抑制UCHL1对猪卵母细胞体外成熟、透明带泛素化及多精入卵的影响

试验旨在研究抑制泛素羧基末端水解酶-1（UCHL1）对猪卵母细胞体外成熟、透明带泛素化及多精入卵的影响。利用DAPI染色、Hoechst染色及SDS-PAGE等方法检测猪卵母细胞体外成熟率、透明带泛素化水平及多精入卵等情况。结果表明,添加不同浓度UCHL1抑制剂（10、20、25、30 μmol/L,二甲基亚砜（DMSO）及对照组）体外培养猪卵母细胞46 h后,对照组成熟率为86.22%,而30 μmol/L UCHL1抑制剂组的成熟率为15.30%,且各处理组间成熟率差异显著（P<0.05）;经Western blotting检测,各处理组的透明带在约61、80、106 ku处均发生不同程度的泛素标记,通过灰度值分析差异显著（P<0.05）;进行体外受精试验后,发现对照组透明带精子黏附数最多,精子入卵数较少,添加30 μmol/L UCHL1抑制剂组的透明带精子黏附数最少,几乎没有精子入卵。结果显示,UCHL1抑制剂对猪卵母细胞的体外成熟有一定影响,随着UCHL1抑制剂浓度的增加,透明带发生泛素化的程度逐渐降低,且UCHL1可调节透明带精子黏附及多精入卵。     

钙离子载体对猪去透明带卵孤雌发育的影响

比较了不同浓度(0.625～10.0μmol/L)的钙离子载体(A23187)结合DMAP(2 mmol/L)处理对经体外成熟培养后去除透明带的猪卵母细胞孤雌激活效果.孤雌激活卵采用微穴法(WOWs)体外培养至第7 d.试验结果表明,使用2.5 μmol/L的A23187激活猪去透明带卵效果最好,其第7 d的发育囊胚率(24.6%)显著高于0.625～1.25 μmol/L组(8.1%～12.8%,P＜0.05).当A23187激活浓度增加到10.0 μmol/L时,去透明带卵激活处理后的死亡率(29.5%)明显高于其它各组(0%～4.9%).采用钙离子载体A23187激活体外成熟猪去透明带卵,其最佳推荐浓度为2.5μmol/L.     

猪卵母细胞体外成熟中添加PPi改变透明带泛素化水平及精卵结合能力

本研究主要目的是评价猪卵母细胞成熟培养中添加无机磷酸盐焦磷酸(PPi)对卵母细胞成熟、透明带泛素化水平及精卵结合能力的影响。试验设置对照组及0.1、1、5μg/m L 3个添加PPi处理组,检测卵母细胞成熟率、透明带泛素化水平及精卵结合情况。结果显示:1μg/m L PPi处理组卵母细胞成熟率为75.06%,显著高于对照组(P0.05);1μg/m L PPi处理组透明带泛素化水平显著高于其他各组(P0.05);1μg/m L PPi处理组透明带酶解时间为278.93 s,显著低于对照组(P0.05);1μg/m L PPi处理组精子黏附率为83.24,显著低于对照组(P0.05)。结论:PPi显著提高卵母细胞体外成熟率和透明带泛素化水平,降低透明带溶解时间和精子黏附率。     

诱导牛精子体外获能方法的研究

用去透明带的金黄地鼠卵异种精子体外穿透试验,检测冻精复苏,经各种处理后的精子穿卵率,结果表明,B0培养基,经咖啡因2mmol/L,肝素50μg/ml处理,并添加亚牛磺酸70μmol/L和透明质酸酶1g/L,是诱导牛精子体外获能的有效方法。     

羧甲基纤维素钠对猪精液常温保存效果的影响

在猪人工授精技术中,良好的稀释剂是提高猪精子质量的关键因素之一。为探讨羧甲基纤维素钠(CMC)对猪精液常温保存效果的影响,本研究以传统的猪精液保存稀释剂Zorlesco(-BSA)为基础稀释液,通过添加不同浓度的CMC(0、8、16和24μmol/L)对原精液进行稀释和保存。采用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活率和活力,低渗肿胀法(HOST)检测精子质膜完整性,考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整性。结果显示,在猪精液保存的前3d内,添加不同浓度CMC组的精子活率和活力与对照组相比较高,但差异不显著(P0.05);保存4~7d时,与对照组相比添加16μmol/L CMC组的精子活率和活力明显升高(P0.05)。在保存的前4d内,添加不同浓度CMC组的精子质膜完整率和顶体完整率与对照组相比差异不显著(P0.05),但在保存至5~7d时,添加16μmol/L CMC组的质膜完整率和顶体完整率显著高于对照组(P0.05)。猪精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率之间存在极显著的正相关关系(P0.01),在Zorlesco稀释剂中添加8~24μmol/L的CMC能显著改善和提高猪精子活率、活力、质膜完整性以及顶体完整率,其最佳添加浓度为16μmol/L。CMC可作为精液稀释剂中的悬浮剂,用于减缓精子沉降速率,提高猪精液保存质量。     

