细菌质粒与基因工程

质粒（Plasmid）是细菌细胞内独立于染色体外的遗传物质,能自行复制而传递许多世代。质粒常存在于细菌的细胞质内,有些质粒可插入到染色体中,能与细菌染色体整合在一起,这种质粒称为附加体（Episome）。自1946年T．lederberg与EL．Tatum发现大肠杆菌K－12可通过接合进行基因重组后不久,又发现了可以传递的遗传因于─—致育因子（fertility,factor,F因子）,1952年T.Lederberg建议称之为质粒⑴。质粒不是细菌细胞的一种必需成分,有自我复制的能力,细菌细胞得到或失去质拉对细菌生命活动没有决定性影响。但是,质料可提供细菌选…     

质粒特性和载体质粒

分子生物学研究证明,染色体是基因的载体,基因的核苷酸序列按一定顺序和结构排列在染色体上。这些基因和核外遗传因子,又称细胞质遗传基因组,能控制生物的一切遗传。核外遗传因子包括线粒体,中心粒、动粒和质粒。而研究较多的则是细菌质粒,它是基因工程操作中,携带外源基因,转化受体细胞的运载工具之一,故称载体(Vector)。细菌质粒是微小而裸露的核外遗传因子,呈共价闭合的环状DNA分子。细菌是质粒的宿主,质粒在细胞质中只有染色体的0.2％—3％,分子量约为0.34～170×     

猪场环境大肠埃希菌耐药质粒消除研究

为了解耐药质粒消除对大肠埃希菌耐药性及其他生理特性的影响,参考前期试验分离出的8株携带aac(6')-Ib质粒耐药基因的大肠埃希菌的药敏试验.选取1株耐药性最强菌株用高温及SDS进行耐药质粒消除,PCR检测aac(6')-Ib基因.结果显示,耐药质粒成功消除,耐药性消失,且细菌在不含抗生素条件下培养,耐药性消除状态可稳...     

质粒介导的氟喹诺酮类抗生素耐药机制研究进展

近年来,质粒介导的耐药已经成为细菌对氟喹诺酮类抗生素耐药(PMQR)的主要机制之一。质粒携带的耐药基因种类不断增多,且其耐药基因可随质粒在不同种属细菌间相互传递,进而引起细菌耐药性的广泛传播,得到了国内外相关工作者的高度关注。本文将就近年来有关质粒携带氟喹诺酮类药物耐药基因的研究进展做以综述,为其耐药机制进一步研究奠定理论基础。     

细菌耐药质粒消除方法研究进展

常见的病原微生物多重耐药性的增加以及多重耐药菌株的出现,给动物养殖业造成了巨大的经济损失。细菌的耐药性与其自身携带的耐药质粒关系密切。论文从细菌耐药现状,细菌的耐药性和耐药质粒的关系,耐药质粒的物理、化学、中草药消除方法这几个方面进行综述,旨在寻求一种安全有效的消除方法消除耐药质粒,为今后相关的研究提供参考。     

中草药对细菌耐药质粒的消除作用研究

动物养殖中常见病原菌对抗菌药物的耐药性呈逐年上升的趋势,引起了广大科研工作者的极大关注。病原菌耐药性的产生主要与质粒有关,质粒能够将耐药基因传递给环境中的其他细菌,进而引起多重耐药菌株的出现。本文就细菌耐药现状、细菌耐药性与质粒关系、中草药对细菌耐药质粒的消除效果、中草药消除耐药质粒的机理、存在的问题、中草药对耐药质粒消除的展望这些方面进行简单综述。     

03型伪结核杆菌毒力基因的研究

用质粒消除技术,从03型伪结核杆菌毒力株中筛选出同宗的质粒治愈株,后者在缺失了一个分子量约为66kb(43.3MD)的大质粒的同时,丧失了对动物的侵袭性,细菌毒力消失。证实03型伪结核杆菌的毒力基因是位于染色体外的环状质粒DNA上,该质粒还编码了细菌的两个表型,1.外膜蛋白的产生;2.依赖钙离子生长。本文提示:要判定从临床上分离的03型伪结核杆菌是否具有毒力,应以检测其是否具有66kb的毒力质粒为标准。     

