高羊茅EST-SSR标记的开发及品种鉴定

利用EST-SSR分子标记对11份高羊茅（Festuca arundinacea）材料进行了品种鉴定研究。在优化DNA提取方法、扩增体系的基础上对50对EST-SSR引物进行筛选,结果表明：有42对引物可以在高羊茅上得到有效扩增,对11份高羊茅品种的鉴定结果表明,其中12对引物具有良好的多态性,占28.6%;共检测到86个等位基因,平均每个位点的等位基因数为4.5个,变幅为3-12。从谱带类型上看：S3和S44引物扩增的谱带类型最少（2种）,多态性百分率最低,为18.2%;S11引物扩增的谱带类型最多（9种）,多态性百分率最高,为81.8%;共扩增到多态性谱带65种,平均多态百分率为59.1%。     

水稻AFLP指纹图谱的引物选择研究

 通过对适合制作水稻品种AFLP指纹图谱的引物进行研究 ,初步建立了一套快速有效地制作AFLP指纹的引物选择法 :第 1步 ,选择亲缘关系相近的 3组以上材料 ,保证组内材料遗传差异较小 ,组间有一定差异 ;第 2步 ,利用两端相同的 16对 2 +2引物组合选择扩增 ,初步选出具有一定多态性的引物 ;第 3步 ,对具有一定多态性的引物重新组合 ,构成两端不同的 2 +2引物组合 ,选出多态性较高的引物组合 ;第 4步 ,将多态性较高的 2 +2引物的一端增加 1个选择碱基 ,构成 2 +3或 3+2引物组合 ,筛选多态性更强、谱带较多、质量较好的引物组合 ;第 5步 ,随机选择部分品种验证所选引物的有效性。选出了M2 1P87和M73 P17等多态性高、谱带多、带纹清晰的引物组合 ,为水稻品种AFLP指纹图谱制作奠定了基础     

盾叶薯蓣品种的ISSR指纹图谱研究

[目的]利用ISSR分子标记构建盾叶薯蓣品种鉴定的DNA指纹图谱,为盾叶薯蓣药材鉴定和良种选育提供技术支持。[方法]筛选ISSR引物,对10个盾叶薯蓣品种进行PCR扩增和电泳检测,统计条带并进行遗传多样性分析、聚类分析等;选择核心引物,建立DNA指纹图谱鉴定体系。[结果]从50条ISSR引物中筛选出9条,对10个品种扩增共得到86条谱带,多态性条带72条,多态性条带比率为83.72%;选出3条ISSR核心引物建立了10个薯蓣品种的ISSR指纹鉴定图谱。[结论]盾叶薯蓣品种遗传多样性丰富;3条核心引物所构建的植物图谱中,每个品种均有各自特异的共有谱带、特有谱带、缺失谱带,这些谱带的组合可用于盾叶薯蓣品种鉴定。     

部分杧果种质资源遗传多样性的SRAP和ISSR分析

利用SRAP和ISSR分子标记,对20份杧果种质资源进行遗传亲缘关系分析,为杧果种质资源的鉴定和杂交育种亲本选配提供参考依据。结果显示,在SRAP分析中,从80对引物中选出12对引物组合共扩增出224条谱带,每对引物组合扩增谱带数在13~21条,平均为18.7条,其中多态性谱带为194条,平均多态性谱带为16.2条,多态性比率为86.61%,材料间相似遗传系数变化范围为0.54~0.94;在ISSR分析中,从100条引物中选出10条引物共扩增出179条谱带,每条引物扩增谱带数在11~20条,平均为17.9条,其中多态性谱带为153条,平均多态性谱带为15.3,多态性比率为85.35%,材料间相似遗传系数变化范围为0.58~0.90。SRAP和ISSR标记分别在相似系数0.624和0.665水平上,均可将20份杧果种质资源分成4大类群,SRAP和ISSR标记都能将供试材料完全区分开来,聚类结果具有很高的一致性,均适用于杧果材料的遗传多样性分析,可用于杧果遗传亲缘关系的研究。     

RAPD技术在冬瓜和节瓜品种鉴定中的应用

利用随机扩增多态性ＤＮＡ技术分析了２个冬瓜品种和１个节瓜品种。所用的２０个引物有１９个能扩增出ＤＮＡ谱带。其中７个引物对３个品种扩增的ＤＮＡ谱带没有多态性，１２个引物能产生具有重现性的ＤＮＡ多态性谱带。     

