猪细环病毒数字PCR定量检测方法的建立

[目的]实现猪细环病毒(TTSuV)的准确定量检测。[方法 ]根据TTSuV的序列特点,设计特异性引物、探针,建立数字PCR检测技术。对数字PCR反应体系中的引物和探针浓度进行优化,分析方法的灵敏度、特异性,并初步应用于进行临床检测。[结果 ]最终确定TTSuV1a和TTSuV1b数字PCR反应体系中最佳引物浓度均为250 nmol/L,最佳探针浓度均为300 nmol/L,TTSuV1a型和TTSuV1b型灵敏度均可达到单个拷贝数;以猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,结果无交叉反应;批内和批间试验表明,该方法的重复性良好;本实验室留存的92份血清样本的检测结果与其背景信息一致。[结论 ]本研究建立的TTSuV数字PCR法具有特异性强、灵敏度高、检测限低等优点,可用于TTSuV的定量检测。     

猪细环病毒LAMP检测方法的建立

为建立一种特异和快速的猪细环病毒(TTSuV)检测方法,本研究通过比对TTSuV的全基因序列,选择其保守区域,设计了针对TTSuV检测的LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪对反应体系及条件进行了优化,建立TTSuV环介导等温扩增的检测方法.结果表明:该方法最佳反应条件为64℃恒温50 min,病毒的最低检出限为5.5拷贝/μL,并且与其他相关传染病无交叉反应.临床样品检测结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒-(PRRSV)和2型猪圆环病毒(PCV2)阳性的样品中TTSuV呈高阳性率,分别为92％和87.3％,显著高于非PRRSV和PCV2阳性的猪群.该方法的建立为快速及特异性的检测猪TTSuV提供了有效的方法.     

猪细环病毒两种基因型双重PCR检测方法的建立

为建立检测猪细环病毒两种基因型(PTTV1和PTTV2)的双重PCR方法,本研究根据GenBank中PTTV1、PTTV2的UTR基因序列,设计合成了2对特异引物,并通过对扩增条件的筛选,建立了PTTV1和PTTV2的双重PCR检测方法。该方法可以同时扩增PTTV1的324 bp和PTTV2的522 bp特异性片段,而扩增猪圆环病毒2型和猪细小病毒DNA结果均为阴性,对PTTV1和PTTV2的最低检出量分别为100 copies和10 copies。该方法适合对PTTV1和PTTV2的联合检测。     

猪巨细胞病毒检测方法研究进展

猪巨细胞病毒病是危害养猪业的一种重要传染病。文章概述了猪巨细胞病毒(PCMV)实验室检测方法的研究进展。在细胞生物学方面,主要依靠病毒分离培养、酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光试验(IFA)等病毒特异性抗原及其抗体的检测等。在分子生物学方面,主要依靠国内外相继建立起的聚合酶链式反应(PCR)、荧光定量PCR、环介导等温扩增(LAMP)和原位杂交(ISH)技术等。介绍和比较了各种方法的优缺点和实用性,为临床科技工作者建立快速、简便、准确、实用的检测方法提供参考。     

猪流行性腹泻病毒检测方法研究进展

介绍了猪流行性腹泻病毒实验室检测方法的研究进展,在细胞生物学方面,主依靠病毒分离培养、病毒电镜形态检查、病毒特异性抗原及其抗体的检查等检测方法;在分子生物学方面,主依靠核酸杂交技术、RT—PCR法和实时荧光定量RT—PCR法等检测方法。介绍和比较了各种方法的优缺点和实用性,为临床兽医科技工作者提供参考。     

猪捷申病毒检测方法研究进展

猪捷申病(PTD)是危害养猪业的一种重要传染病,论文概述了猪捷申病毒(PTV)实验室检测方法的研究进展.在细胞生物学方面,主要依靠病毒分离培养、病毒电镜形态检查、病毒特异性抗原及其抗体的检查等.在分子生物学方面,主要依靠国内外相继建立起的RT-PCR技术和实时荧光定量RT-PCR技术等.介绍和比较了各种方法的优缺点和实用性,为临床兽医科技工作者建立快速、简便、准确、实用的检测方法提供参考.     

