奥"罗非鱼的生长性能优于对照组;生长速度增加明显;头部比例有变小的趋势;(4)试验组"吉奥"罗非鱼的主要经济指标均比对照组有所提高,而饵料系数比对照组有所下降。以上结果表明,"吉奥"罗非鱼的选育效果良好,可为"尼奥"罗非鱼的苗种生产提供亲本保障。     

吉富品系尼罗罗非鱼选育F6评估

报道了对吉富品系尼罗罗非鱼进行混合选择所产生的F6代的生长速度和尾鳍条纹的研究结果。在青岛和蚌埠两个试验站,同F5相比,F6的平均日增重率分别提高了2．5％和8．5％,体重变异系数分别降低了14．3％和11．0％;同对照组相比,F6的平均日增重率提高了29．5％,体重变异系数降低了16．4％。同时,在青岛和蚌埠两个试验站,F6尾鳍条纹清晰与整齐的比例从对照组的17．6％分别提高到了28．8％和38．9％。以上表明,吉富品系尼罗罗非鱼经六代选择仍保持一定的选择效应。另外,对一些影响选育效果评价的因子作了分析。     

吉富品系尼罗罗非鱼选育F6评估

报道了对吉富品系尼罗罗非鱼进行混合选择所产生的F6代的生长速度和尾鳍条纹的研究结果。在青岛和蚌埠两个试验站,同F5相比,F6的平均日增重率分别提高了2．5％和8．5％,体重变异系数分别降低了14．3％和11．0％;同对照组相比,F6的平均日增重率提高了29．5％,体重变异系数降低了16．4％。同时,在青岛和蚌埠两个试验站,F6尾鳍条纹清晰与整齐的比例从对照组的17．6％分别提高到了28．8％和38．9％。以上表明,吉富品系尼罗罗非鱼经六代选择仍保持一定的选择效应。另外,对一些影响选育效果评价的因子作了分析。     

不同尼罗罗非鱼尧奥利亚罗非鱼亲本群体的遗传特征分析

从86对尼罗罗非鱼遗传图谱标记中筛出17对种间差异性微卫星引物,分别对杂交亲本尼罗罗非鱼苏丹群体、新吉富群体、奥利亚罗非鱼以色列群体、茂名群体的遗传特征进行分析。结果表明,4个罗非鱼群体有效等位基因数：新吉富（2.8）>苏丹（2.72）、以色列（2.96）>茂名（2.6）;遗传杂合度：苏丹（0.73)>新吉富(0.68),以色列(0.89)>茂名(0.56);多态性含量：苏丹（0.58）>新吉富（0.51）,以色列（0.56）>茂名（0.52）,尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼分别以新吉富、茂名群体遗传多样性较低。尼罗罗非鱼与奥利亚罗非鱼群体间平均遗传距离为0.3057。尼罗罗非鱼苏丹群体与新吉富群体间的遗传距离为0.107。奥利亚罗非鱼以色列群体与茂名群体间的遗传距离为0.1268。尼罗罗非鱼苏丹群体与奥利亚罗非鱼茂名群体间的遗传距离最大。     

吉富品系尼罗罗非鱼选育F6-F8生长改良效果

吉富品系尼罗罗非鱼于1994年从菲律宾引进，1996年被农业部审定为良种。为进一步提纯复壮，从1996年起，以其为基础群体，在青岛、蚌埠和广州3个试验场进行系统选育。本文报道2004年在青岛试验场对其F8、F7及F6在生长性能方面所作的比较结果。     

吉富品系尼罗罗非鱼选育F_6-F_8生长改良效果

吉富品系尼罗罗非鱼于1994年从菲律宾引进,1996年被农业部审定为良种[1,2]。为进一步提纯复壮,从1996年起,以其为基础群体,在青岛、蚌埠和广州3个试验场进行系统选育[3-5]。本文报道2004年在青岛试验场对其F8、F7及F6在生长性能方面所作的比较结果。1材料与方法1.1试验材料1996     

吉富品系尼罗罗非鱼选育F6-F8生长改良效果

吉富品系尼罗罗非鱼于1994年从菲律宾引进,1996年被农业部审定为良种[1,2]。为进一步提纯复壮,从1996年起,以其为基础群体,在青岛、蚌埠和广州3个试验场进行系统选育[3-5]。本文报道2004年在青岛试验场对其F8、F7及F6在生长性能方面所作的比较结果。1材料与方法1.1试验材料1996     