SSR、AFLP和SRAP分子标记用于玉米杂交种鉴定的多态性比较

选取2个普通玉米杂交种和1个糯玉米杂交种及其亲本自交系作为试验材料,分别采用SSR、AFLP、SRAP三种分子标记技术进行扩增,比较三种标记间的多态性差异,明确三者用于玉米杂交品种鉴定效率。结果表明:SSR、AFLP、SRAP标记平均每对引物扩增谱总带数分别是3.4、19.7、15.4条,三者用于品种鉴定每个引物特征带分别是2.2、2.5和2.4条,三种标记用于鉴定的无效扩增引物数分别占总引物的19.4%、7.8%和14.6%,另外还筛选出三种标记针对三个玉米杂交种鉴定的10个最佳引物组合。总之,三种标记在实际应用中各具优缺点,不同生产部门可根据需要进行选择。     

鄂柑一号椪柑少核芽变的AFLP分析

利用AFLP技术,对鄂柑一号椪柑(Citrus reticulata Blanc.cv.ponkan)的3个少核芽变及其母株进行分子鉴定。筛选了64对引物,有60对引物可扩增出清晰的条带,共获得2 281条清晰的扩增谱带,其中有9对引物可扩增出明显多态性条带,多态性位点共15个,占总数的0.66%。结果表明,鄂柑一号椪柑的少核芽变由遗传物质改变引起,通过AFLP技术可以有效鉴定。     

江苏水稻品种抗稻瘟病遗传多样性研究

根据已知的不同抗病基因保守区域设计引物,通过在水稻基因组DNA中扩增和分离有相似序列的DNA片段,可以快速鉴定出候选抗病基因。选择3对扩增条带多样性较高的引物XLRRfor／XLRRrev、S1／AS3和Ptokin1／Ptokin2,对江苏27个水稻品种进行抗病基因同源序列PCR分析（resistance gene analog—PCR,RGA—PCR）。结果显示,3对引物共扩增出清晰可辨的谱带127条,其中多态性带1ol条,占总数的79．53％。根据聚类分析,3对引物对或引物组合扩增的RGA图谱可将品种分为多种类型,这些RGA图谱类型与稻瘟病菌7个生理小种接种鉴定的抗病表型没有完全的对应关系。     

微量元素对生防木霉菌T23遗传变异的影响

首先对木霉菌T23在含有Mg、Cu、Zn、Fe、Mn、Mo、Ca共7种微量元素的组合培养基上经过7代继代诱导,然后运用DNA随机扩增多态性(RAPD)技术进行基因组DNA多态性分析.从70条引物中筛选出谱带清晰、重复性好的引物10条,共扩增出141条RAPD谱带,多态性谱带为107条,占扩增总谱带数的75.9%.DNA 片段大小范围500-3000bp,并利用NTSYSpc2.1软件对扩增结果进行统计和聚类.结果表明:生防木霉菌T23诱变后具有一定的遗传稳定性和遗传多态性,生防木霉菌T23经过上述微量元素长时间诱导能发生遗传变异.     

花生DNA分子标记的研究 III 不同限制酶组合AFLP分析效果比较

 采用了28对EcoR I/Mse I AFLP选择性扩增引物、64对Pst I /Taq I AFLP选择性扩增引物，对作图亲本24-3、B4及其杂种F1进行了分析，统计了两种限制酶组合的扩增总带数、多态性带数及多态性率。秩和检验结果说明，两种限制酶组合AFLP每对引物扩增出的总带数无显著差异，而多态性条带数目以及多态性率均有极显著的差异。证明尝试不同的限制酶组合可望揭示出花生品系材料间更为丰富的遗传变异性。     

Studies on the Primers Screening for AFLP Fingerprints of Rice Cultivars

AFLP(amplified fragment length polymorphism) is a very powerful fingerprinting technology.The key of making variety fingerprints is to select specific powerful primers for each crop. A quick and effective procedure for selecting AFLP primers for rice variety fingerprinting was established as the following: (1)Choose 3 or more group materials that have close genetic relations. (2) Select potential polymorphic primers from primer pairs that are 2 + 2 primer crosses and same at two ends. (3) Recombine the selected potential polymorphic primers and choosing more polymorphic primers. (4) Add one selecting base at one end to become 2 + 3 or 3 + 2primers and further selecting more polymorphic primers. Some primers were selected with this procedure, such as M21Ps7 and M73P17, with which the fingerprints had more polymorphism and high quality.     