猪细环病毒流行病学及致病性研究进展

猪细环病毒(Torque teno sus virus,TTSuV)1999年由美国学者报道,随后多个国家都相继证实了该病毒在猪群中广泛存在。文章就猪细环病毒流行范围、病毒遗传变异、易感动物、传播途径和其致病性最新研究进行综述。     

猪伪狂犬病病毒检测方法研究进展

随着免疫学与分子生物学技术日臻完善,针对猪伪狂犬病的血清学方法和分子生物学检测方法不断改进.论文就近年来针对猪伪狂犬病病毒的中和试验、酶联免疫吸附试验、乳胶凝集试验、胶体金免疫层析、核酸探针、基因芯片、多重PCR、LAMP等检测方法研究概况做一综述,为寻找合适的快速准确的检测方法、制定合理的免疫程序和发展新型的检测方法...     

猪圆环病毒检测技术研究进展

猪圆环病毒(PCV)分为1型(PCV-1)和2型(PCV-2).PCV-1一般认为无致病性,而PCV-2是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PWMS)的主要致病因子;此外,猪皮炎肾病综合征(PDNS)、仔猪先天性震颤(CT)等疾病也与PCV-2有关.在临床上PCV-2常与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪流感病毒(SIV)等病毒混合感染,PCV-2相关疾病已经给世界养猪业造成了巨大的经济损失.然而,由于该病常常和上述几种疾病混合感染,且其临床症状十分类似,所以仅仅依靠单一的临床症状或者某一种实验室诊断方法并不能有效的检测该病.因此,将目前诊断PCV-2的各种方法集中起来,分析其优缺点,从而可以根据实验室的具体情况采取合适的方法是诊断该病的关键.论文就目前PCV-2的检测技术做一介绍.     

猪细环病毒PCR-DHPLC检测技术的建立及应用

为了应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测猪细环病毒1型和2型,根据猪细环病毒的序列特点设计特异性引物,PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测。选择猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,无交叉反应。该检测方法具有较好的特异性和重复性;用质粒标准品进行TTSuV1和TTSuV2的PCR-DHPLC检测,灵敏度可达1.0×101拷贝·μL-1。对80份血清样本分别应用实时荧光PCR法、PCR-凝胶电泳法及本文所建立的PCR-DHPLC法与进行检测,发现TTSuV1有63份PCR-DHPLC阳性,63份实时荧光PCR阳性,54份PCR-凝胶电泳阳性;TTSuV2有69份PCR-DHPLC阳性,69份实时荧光PCR阳性,56份PCR-凝胶电泳阳性。本试验建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于TTSuV感染的分子流行病学调查。     

猪细环病毒2型环介导等温扩增检测方法的建立

为了能快速、特异的检测猪细环病毒2型(TTSuV2),本研究针对TTSuV2全基因序列的非编码区域和第1个开放性阅读框前端设计了2对引物,建立了TTSuV2的环介导等温扩增(LAMP)检测方法并对反应成分和条件进行了梯度摸索。试验结果显示,该LAMP检测方法最佳反应条件为64 ℃恒温90 min,可特异性检测TTSuV2,与猪细环病毒1型、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪博卡病毒无交叉反应,病毒最低检出限为100拷贝/μL。结果表明,建立的LAMP方法具有快速、特异且灵敏的特点,可在TTSuV2快速检测方面提供一定的技术支持。     

对青岛地区4个猪场的猪细环病毒II型的分子流行病学调查

为了解青岛地区各猪场中猪细环病毒II型（TTV2）的存在和感染情况,本实验对2012年3月至5月期间采自青岛地区4个猪场的59份猪血清样品利用病毒核酸提取试剂盒进行了猪细环病毒DNA提取,在此基础上利用TTv2的特异性引物进行PCR检测。结果显示只有莱西1个猪场的血清样品中检测到阳性,阳性率为13．8％,并且存在TTV1与TTV2混合感染的情况,混合感染率为6．9％。本实验结果证实某些猪场中存在猪细环病毒感染,由于TTV在猪的多系统衰竭综合征的病症发展中可能扮演一定角色,所以了解TTV在猪场中的存在状况具有重要意义。     

