鸡传染性支气管炎北京地方株S1基因的克隆与鉴定

利用反转录套式聚合酶链反应技术从北京地区３株鸡性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分离株中扩增出１０５４ｂｐＳ１基因高变区。利用限制性内切酶ＳｉｎＩ和ＰｓｔⅠ的酶切位点分析图谱进一步证实了ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ的特异性。将３段Ｓ１基因分别克隆到ＰＵＣ１９质粒中,获得重组质粒ＰＵＣＩＢＶＳ１－ＢＪ１,ＰＵＣＩＢＶＳ１－ＢＪ２和ＰＵＣＩＢＶＳ１－ＢＪ３。     

牛病毒性腹泻病毒的基因分型

根据病毒基因组５＇端非翻译区（ＵＴＲ）的序列比较将牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）分成两组。种系发生分析说明ＢＶＤＶ－１和ＢＶＤＶ－Ⅱ组互有不同，根据５＇端非翻译区和编码ｐ＾１２６多肽的基因区，设计了用ＰＣＲ鉴别ＢＶＤＶ－Ｉ和ＢＶＤＶ－Ⅱ。用该试验，１４０株ＢＶＤＶ毒株中有７６株被鉴定为ＢＶＤＶ－Ⅱ，并注意到ＢＶＤＶ－Ｉ和ＢＶＤＶ－Ⅱ之间的抗原性和病原性差别，ＢＶＤＶ－Ｉ普遍用于疫苗生产、诊断试验和研     

美国研究黄鲟养殖

黄鲟为美国濒危品种,为此科研人员进行了养殖黄鲟试验。给黄鲟鱼苗投喂４种干饲料和半湿配合饲料,饲料配方如下：鱼粉６７％、干乳清６％、虾粉６％、维生素１－５％、无机盐０－５％、维生素Ｃ０－１％、营养素１－４％、鱼油１５％、粘合剂２％。维生素每ｋｇ含ＶＡ１００００ＩＵ、ＶＤ３４０００ＩＵ、ＶＫ１０ｍｇ、ＶＥ７８０ＩＵ、维生素Ｂ１４０ｍｇ、ＶＢ２３０ｍｇ、泛酸钙１５０ｍｇ、烟酸１５０ｍｇ、ＶＢ６２０ｍｇ、生物素３ｍｇ、叶酸１５ｍｇ、ＶＢ１２、０－２ｍｇ、喹乙醇１５０ｍｇ、肌醇１０００ｍｇ。鱼苗投喂开食饵…     

巢式PCR快速鉴定鸡传染性支气管炎病毒的研究

鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）经鸡胚增殖后,直接用尿囊液提取ＲＮＡ后反转录成ｃＤＮＡ,用ＩＢＶ基因３’端的ＵＴＲ１－／ＵＴＲ２＋和ＵＴＲ３－／ＵＴＲ４＋两对引物进行巢式ＰＣＲ,所检测的４个ＩＢＶ标准参考株和１６个ＩＢＶ野毒株均得到了预期的１７４ｂｐ大小的片段,而鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）,鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）及正常鸡胚尿囊液经同样处理没有可见片段出现。本试验不需纯化册毒只需０５ｍｌ病毒尿囊液即可在２４小时内得到准确的试验结果。这表明与其它ＩＢＶ鉴定方法相比,该法具有快速、灵敏、特异的优点。     

通用伪狂犬病病毒转移载体的构建

克隆伪狂犬病病毒（ＰＲＶ） Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１株基因组的ＫｐｎⅠ　Ｊ片段,然后亚克隆其中的ＫｐｎⅠ－ ＰｓｔⅠ片段,缺失重组质粒中的ＥｃｏＲⅠ位点和ＮｏｔⅠ－Ｈｉｎｄ Ⅲ片段;再用ＡｃｃⅠ切去３７８ｂｐ,在此缺失位置插入来源于ｐＣＲ３－Ｕｎｉ的ＣＭＶ启动子、多克隆位点和ＢＧＨ ｐｏｌｙＡ信号,构建了通用 ＰＲＶ转移载体 ｐＢｄＴＫ－Ｕｎｉ。此转移载体为改造 Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１株及开发二价或多价基因工程疫苗提供了有力工具。     