吉富品系尼罗罗非鱼生长性能的选择响应分析

在流水池饲养环境里,对吉富品系尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)选育系F6～F9 4代鱼生长性能进行比较.153 d的试验结果表明.F6～F9 4代鱼绝对增重率分别为1.31、1.38、1.45、1.51g/d.其中,F9比F8提高4.14%,F8比F7提高5.07%,F7比F6提高5.34%,生长速度逐代提高的平均值为4.85%,与2004年研究得到F7比F6提高4.42%的结果相近.F6～F9 4代鱼体重变异系数分别为0.33、0.31、0.29、0.29.呈现出逐代降低的趋势.试验期间,F6～F9 4代鱼的雌鱼特定每天增重率分别为2.69%、2.73%、2.77%、2.78%,F6～F9 4代鱼雄鱼特定每天增重率分别为2.81%,2.85%,2.88%、2.90%,雌、雄鱼间差异显著(P<0.05).F6～F9 4代鱼的生长性能比较表明,吉富品系尼罗罗非鱼选育系生长性状的选择响应约4.85%.     

吉富品系尼罗罗非鱼选育系F6～F9遗传变异的RAPD分析

利用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对连续选育的吉富品系尼罗罗非鱼F6,F7、F8、F9R4个世代群体的遗传变异进行了分析。结果表明：（1）17条引物在4个世代的88尾个体间共检测到172个位点。（2）F6, F7,F8、F94世代的多态座位比例分别为：23．4％、21．1％、19．4％、18．3％,呈递减状态,U检验差别不显著（P〉0．05）;4世代的Nei遗传相似系数分别为：O．8961、0．9084,0．9186、0．9254,呈递增状态,t检验差别不显著（P〉0．05）;Shannon多样性指数分别为：0．1485、0．1314,0．1178、0．1083,呈递减状态,t检验差别不显著（P〉0．05）。（3）4世代间的遗传变异占群体总变异的比例是23．9％（Shannon多样性指数分析）和12．5％（AMOVA分析）。以上结果表明,4代选育虽未导致选育群体遗传多样性产生显著的差异,但却清楚地显示了逐代选育使选育系群体趋于纯化．选育系F8、F9世代已表现出较好的遗传稳定性。     

罗非鱼“粤闽1号”母本选育群体世代间遗传差异的微卫星分析

为了揭示罗非鱼粤闽1号母本——尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus的遗传背景及其选育群体世代间的遗传变异,采用13对荧光标记微卫星引物分析了罗非鱼粤闽1号母本3个不同选育世代(F2、F4和F6世代)的遗传多样性和遗传结构,并进一步分析了它们与高要(GY)、惠州(HZ)、茂名(MM)和无锡(WX)4个尼罗罗非鱼地理群体之间的遗传关系。结果表明:F2、F4和F6 3个选育世代的等位基因数、有效等位基因数、期望杂合度、Shannon指数和多态性信息含量等遗传多样性参数均呈现出随着选育世代增加而降低的趋势,但仍表现为高度多态性(PIC>0.5);4个尼罗罗非鱼地理群体的遗传多样性依次为GY群体> MM群体> HZ群体> WX群体,其中GY群体、MM群体和HZ群体的遗传多样性显著高于3个选育世代;随着罗非鱼粤闽1号母本的选育世代增加,世代间遗传距离(D_a)逐渐增大(F2～F4的D_a=0.155 6,F4～F6的D_a=0.375 7),遗传分化系数(F_(ST))也逐渐升高(F2～F4的F_(ST )=0.036 4,F4～F6的F_(ST )=0.111 1);在UPGMA系统进化树中,3个选育世代群体与HZ群体、GY群体聚为一支,说明它们的遗传背景相近;罗非鱼粤闽1号3个选育世代母本的与4个地理群体中的GY、HZ和MM群体之间遗传分化中等,与WX群体之间遗传分化较大。研究表明:罗非鱼粤闽1号母本的选育群体在选育过程中遗传多样性出现下降趋势,遗传分化不断加剧,F6与F2、F4遗传分化中等,但仍保持着较高遗传多样性,具有进一步选育潜力;4个尼罗罗非鱼地理群体中GY群体的遗传多样性最高,与选育群体F6的遗传距离适中(D_(a )<0.54),可作为潜在的引种群体与罗非鱼粤闽1号母本的选育群体进行杂交,从而提高其遗传多样性。     