猪细环病毒和猪圆环病毒2型混合感染状况的调查

为分析我国猪细环病毒(TTSuV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的共感染情况,利用所设计的TTSuV(TTSuV1、TTSuV2)和PCV2特异性引物对我国29个省市采集的猪群血清样品同时进行PCV2和TTSuV(TTSuV1、TTSuV2) PCR检测,分析混合感染情况.结果所检测的1898份样品中,TTSuV阳性为1103份(58％),PCV2阳性为435份(23％).阳性样品中呈混合感染的有275份(14％),其中TTSuV1和PCV2为249份(13％),TTSuV2和PCV2为200份(10％),均为阳性的有174份(9％).调查结果显示,我国猪群中TTSuV和PCV2混合感染现象较为普遍,对地区性分布特征和饲养模式等影响因素的分析表明TTSuV和PCV2混合感染情况存在地区性差异(P＜0.01),但饲养模式并不是共感染的关键因素.     

猪圆环病毒检测技术研究进展

猪圆环病毒病是由猪圆环病毒(PCV)感染引起的,以免疫抑制为特征的一类病毒性传染病,临床表现主要是由PCV-2引起的仔猪断奶后多系统衰竭综合征。文章就近几年国内外对该病毒检测技术,包括病毒分离、电镜观察、聚合酶链式反应、间接免疫荧光试验、免疫组织化学技术、酶联免疫吸附试验、原位核酸杂交试验等的研究进展做了阐述。     

我国部分地区猪圆环病毒2型和猪细环病毒混合感染的调查

为了解猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪细环病毒(TTV)混合感染情况,用PCR方法对来自湖南、江西、广东、福建和广西五省区的193份猪组织样品进行PCV-2、TTV-1和TTV-2进行检测。结果显示,PCV-2感染率为61.1%(118/193),PCV-2和TTV-1混合感染率为32.1%(62/193),PCV-2和TTV-2混合感染率为16.9%(32/193),3种病原混合感染率为9.8%(19/193),2006年PCV-2和TTV的混合感染率最高。由此可见,目前猪群中存在PCV-2和猪TTV的混合感染,PCV-2和TTV-1型混合感染率高于和TTV-2型的混合感染率,且存在一定比例的三重感染情况。     

猪圆环病毒检测技术研究进展

猪圆环病毒是近年来新发现的畜禽病毒之一,疑为一种潜在人兽共患病病原,具有重要的经济意义。文章就其检测技术,如病毒分离、电镜观察、聚合酶链式反应(PCR)、多重PCR、多重套式PCR、定量竞争性PCR、PCR 限制性片段长度多态性分析(PCR RFLP)、免疫组织化学技术(IHC)、原位杂交技术(ISH)等的研究进展做一阐述。     

猪瘟病毒检测方法研究进展

猪瘟是严重危害养猪业健康发展的主要病毒性传染病,发病急,死亡率高,是一种高度接触性的病毒性传染病。本文主要综述猪瘟病毒检测方法,为猪瘟病毒的实验室诊断提供参考。     

新城疫病毒检测方法研究进展

新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种禽类急性、高度接触性、致死性传染病,被国际动物卫生组织(OIE)列为危害禽类的A类传染病之一.由于该病毒毒力存在差异,容易出现毒力返强或是导致发生非典型症状,快速、可靠、准确的诊断方法对于新城疫的监测和控制具有重要意义.本文从病毒的分离与鉴定、电镜技术、血清学方法以及分子生物学诊断技术4个方面介绍了新城疫病毒的检测技术,为今后兽医临床上检测新城疫病毒提供一定的参考.     

猪流行性腹泻病毒检测技术研究进展

猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一种高度接触性肠道传染病,以腹泻、呕吐、脱水和对哺乳仔猪高致死率为主要特征,给养猪业带来严重的经济损失。及时准确地诊断PEDV感染对于预防和控制PED至关重要,目前已经开发了许多用于PEDV、病毒蛋白及核酸的检测方法,包括病毒分离、酶联免疫吸附试验、直接免疫荧光检测、免疫组织化学技术、免疫层析技术等免疫学方法;RT-PCR、实时定量RT-PCR、核酸等温扩增技术、CRISPR-Cas系统检测技术等分子生物学方法。本文针对PEDV的抗原检测技术和方法进行综述,以期为PEDV的临床监测和PED的防控提供参考。