传染性腔上囊病病毒超强毒致弱株GZ20 VP2基因的克隆和序列分析

根据已发表的５２／７０株传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）基因组序列,设计并合成了一对物异扩增ＩＢＤＶ ＶＰ２基因的引物。以超强毒ＩＢＤＶ（ｖｖＩＢＤＶ）致弱株ＧＺ２０基因组为模板利用技术扩增出了１．５ｋｂ的ｃＤＮＡ产物,将ＶＰ２基因克隆于ｐＵＣ１１９质粒上,得到重组ｐＵＣ１１９质粒。并对ＶＰ２基因全序列测定,序列分析和聚类分析表明,该致弱株与无毒疫苗株ＰＢＧ９８和弱毒株ＣＵ－１非常相似,而与经典强毒     

鸡痘病毒282F4弱毒株基因组BamHI片段的克隆与分析

采用鸟枪法克隆鸡痘病毒基因组ＢａｍＨＩ部分片段，用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｄＵＴＰ标记的ＦＰＶ２８２Ｆ４弱毒株ＢａｍＨＩ片段探针点杂交，证实２２个克隆插入了ＦＰＶ２８２Ｅ４弱株ＤＮＡ的ＢａｍＨＩ片段，选取具代表性的大小不同的６个质粒ｐＵＡ、ＰｕＢ、ｐＵＣ、ｐＵＤ、ｐＵＥ、ｐＵＦ。     

人尿激酶原乳腺定位转基因小鼠的建立

人尿激酶原乳腺定位转基因小鼠的建立我们从已构建的人尿激酶原（Ｐｒｏ－ＵＫ）乳腺定位表达载体ｐＳＶＬ－β－Ｐｒｏ－ＵＫ中用ＳａｃＩ＋ＸｈｏＩ回收２．５ｋｂ的大鼠β－乳酪蛋白的启动子及Ｐｒｏ－ＵＫ片段，从ｐＳＶＫ３质粒中用ＳａｃＩ＋ＢａｍＨＩ回收ＳＶ４０...     

传染性法氏囊病病毒VP2/VP0基因在重组鸡痘病毒中的表达

以鸡痘病毒复制非必需区ＴＫ基因为侧翼,在牛痘病毒Ａ型包涵体晚期启动子（ＡＴＩ）与１６个串联的突变型早期痘苗病毒ｐ７．５启动子组成的复合启动子的下游,分别插入编码传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）结构蛋白ＶＰ２和ＶＰ２－４－３（ＶＰ０）的基因片段后,进行了同源重组和蓝斑筛选,获得２株重组病毒ｖＵＴＡＬａｃＶＰ２－７和ｖＵＴＡＬａｃＶＰ０－１０。经ＥＬＩＳＡ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,重组病毒ｖＵＴＡＬａｃＶＰ２－７能表达ＶＰ２,ｖＵＴＡＬａｃＶＰ０－１０能表达ＶＰ２和ＶＰ３,ＶＰ２和ＶＰ３的Ｍｒ分别为４１０００和３２０００。     

传染性法氏囊病病毒超强毒HZ株和XN株VP2基因的克隆和序列比较

根据已发表的５２／７０株ＩＢＤＶ基因组序列,设计并合成了一对特异扩增ＩＢＤＶ ＶＰ２基因的引物。以陕西地区分离的ＩＢＤＶ野毒ＸＮ株,ＨＺ株为材料,以其基因组为模板利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出了１．５ｋｂ的ｃＤＮＡ产物,将ＶＰ２基因克隆于ＰＵＣ１１９质粒上,得到重组ＰＵＣ１１９质粒。     

PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒

利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标记的核酸探针。用ＲＴ－ＰＣＲ及生物素核酸探针法分别对ＩＢＶ，ＩＢＤＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ及ＮＤＶ进行检测，结果证明该方法为ＩＢＶ特异性检测方法。对人工感染ＩＢＶ的ＳＰＦ鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测，证明本方法能在ＳＰＦ鸡接毒后１～１０ｄ内检出ＩＢＶ。     