细菌耐药颉颃剂的研究现状及应用

作者介绍了具有颉颃细菌耐药性作用的物质的研究应用进展情况，包括灭活酶抑制剂、药物渗透促进剂、外输泵抑制剂、细菌生物被膜抑制剂、抗菌药物增强剂、耐药质粒消除剂等。     

中药复方对猪场大肠杆菌病的治疗效果及对耐药质粒的消除作用

细菌的耐药性一直是专业人员研究的热点和世人关注的焦点。细菌耐药性主要由耐药质粒介导,从本文结果看,中药复方必须使细菌耐药质粒得以消除,才能使细菌恢复对抗生素的敏感性。中医药具有毒副作用小、无残留等优势,在细菌耐药性消除研究中具有重要的研究价值。     

大肠杆菌的耐药机制及中药对大肠杆菌R质粒消除作用的研究

抗生素的发展和广泛应用使许多细菌引起的疾病得到了一定的控制，但是其发病率和病死率仍居高不下。究其原因，与细菌耐药性（特别是多重耐药现象）的产生有一定的相关性。产生耐药的机制十分复杂，耐药性主要由染色体或耐药质粒（R质粒）介质，R质粒可通过接合、转化、转导等方式在不同菌株之间传递，使敏感菌成为耐药菌，造成了R质粒的流行。R质粒的传递使得耐药性在细菌间广泛播散，又使一部分体内正常菌群成为耐药基因库，大大增加了治疗和预防的困难。     

细菌hok/sok解离后致死系统研究进展

由于编码特定基因的重组质粒增加了细胞本身的代谢负担,因此,含有质粒的重组菌通常不稳定。质粒不稳定性(Plasnid instability),包括分离不稳定性(Segregational instability)和结构不稳定性(Structural instability)两个方面,其中质粒的分离不稳定性是质粒不稳定性的主要因素。一旦丢失外源质粒,细胞将迅速增长,在数量上很快超     

猪魏氏梭菌病的实验室诊断

对4个规模化猪场不同日龄发病猪进行了病原学、毒力及毒素测定,并结合临床综合诊断确定为猪魏氏梭菌病。按细菌质粒特点对细菌分型作相关研究,但利用常规的质粒提取方法未能从所有参试菌株中提取到细菌质粒。说明对魏氏梭菌的质粒提取方法还有待进一步探索。     

细菌耐药拮抗剂的研究

本文介绍了具有拮抗细菌耐药性作用的物质的研究进展情况，包括灭活酶抑制剂、药物渗透促进剂、外输泵抑制剂、细菌生物被膜抑制剂、抗菌药物增强剂、耐药质粒消除剂等。     

猪源耐药大肠杆菌质粒及酶切图谱分析

为了解河北省猪源耐药大肠杆菌的质粒携带情况,追踪耐药菌株的同源性,试验对已经过系统鉴定及药敏试验的12株猪源大肠杆菌进行质粒提取并使用限制性内切酶HindⅢ酶切,进行质粒谱型分析,探讨大肠杆菌耐药性与质粒及其酶切图谱之间的关系。结果表明:分离菌株质粒的获得率为100%;来源相同的菌株一般有相同或相似的质粒酶切图谱,来源不同的菌株酶切图谱大多不同,但亦有相同的。说明河北省不同地区的大肠杆菌也有同源性菌株存在;大肠杆菌的质粒携带与细菌的耐药性之间并没有明显的对应关系。     

沙门菌质粒的研究进展

沙门菌病是一种重要的人畜共患病,目前已发现的沙门菌血清型有2000多种。质粒是细菌细胞内独立于染色体外的遗传物质,常存在于细胞质内,为双螺旋、闭环DNA分子,可自身复制并能进行世代传递。质粒含有某些基因可补充细菌基因的不足,能给细菌提供选择有利生存条件的能力,使细菌在特殊的环境条件下生存和生长,并在种内、种问甚至属间进行DNA交换,导致细菌的生存能力不断进化和增强。     