罗非鱼"粤闽1号"母本选育群体世代间遗传差异的微卫星分析

为了揭示罗非鱼"粤闽1号"母本——尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus的遗传背景及其选育群体世代间的遗传变异,采用13对荧光标记微卫星引物分析了罗非鱼"粤闽1号"母本3个不同选育世代(F2、F4和F6世代)的遗传多样性和遗传结构,并进一步分析了它们与高要(GY)、惠州(HZ)、茂名(MM)和无锡(WX)4个尼罗罗非鱼地理群体之间的遗传关系.结果表明:F2、F4和F6 3个选育世代的等位基因数、有效等位基因数、期望杂合度、Shannon指数和多态性信息含量等遗传多样性参数均呈现出随着选育世代增加而降低的趋势,但仍表现为高度多态性(PIC>0.5);4个尼罗罗非鱼地理群体的遗传多样性依次为GY群体>MM群体>HZ群体>WX群体,其中GY群体、MM群体和HZ群体的遗传多样性显著高于3个选育世代;随着罗非鱼"粤闽1号"母本的选育世代增加,世代间遗传距离(Da)逐渐增大(F2～F4的Da = 0.155 6,F4～F6的Da=0.375 7),遗传分化系数(FST)也逐渐升高(F2～F4的FST = 0.036 4,F4～F6的FST= 0.111 1);在UPGMA系统进化树中,3个选育世代群体与HZ群体、GY群体聚为一支,说明它们的遗传背景相近;罗非鱼"粤闽1号"3个选育世代母本的与4个地理群体中的GY、HZ和MM群体之间遗传分化中等,与WX群体之间遗传分化较大.研究表明:罗非鱼"粤闽1号"母本的选育群体在选育过程中遗传多样性出现下降趋势,遗传分化不断加剧,F6与F2、F4遗传分化中等,但仍保持着较高遗传多样性,具有进一步选育潜力;4个尼罗罗非鱼地理群体中GY群体的遗传多样性最高,与选育群体F6的遗传距离适中(Da<0.54),可作为潜在的引种群体与罗非鱼"粤闽1号"母本的选育群体进行杂交,从而提高其遗传多样性.     

奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼的遗传标记

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分别对奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼及其杂交后代奥尼杂交鱼（尼罗罗非鱼♀×奥利亚罗非鱼♂）的５种组织（眼、脑、心、肌、肝）的ＭＤＨ酶谱进行了分析和比较,结果发现;罗非鱼不同组织的ＭＤＨ同工酶有明显的组织特异性。３种罗非鱼肌肉组织ＭＤＨ同工酶表现出种间差异,即细胞质型（ｓ－ＭＤＨ）在电泳时迁移率的不同可以作为鉴别奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼及其杂交种的遗传标记。     

罗非鱼“粤闽1号”母本选育群体世代间遗传差异的微卫星分析

为了揭示罗非鱼粤闽1号母本——尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus的遗传背景及其选育群体世代间的遗传变异,采用13对荧光标记微卫星引物分析了罗非鱼粤闽1号母本3个不同选育世代(F2、F4和F6世代)的遗传多样性和遗传结构,并进一步分析了它们与高要(GY)、惠州(HZ)、茂名(MM)和无锡(WX)4个尼罗罗非鱼地理群体之间的遗传关系。结果表明:F2、F4和F6 3个选育世代的等位基因数、有效等位基因数、期望杂合度、Shannon指数和多态性信息含量等遗传多样性参数均呈现出随着选育世代增加而降低的趋势,但仍表现为高度多态性(PIC>0.5);4个尼罗罗非鱼地理群体的遗传多样性依次为GY群体> MM群体> HZ群体> WX群体,其中GY群体、MM群体和HZ群体的遗传多样性显著高于3个选育世代;随着罗非鱼粤闽1号母本的选育世代增加,世代间遗传距离(D_a)逐渐增大(F2～F4的D_a=0.155 6,F4～F6的D_a=0.375 7),遗传分化系数(F_(ST))也逐渐升高(F2～F4的F_(ST )=0.036 4,F4～F6的F_(ST )=0.111 1);在UPGMA系统进化树中,3个选育世代群体与HZ群体、GY群体聚为一支,说明它们的遗传背景相近;罗非鱼粤闽1号3个选育世代母本的与4个地理群体中的GY、HZ和MM群体之间遗传分化中等,与WX群体之间遗传分化较大。研究表明:罗非鱼粤闽1号母本的选育群体在选育过程中遗传多样性出现下降趋势,遗传分化不断加剧,F6与F2、F4遗传分化中等,但仍保持着较高遗传多样性,具有进一步选育潜力;4个尼罗罗非鱼地理群体中GY群体的遗传多样性最高,与选育群体F6的遗传距离适中(D_(a )<0.54),可作为潜在的引种群体与罗非鱼粤闽1号母本的选育群体进行杂交,从而提高其遗传多样性。     