传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆和鉴定

以鸡胚成纤维细胞培养ＩＢＤＶ弱毒疫苗株Ｄ７８，经蔗糖密度梯度离心纯化，电镜下见典型ＩＢＤＶ粒子。用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒基因组，低熔点胶回收，琼脂糖凝胶电泳，可见ＩＢＤＶ典型双节段基因组。根据已发表的ＩＢＤＶ基因组序列，设计并合成了１对特异扩增ＩＢＤＶＶＰ２基因的引物。以ＩＢＤＶ基因组为模板，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出了１．５ｋｂ的ｃＤＮＡ产物，将ＰＣＲ产物适当处理后与经ＳｍａⅠ酶切的ｐＵＣ１９质粒平端连接，转化大肠杆菌ＤＨ５α，在含Ａｍｐ、Χ－ｇａｌ和ＩＰＴＧ的琼脂平板上培养，产生大量白色菌落。挑取白色菌落，经质粒大小比较分析初步筛选到一重组质粒。以重组质粒ＤＮＡ为模板作ＰＣＲ检测和部分酶切分析证实，该质粒为含Ｄ７８ＩＢＤＶＶＰ２基因的重组ｐＵＣ１９     

光敏生物素标记EDSV—DNA探针检测鸡减蛋综合症（EDS）的研究

应用光敏生物素标记ＥＤＳＶ－ＤＮＡ与ｐＵＣ１９重组质粒ＤＮＡ做探针，检测人工发病减蛋综合症蛋鸡的粪便，蛋，输卵管样品，以新城疫病毒（ＮＤＶ），传染性病毒（ＩＢＤＶ），传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ），包涵体肝炎病毒（ＩＢＨＶ）作对照。实验结果显示：探针能特异地检出ＥＤＳ病鸡粪便，输卵管，蛋清样品中的病毒，与ＮＤＶ，ＩＢＤＶ，ＩＢＶ及ＩＢＨＶ均呈阴性反应。探针灵敏度达１０ｐｇＥＤＳＶ－ＤＮＡ。     

猪生殖—呼吸道综合征病毒CH—1a株N基因的原核表达

将ＰＲＲＳＶＣＨ－１ａ株Ｎ基因用ＥｃｏＲＩ和ＰｓｔＩ双酶切从重组质粒ｐＵＣ１８－ＯＲＦ７切下后,插入到原核表达载体ｐＢＶ２２０的ＰＲ,ＰＬ启动子下游,得到重组表达质粒,ｐＢＶ２２０－ＯＲＦ７,转化了ｐＢＶ２２０－ＯＲＦ７的大肠杆菌ＪＭ８３经诱导培养后,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达产物,结果表明ＰＲＲＳＶＣＨ－１ａ株的Ｎ基因在原核载体上得到高效表达,表达产物占菌体总蛋白的１５．     

猪繁殖与呼吸综合征病毒北京分离株的ORF7克隆与序列分析

将北京地区猪系列与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）分离ＢＪ－２和ＢＪ０４的ＯＲＦ７及部分３端编码区（ＵＴＲ）的ＲＴ＿ＰＣＲ扩增产物克隆连接于ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ质粒载体上,重组质粒经ＥｃｏＲⅠ酶切鉴定后进行了双链测序。测定垢基因序列与欧已知序列比较发现,ＢＪ－２和ＢＪ－４株与美洲ＶＲ－２３３２株非常接近,在其长度为５５５ｂｐ的ｃＤＮＡ序列中,仅与ＶＲ－２３３２株分别相差１和２个核苷酸,其中ＯＲＦ７的核     