AFLP and RAPD Analysis of the Boer and Indigenous Breeds of the Goat in Jiangsu

Blood and tissue samples were collected from 105 goats including 60 Boer goats (30 for eachsex), 30 Xuhuai goats (15 for each sex) and 15 Haimen goats (7 stud and 8 does). DNA was extracted andDNA pools were constructed on the basis of goat breeds. In 36 selective primer combinations, 29 combinationsamplified totally 3 253 markers including 92 polymorphic markers by amplified fragment length polymor-phism (AFLP). On average, 3.17 polymorphic markers were amplified per combination, with a polymorphicfrequency of 2.8%. The primer combinations amplifying more polymorphic markers (showed in brackets)were involved in E00+ACG/M00+CAA (13), E00+ACG/M00+CAG (10), E00+AAC/M00+CAC (8)and E00+AAC/M00+ACT (7). A total of 183 markers including 60 polymorphic markers were amplified byRAPD from the pooled DNA of three breeds using 22 primers with strong polymorphism and high reproduc-ibility selected from 93 RAPD primers. On average, 2.73 polymorphic markers were amplified per primer,with a polymorphic frequency of 32.8%. The results of AFLP and RAPD coincidently suggested that the ge-netic distance is the closest between Xuhuai and Haimen goat, next between Xuhuai and Boer goat, and the far-thest between Haimen and Boer goat. According to the UPGMA method, Haimen and Xuhuai goats can begathered together as a cluster, then Boer goat. Both methods can be used to implicate the genetic difference ofthese three breeds, in particular AFLP has more polymorphic markers.     

利用SRAP分子标记技术鉴定大白菜种子纯度

以大白菜品种多抗3及其父母本为研究材料,利用SRAP（相关序列扩增多态性）分子标记方法,通过对54对SRAP标准引物的筛选,获得了能区分大白菜多抗3及其亲本的引物Me4F/Em3R。采Me4F/Em3R引物对对5份多抗3系列商品种子纯度进行检验,种子的纯度分别为75.5%、72%、80.5%、68%和73%,与田间种植...     

4个加工番茄新品种SSR指纹图谱的构建与品种鉴定

[目的]探明加工番茄主要品种的遗传变异,建立准确高效的种子纯度鉴定方法.[方法]利用SSR引物对4个加工番茄杂交品种及其8个亲本进行PCR扩增,经4;的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,进行带型分析.[结果]从34对SSR引物中筛选出10对扩增产物具有稳定多态性的引物,这些引物分布在番茄整个基因组,每对引物可以检测到2～4个数目不等的多态性片段,共28个多态性片段,平均2.8个,片段大小介于60～150 bp,成功构建出4个加工番茄杂交种及其8个亲本的指纹图谱,并鉴定出了这4个杂交种的共显性标记.[结论]这些标记不仅可用于亲本材料和杂交品种的真伪鉴别,还可为杂交种纯度的鉴定提供可靠的方法,对亲本知识权的保护及杂交种推广具有重要意义.     

三倍体毛白杨无性系的AFLP分子标记鉴定

利用AFLP标记技术采用MseⅠ+3/EcoRⅠ+2引物组合,对12个三倍体毛白杨和二倍体毛白杨无性系进行了分析鉴定. 从38对引物组合中选出12对扩增条带较多的引物组合,多态性比例最高的是M-CAT/E-TC,多态性水平达到32.4%,最低的M-CTT/E-TT只有15.7%,证明供试材料之间的亲缘关系较近;UPGMA聚类分析结果与供试材料的系谱关系以及形态鉴别结果一致,表明凡亲本相同或形态差异小的无性系具有较高的相似系数;利用3个引物组合的8条多态性条带构建了12个供试材料的指纹图谱,可以作为三倍体毛白杨无性系鉴别以及品种保护的依据.      