hok/sok-parDE增强鼠伤寒沙门菌菌毛编码质粒稳定性研究

将编码两个质粒稳定系统的融合基因克隆至表达鼠沙门菌Ⅰ型菌毛(fim)基因的质粒pAZ44中,获得pAZ44-h.将两质粒分别转化鼠伤寒沙门菌,连续培养144 h,每隔12 h转接1代,并取样,用抗性平板计数细菌,通过抗性检测质粒存在状况.结果发现,质粒pAZ44在细菌培养12 h～24 h后开始丢失,而含稳定系统的质粒pAZ44-h在连续培养10代或120 h都未发生丢失.表明aphA-hok-parDE序列显著增强了质粒的稳定性,为进一步研究鼠沙门菌Ⅰ型菌毛的功能奠定了基础.     

云南多重耐药猪源大肠杆菌的分离鉴定及其耐药机制初步研究

从云南省3个规模化猪场仔猪黄白痢病猪病例分离到7株革兰氏阴性小杆菌,用生理生化鉴定、药敏试验和致病性试验对分离菌株进行鉴定,并提取细菌的质粒,分析质粒与细菌耐药性之间的相关性。结果表明:7株分离株经生理生化试验鉴定为仔猪黄白痢大肠杆菌,对小白鼠有强致病性,分离株对15种抗生素表现为多重耐药,其中14耐1株、13耐2株、11耐2株、8和8耐以下2株,头孢类抗生素是治疗仔猪黄白痢的首选药物,表明云南猪大肠杆菌已经呈现出十分严重的耐药性。质粒图谱分析表明,4株分离株均携带分子量约为5000bp的一个质粒,而另外3株不携带任何质粒。质粒转化实验表明,分离株所携带的质粒为非耐药性质粒,与细菌耐药性无直接相关性。     

鸡源大肠埃希氏菌大质粒的探讨

用碱裂解法提取分离的１０株鸡源大肠埃希氏菌的质粒。结果：多数大肠埃希氏菌株含有大质粒，分子量为５０￣２３０ｋｂ。这些大质粒可能含有毒力相关基因，与细菌的耐药性，大肠埃氏菌素的产生及质粒的传递功能等有关。     

荧光报告质粒构建及其在布鲁菌细胞侵袭试验中的应用

采取质粒shuffling方法,将含GFPmut1的pPS858和能在布鲁菌中复制的质粒pBBRlMCS-2经KpnI酶切后连接,转化DH5a,利用双抗性筛选重组质粒pBBR1-GFP。将荧光质粒转入布鲁菌,获得荧光标记布鲁菌,并用构建好的荧光标记布鲁菌侵染巨噬细胞J774A．1,探讨其用于细胞侵袭试验的可行性。结果显示,成功构建布鲁菌荧光报告质粒pBBR1-GFP,用构建好的荧光标记布鲁菌侵染巨噬细胞后,在细胞内观察到带荧光的布鲁菌,且荧光强度与胞内细菌数成正比。细胞侵袭动态试验结果表明,细菌与细胞共孵育45min后,胞内细菌达到饱和。结果表明,成功构建了布鲁菌的荧光质粒报告系统,可用于布鲁菌细胞侵袭试验。     

荧光报告质粒构建及其在布鲁菌细胞侵袭试验中的应用

采取质粒shuffling方法,将含GFPmut1的pPS858和能在布鲁菌中复制的质粒pBBR1MCS-2经KpnⅠ酶切后连接,转化DH5α,利用双抗性筛选重组质粒pBBR1-GFP。将荧光质粒转入布鲁菌,获得荧光标记布鲁菌,并用构建好的荧光标记布鲁菌侵染巨噬细胞J774A.1,探讨其用于细胞侵袭试验的可行性。结果显示,成功构建布鲁菌荧光报告质粒pBBR1-GFP,用构建好的荧光标记布鲁菌侵染巨噬细胞后,在细胞内观察到带荧光的布鲁菌,且荧光强度与胞内细菌数成正比。细胞侵袭动态试验结果表明,细菌与细胞共孵育45min后,胞内细菌达到饱和。结果表明,成功构建了布鲁菌的荧光质粒报告系统,可用于布鲁菌细胞侵袭试验。