吉富品系尼罗罗非鱼选育系F6～F9遗传变异的RAPD分析

利用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对连续选育的吉富品系尼罗罗非鱼F6,F7、F8、F9R4个世代群体的遗传变异进行了分析。结果表明：（1）17条引物在4个世代的88尾个体间共检测到172个位点。（2）F6, F7,F8、F94世代的多态座位比例分别为：23．4％、21．1％、19．4％、18．3％，呈递减状态，U检验差别不显著（P〉0．05）；4世代的Nei遗传相似系数分别为：O．8961、0．9084,0．9186、0．9254，呈递增状态，t检验差别不显著（P〉0．05）；Shannon多样性指数分别为：0．1485、0．1314,0．1178、0．1083，呈递减状态，t检验差别不显著（P〉0．05）。（3）4世代间的遗传变异占群体总变异的比例是23．9％（Shannon多样性指数分析）和12．5％（AMOVA分析）。以上结果表明，4代选育虽未导致选育群体遗传多样性产生显著的差异，但却清楚地显示了逐代选育使选育系群体趋于纯化．选育系F8、F9世代已表现出较好的遗传稳定性。     

两个尼罗罗非鱼品系Hsp70基因序列比对分析

采用RT-PCR技术,对从美国和埃及引进的两个尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus品系(以下分别简称为美国尼罗和埃及尼罗)热休克蛋白70(Heat shock proteins 70,Hsp70)基因进行扩增并克隆测序。获得两个品系罗非鱼Hsp70基因完整编码区(code sequences,CDS)cDNA序列,全长为1 923 bp,编码为640个氨基酸,含有Hsp70家族3个签名序列DLGTTYS、IFDLGGGTFD和VVLVGGSTRIPKIQK,以及C末端保守序列EEVD,核定位信号标签KRKHKKDISQNKRALRR;Dank特征基序DLGTT-S-V;胞质Hsp70特征基序EEVD;靠近C端的GGMP4肽序列;2个糖基化位点NKSI和NVSA。结合BLAST分析结果,可以确认,获得的cDNA序列为美国尼罗和埃及尼罗两个品系罗非鱼的完整编码序列。序列同源性分析表明,美国尼罗和埃及尼罗有3个氨基酸位点和12个核苷酸位点不同,美国尼罗Hsp70基因氨基酸序列与莫桑比克罗非鱼同源性最高为99.7%,而与家鼠同源性最低为83.6%。     

两个尼罗罗非鱼品系Hsp70基因序列比对分析

采用RT-PCR技术,对从美国和埃及引进的两个尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus品系(以下分别简称为美国尼罗和埃及尼罗)热休克蛋白70(Heat shock proteins 70,Hsp70)基因进行扩增并克隆测序。获得两个品系罗非鱼Hsp70基因完整编码区(code sequences,CDS)cDNA序列,全长为1 923 bp,编码为640个氨基酸,含有Hsp70家族3个签名序列DLGTTYS、IFDLGGGTFD和VVLVGGSTRIPKIQK,以及C末端保守序列EEVD,核定位信号标签KRKHKKDISQNKRALRR;Dank特征基序DLGTT-S-V;胞质Hsp70特征基序EEVD;靠近C端的GGMP4肽序列;2个糖基化位点NKSI和NVSA。结合BLAST分析结果,可以确认,获得的cDNA序列为美国尼罗和埃及尼罗两个品系罗非鱼的完整编码序列。序列同源性分析表明,美国尼罗和埃及尼罗有3个氨基酸位点和12个核苷酸位点不同,美国尼罗Hsp70基因氨基酸序列与莫桑比克罗非鱼同源性最高为99.7%,而与家鼠同源性最低为83.6%。