玉米SSR与盐溶蛋白指纹图谱分析

利用SSR标记法与盐溶蛋白法对32份玉米自交系和13个杂交种的指纹图谱进行分析，结果表明，盐溶蛋白图谱中共有35条不同的谱带，多态性信息量占74．29％。筛选了50个SSR引物，其中6个多态性好的SSR引物能区分所有供试材料。在32个自交系中共检测到29个等位基因，平均每个引物4．83个，多态性信息量占93．10％。仅用2个引物就检测到10个位点，把13个杂交种分开，并构建了13个杂交种的数字指纹图谱。     

鸭茅杂交种SRAP分子标记鉴定及遗传分析

【目的】利用分子标记技术对鸭茅杂交种进行快速鉴定和遗传分析,建立鸭茅杂交种的快速鉴定体系,揭示鸭茅杂交种群体遗传信息,为鸭茅资源保护利用及新品种选育提供科学依据。【方法】利用SRAP标记技术对140个鸭茅杂交种单株及其亲本(01996、YA02-103)DNA进行扩增,分析杂交种与其亲本间扩增谱带的多态性,以鉴别真假杂交种,并结合形态标记对杂交后代的遗传变异进行分析。【结果】从192对SRAP引物中筛选出64对引物在杂交种和双亲间存在扩增多态性,多态性百分比为33.33%。利用能扩增出父本特征带的引物鉴定了140个杂交种,其中106个具有父本的特征带,可鉴定为真杂交种。选择16对多态性引物对亲本和106个真杂交种进行扩增,获得151条条带,其中多态性条带71条,平均每对引物扩增出4条多态性条带,多态性位点百分比为47.24%。【结论】SRAP用于鸭茅杂交种鉴定及多态性分析是可行的。     

24份葡萄种质亲缘关系的ISSR分析

利用ISSR标记对24份葡萄材料进行了基因组多态性分析,从50条引物中筛选出6条扩增稳定且多态性丰富的引物用于葡萄的ISSR扩增。共扩增出59条条带,其中多态性条带53条,多态性百分率为90%。根据ISSR扩增结果,利用NTSYSpc2.10e软件进行Jaccard相似性系数分析,24份葡萄材料的遗传相似系数为0.42～0.88,平均遗传相似系数为0.6495。在遗传相似系数为0.55处,24份葡萄材料明显分为2大类群。第1类包含10个欧美杂种、7个欧亚种、1个华欧杂种,第2类包含3个美洲杂交种、1个河岸葡萄、1个冬葡萄、1个东亚葡萄。由此可见,美洲杂交种与欧美杂种、欧亚种葡萄的亲缘关系较远,欧美杂种与欧亚种葡萄之间亲缘关系较近。此外,引物BC820与引物BC847分别在我国自主选育砧木品种华佳8号与抗砧3号中扩增出一条特异条带,可为利用ISSR标记鉴定葡萄品种或品系提供参考依据。     

应用SSR技术进行白菜品种纯度鉴定的研究

以5个白菜杂交种和8个亲本为试验材料,利用白菜单粒干种子DNA快速提取方法,筛选出能够区分5个杂交种与双亲,并具有互补带型的SSR引物,建立适于SSR分子标记检测白菜种子品种纯度的反应体系。试验结果证明这套检测技术体系可用于白菜杂交种品种纯度室内快速鉴定,从而为SSR分子标记技术在白菜种子纯度鉴定中的应用和推广打下了坚实的基础。     

核桃(Juglans regia)SRAP标记反应体系建立的研究

以核桃早实优系“绿园”和晚实优系“绿丰”及其F1杂交后代为试材,对核桃SRAP标记反应体系及SRAP标记在核桃中的多态性进行了研究。Mg2 是影响SRAP-PCR反应的重要因子,当Mg2 浓度为2.5mmol/L时,能得到较好的扩增效果。利用11对引物组合对两亲本及其杂交后代进行了SRAP-PCR扩增,以引物组合Em10-Me4多态性最高,在154个杂交后代单株中,扩增出1509条DNA条带,其中多态性条带为824条,多态性比率达54.6%。结果表明,SRAP标记可广泛应用于核桃的遗传多样性分析、种质鉴定、遗传连锁图谱的构建等方面的研究。