乙脑病毒PrME基因在杆状病毒表达系统中的表达

本试验将乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）的ＰｒＭ／Ｅ基因的ＨｉｎｄⅢ－ＢｇｌⅡ片段（２．１ｋｂ）插入到杆状病毒载体ｐＡｃＵＷ３１的ＢａｍＨＩ位点,使外源基因置于多角体蛋白启动予下游,构建成转移载体ｐＡｃＵＷ３１ＪＥ,以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ作为共转染试剂,将纯化的ｐＡｃＵＷ３１ＪＥ与Ｂｓｕ３６Ｉ线性化的杆状病毒ＡｃＭＮＰＶ．ＬａｃＺＤＮＡ共转染昆虫ｓｆ９经病毒蚀斑纯化技术和Ｘ－ｇａｌ与中性红双重染色技术,随机     

减蛋综合征病毒基因组HindⅢ酶切片段的克隆及酶谱分析

以ＰＵＣ１９质粒为载体,采用鸟枪法克隆减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）基因组的ＨｉｎｄⅢ酶切片段,用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｄＵＴＰ标记的ＥＤＳＶＨｉｎｇⅢ片段探针打点杂交,证实１３个克隆插入了ＥＤＳＶＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ片段。酶切分析结果表明,克隆到了Ａ、Ｂ、Ｆ、ＧＨ、Ｉ、Ｊ７个不同大小的片段,选取上述插入片段的、具有代表性的７个相应质粒ＰＵＨＡ、ＰＵＨＢ、ＰＵＨＦ、ＰＵＨＧ、ＰＵＨＨ、ＰＵＨＩ、ＰＵＨ     

PRV特异性糖蛋白gp50基因片段的克隆探针制备

在ＢＨＫ２１细胞中增殖伪狂犬病病毒（ＰＲＶ），提纯ＰＲＶＤＮＡ，选编码特异性糖蛋白ｇｐ５０基因中的２６２ｂｐ片段进行ＰＣＲ扩增。扩增产物经ＫｐｎⅠ和ＳａｌⅠ双酶切后，将２２２ｂｐ片段与质粒ｐＵＣ１９连接构成重组子ｐＵＰ。通过转化大肠杆菌ＪＭ８３、Ａｍｐｒ和α互补效应筛选后，扩增、提纯重组子ｐＵＰ，用ＫｐｎⅠ和ＳａｌⅠ酶切，电泳回收克隆的２２２ｂｐ片段。用光敏生物素标记２２２ｂｐ片段和重组子ｐＵＰ制备的探针，分别检出４６．８ｐｇ和９３．６ｐｇ的ＰＲＶＤＮＡ，且ｐＵＰ探针只与ＰＲＶ呈杂交阳性反应，与ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２及ＣＭＶ呈阴性反应。     

用不同鸡新城疫病毒株制备油乳剂苗的研究

应用４种鸡新城疫病毒Ｌａ－Ｓｏｔａ，Ｕｌｓｔｅｒ，Ｂ１和ＰＭＶ－Ⅰ分别作为抗原，制备ＮＤ油苗。每组苗颈部皮下接种非免疫来航鸡，每隔１～２周采血检测ＨＩ抗体一次，直至免疫后第８周。用同源抗原检测ＮＤ苗免疫的ＨＩ抗体滴度普遍高于非同源抗原检测的ＨＩ抗体滴度（Ｌａ－Ｓｏｔａ油苗除外），不同ＮＤ毒株油苗中，Ｕｌｓｔｅｒ油苗和Ｂ１油苗的ＨＩ抗体水平最高，其次是Ｌａ－Ｓｏｔａ油苗，ＰＭＶ－Ⅰ油苗ＨＩ抗体水平最     

受精用液种类对牛狼母细胞体外受精的影响

比较了应用改良Ｔｙｒｏｄｅ＇ｓ液与０．６％ＢＳＡ－ＴＣＭ１９９作为受精液（实验１）、这两种受精液的不同配比作为受精液（Ｔ：ＢＴ分别为３：１、１：１和１：３；Ｔ为对照组，实验２）和在不同精时间采用不同受精液（先用Ｔ，ＩＶＦ２４ｈ后改用ＢＴ或ＴＣＭ１９９＋１０％发情牛血清，实验３），对经体外成熟培养（ＩＶＭ）后的牛卵母细胞体外受精（ＩＶＦ）效果的影响，结果，应用成分复杂的ＢＴ作为受精液，可以提高受精卵