动物源性饲料中牛源和羊源性成分的检测方法

主要介绍了几种动物源性饲料中牛源和羊源性成分检测较为常用的检测法:显微组织检测法、免疫学法、近红外光谱检测法和PCR检测法以及不同检测方法的适用范围,重点介绍了PCR检测法及注意事项。     

牛源性成分LAMP检测方法的建立

根据牛cytB基因设计3对特异性引物,运用GenieⅡ等温扩增荧光检测系统,以环介导等温扩增(LAMP)荧光检测方法为基础,建立了牛源性成分LAMP检测方法,并对该方法进行了反应体系和条件的优化。试验结果表明:该方法操作简单、特异性好;灵敏度比普通PCR方法高100倍,达到5.408×10~(-2)μg/μL;反应时间短,最快的10分钟内即可完成反应。     

饲料中转基因成分的检测分析方法

<正>转基因饲料(genetically modified feed,GMF)是指通过基因重组技术获得的基因改良生物加工而成的饲料(SN/T1201-2003)。目前,转基因农作物的商业化种植面积正在逐年增加,品种日益丰富,鉴于转基因作物潜在的风险性,世界各国纷纷制定相应的政策要求对用于饲料的转基因作物进行风险性评估,并且要求在饲料中的转基因成分不能超过一定数量,如欧盟要求饲料中的转基因成分不能超过     

饲料中转基因植物成分的检测

为了确保动物产品对人体健康不造成危害,有必要对饲料中是否含有转基因成分进行检测。本文主要综述了可用于饲料中的转基因作物、检测饲料中转基因成分常用的方法以及这些方法在实际中的应用。     

动物产品中猪源性和牛源性成分双重荧光PCR检测方法的建立

[目的]建立双重荧光PCR法,检测动物产品中猪、牛源性成分。[方法]分别针对猪、牛线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）种间保守基因,设计特异性引物与探针,通过对反应体系和反应条件的优化筛选,建立了双重荧光PCR方法,在同一个荧光PCR反应中完成2种动物源性成分的检测。并对该方法的特异性、敏感性进行评估。[结果]对16种不同的动物DNA进行检测．仅猪、牛源性成分收集到相应的典型的S型扩增曲线,对猪、牛二联模板的检测,可同时收集到相应模板的扩增曲线．其余14种动物源性成分未发现扩增曲线。双重荧光PCR对猪肉、牛肉模板的最低检出限均为10^-5,与相应的单重荧光PCR方法的检出限一致。[结论]该方法特异性强,敏感性高,适用于肉制品、奶制品、饲料等动物源性产品的检测。     

饲料中转基因成分的实时荧光PCR检测研究

本试验采用实时荧光PCR方法对饲料中的转基因成分进行了检测研究。对国产的14份猪饲料、3份水产饲料和3份荷兰进口代乳粉共20份样品进行了大豆、玉米、棉花、油菜和大米物种特异性基因和CaMV35S、NOS、FMV35S、NPTⅡ、PAT、BAR、GOX、CryⅠA(b)、CryⅠA(b)-CryⅠA(c)、rrsoy外源基因检测。在11份样品中检出转基因成分,其中8份样品中含有转基因大豆成分,2份样品中含有转基因大豆和转基因棉花成分,1份样品中含有转基因大豆、转基因油菜和转基因棉花成分。     

饲料与动物产品中牛、羊源性成分的多重PCR检测

以鱼粉、奶粉、牛奶、果乳、鱼油及牛油为试验材料,进行了18S rDNA片段、牛源性成分和羊源性成分之间的多重PCR检测。多重PCR检测结果与单一PCR检测结果完全一致。结果表明,多重PCR方法用于进出口饲料及动物产品中牛、羊源性成分的同时检测是可行的。     

转基因饲料的PCR检测策略

PCR技术是转基因检测中最常见的方法之一。本文对目前转基因饲料的形势及检测特点进行总结,并从检测层次及检测方法上对转基因饲料的PCR检测策略进行综述。     

大豆中转基因成分的定性PCR检测

实验利用CTAB法对大豆DNA进行提取,设计并合成引物对转基因大豆的内源基因Lectin、外源基因CaMV35S 启动子、NOS终止子和目的基因Cp4 EPSPS基因进行PCR检测,成功建立了大豆中转基因成分的检测方法。     

应用PCR技术检测鸽源性成分

根据鸽子线粒体DNAD-loop环基因中的保守序列,用Primer5.0设计针对鸽的特异性扩增引物。通过聚合酶链式反应从鸽样品中得到约150bp的特异条带。通过测序对扩增产物进行验证,鸽组织的PCR产物序列与基因库中检索到的相应序列相吻合。该实验建立了检测鸽动物源性成分的PCR方法,其检测灵敏度为0.1%。     

饲料中鱼源性成分定量检测的实时荧光PCR技术的建立

根据鱼线粒体DNA(mtDNA)基因组序列,选择高度保守区域设计特异性引物和TaqMan探针,通过反应条件优化,建立了饲料中鱼源性成分检测的实时荧光PCR方法.结果显示,应用该方法只能检测到鱼源性成分,表明该方法具有良好的特异性,对饲料中鱼源性成分的最低检出限为0.05%,定量检测的线性范围0.018～18.46ng.试验结果表明,该方法能对饲料中鱼源性成分进行准确、快速的检测,具有特异性好、灵敏度高的优点,对防止饲料掺假、控制进出口饲料安全具有重要意义.     

动物产品及饲料中牛源和羊源性成分三重荧光PCR检测方法的建立

为鉴定和区分饲料及动物产品中牛、山羊、绵羊源性成分,根据线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)种间保守序列,设计合成了3对特异性引物与TaqMan探针,通过对荧光PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了三重荧光PCR方法,在同一个荧光PCR反应中完成3种动物源性成分的检测。用该方法对16种不同源性的动物DNA进行检测,结果表明能特异地鉴别检测出牛、山羊和绵羊源性成分,且敏感性比现行国标PCR法高100倍。该方法适用于饲料、肉制品、奶制品等动物源性产品的检测。     

动物蛋白饲料中动物源性成分的鉴别1.同一PCR鉴别动物蛋白饲料中牛羊成分

为了防止牛海绵状脑病(俗称疯牛病)和羊痒病传入我国,对来自疫区国家的动物源性饲料进行动物种类鉴别非常必要.本研究根据牛羊特异性卫星DNA建立了同一PCR体系同时检测羊、牛源性物质的方法.应用DNA提取液制备模板,不但有效地缩短了试验时间,还大大降低了成本,有利于在生产实际中推广应用.     

饲料产品中转基因成分定量分析的问题与对策

文章综述了国内外农产品转基因成分标识管理的现状,评价了现有转基因作物定量检测方法的特点与弊端,提出了以基因特异性为依据、建立更适合饲料等复杂产品中转基因成分定量检测的改进建议。     

牛副结核病PCR检测方法的建立

根据GenBank上公布的副结核分枝杆菌C-2染色体的ISMav2基因序列设计特异性引物,对牛副结核分枝杆菌进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明,扩增的目的片段大小为246 bp,与预期扩增序列同源性为99.6%。该PCR检测体系的特异性强,不能在非副结核分枝杆菌 DNA中扩增出条带;敏感性高,最低检测的DNA含量为1 pg。该检测体系的成功构建为牛副结核病的检测、鉴定和流行病学调查提供了有力的技术支持。     

牛布氏杆菌PCR检测方法的建立

根据GenBank上公布的牛布氏杆菌外膜蛋白OMP31的基因序列设计特异性引物,对牛布氏杆菌样品进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明,扩增的目的片段大小为602 bp,与预期扩增序列同源性为99.7％;该PCR检测体系的特异性强,不能在非布氏杆菌 DNA中扩增出条带;敏感性高,最低检测的DNA含量为0.9 pg/μL。该检测体系的成功构建为牛布氏杆菌病的检测、鉴定和流行病学调查提供了有力的技术支持。     

A simplified PCR assay for fast and easy mycoplasma mastitis screening in dairy cattle

A simplified polymerase chain reaction (PCR) assay was developed for fast and easy screening of mycoplasma mastitis in dairy cattle. Species of major mycoplasma strains [Mycoplasma (M.) bovis, M. arginini, M. bovigenitalium, M. californicum, M. bovirhinis, M. alkalescens and M. canadense] in cultured milk samples were detected by this simplified PCR-based method as well as a standard PCR technique. The minimum concentration limit for detecting mycoplasma by the simplified PCR was estimated to be about 2.5 × 10³ cfu/mL and was similar to that of the standard PCR. We compared the specificity and sensitivity of the simplified PCR to those of a culture method. Out of 1,685 milk samples cultured in mycoplasma broth, the simplified PCR detected Mycoplasma DNA in 152 that were also positive according to the culture assay. The sensitivity and specificity of the simplified PCR were 98.7% and 99.7%, respectively, for detecting mycoplasma in those cultures. The results obtained by the simplified PCR were consistent with ones from standard PCR. This newly developed simplified PCR, which does not require DNA purification, can analyze about 300 cultured samples within 3 h. The results from our study suggest that the simplified PCR can be used for mycoplasma mastitis screening in large-scale dairy farms.     

Detection of BHV-1 in a Naturally Infected Bovine Fetus by a Nested PCR assay

Bovine herpesvirus 1 (BHV-1) is frequently associated with abortion in naturally and experimentally infected cattle. Most of the virus isolation and immunofluorescent antibody protocols described in the literature for detecting BHV-1 in bovine foetuses are rather laborious, costly and time-consuming. The detection is described of BHV-1 in the tissues of a naturally aborted bovine foetus by a nested PCR assay with no further hybridization procedures.Optimal results were achieved by filtering the foetal tissues on a chromatography column before DNA extraction, by using two pairs of primers in a nested PCR and by evaluating the amplification products on silver-stained polyacrylamide gels.This nested PCR was faster and easier to perform than the virus isolation test. To our knowledge, this is the first time that BHV-1 has been detected in the tissues of a naturally infected bovine foetus by means of a nested PCR. The test seems to be a practical alternative for rapid detection of BHV-1 in bovine foetus.