海藻糖对民猪精液冷冻保存的影响

为研究海藻糖在民猪精液冷冻中的作用,获得最佳民猪精液冷冻液成分,本试验在BTS、Modena和Zorlesco 3种稀释液基础上添加0.15 mol/L海藻糖,及在Zorlesco稀释液中分别添加0 mol/L、0.1 mol/L、0.15 mol/L和0.2 mol/L的海藻糖,研究海藻糖在不同稀释液中及其不同浓度对冷冻的民猪精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体膜电位的影响。结果表明,在Zorlesco稀释液中添加0.15 mol/L海藻糖可明显提高民猪冷冻精子的质量,使精子活率、质膜完整性、顶体完整率和线粒体活性分别达到(44.0±2.4)%、(58.2±2.4)%、(53.2±2.1)%和(51.3±2.3)%,为各组最佳(P<0.05)。将0.15 mol/L海藻糖分别添加在BTS、Modena和Zorlesco3种稀释液中发现,其中在Zorlesco稀释液添加海藻糖效果优于其他两组(P<0.05)。但海藻糖对冷冻前精子的保护作用不明显(P>0.05)。因此,在Zorlesco稀释液中添加1.5 mol/L的海藻糖能够明显提高民猪精子冷冻后质量,是民猪冷冻保存的适宜保护液。     

精液稀释液中添加维生素C和E对陆川猪精液冷冻效果的影响

为了研究维生素C和E作为精液冷冻保护剂对陆川猪细管冷冻精液品质和精浆中抗氧化物酶活性影响的影响,在精液稀释液中分别添加0、300、600以及900μg/m L的维生素C或E,对陆川猪稀释精液进行冷冻-解冻处理后,检测精液冻后的精子活力、运动速率、线粒体活性、顶体和质膜完整性、存活时间等常规参数,采用试剂盒测定精浆中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)以及谷胱胺肽过氧化物酶(GSHPx)的活性。结果表明:精液稀释液中添加300μg/m L的维生素C可显著提高冻后精子的体外存活时间以及CAT酶活性(P0.05);同浓度的维生素E仅可提高精子的存活时间(P0.05);添加600μg/m L的维生素C或E可以显著提高解冻精子的活力、线粒体活性、质膜和顶体完整性、存活时间以及抗氧化物酶活性(P0.05),同时明显降低精子畸形率(P0.05);当维生素C或E添加量为900μg/m L时,虽可提高线粒体活性、质膜和顶体完整性、CAT酶活等部分指标参数(P0.05),但精子活力与对照组相比没有差异(P0.05)。提示:冷冻稀释液中添加600μg/m L的维生素C或E可以显著提高陆川猪精液冷冻保存效果。     

锰苯甲酸卟啉对猪精液冷冻保存效果的影响

本实验旨在探究锰苯甲酸卟啉（MnTBAP）对猪精液冷冻保存的影响,从而筛选出适用于猪精液冷冻的MnTBAP浓度。实验一共分为6组：新鲜组、冷冻对照组、不同浓度MnTBAP组（在冷冻液I中添加50、100、150、200μmol/LMnTBAP）,对冷冻后猪精子动力学参数以及活率进行检测,从而筛选出适用于猪精子冷冻的最佳MnTBAP浓度。实验二共分成3组：新鲜组、冷冻对照组、最佳MnTBAP浓度组,对冷冻后猪精子质膜完整率、顶体完整率、DNA碎片指数（DFI）、线粒体膜电位（MMP）、活性氧（ROS）进行检测。结果表明：与其他浓度的MnTBAP组相比,100μmol/L MnTBAP对动力学参数以及活力改善最显著;与冷冻对照组相比,100μmol/L MnTBAP组猪精子质膜完整率、顶体完整率、MMP和抗氧化酶显著升高,DFI、ROS显著降低。综上所述,在冷冻液稀释中添加MnTBAP可以改善猪精液冷冻后的质量,且最适添加浓度是100μmol/L。     

葡萄籽原花青素对猪精液冷冻保存效果的研究

在猪精液冷冻基础液中分别添加0μg/mL,10μg/mL,20μg/mL,30μg/mL,40μg/mL,50μg/mL的葡萄籽原花青素,通过对冷冻-解冻后猪精子的动力学参数、生理参数以及生化参数的检测,旨在研究其对猪精液冷冻保存效果的影响。结果表明,当葡萄籽原花青素添加浓度为20μg/mL和50μg/mL时,解冻后精子活力、活率、顶体完整率、线粒体活性、质膜完整性和酶活性都显著高于对照组(P0.05),但是两组间比较差异不显著(P0.05)。与对照组和其他实验组相比,当葡萄籽原花青素添加浓度为40μg/mL时,精子畸形率降低了9.30%,精子活力、活率、顶体完整率、线粒体活性和质膜完整性分别提高了12.59%、11.78%、14.27%、12.53%和11.96%(P0.05)。当葡萄籽原花青素的添加量为40μg/mL时,MDA的量最低为1.16nmol/mg,SOD和GSH-Px酶活性最大分别为77.36U/mg、35.21U/mg。结果显示,在猪精液稀释液中添加一定浓度的葡萄籽原花青素,可以显著提高冷冻-解冻后猪精子品质和抗氧化能力。当葡萄籽原花青素的添加量为40μg/mL时,其对猪精子冷冻保存效果最好。     

海藻糖和维生素C对猪精液冷冻保存效果的影响

试验比较了在冷冻稀释液中添加不同浓度海藻糖(0.025,0.05,0.1 mol/L)以及添加10 mg/L维生素C对猪精液冷冻保存效果的影响.结果:(1)添加0.025 mol/L海藻糖组的精子冻后活率与复苏率分别跟对照组相比无显著差异(P>0.05),但添加浓度为0.05,0.1 mol/L的海藻糖组的精子活率和复苏率显著低于对照组(P<0.05).(2)在猪精液冷冻保存稀释液中,添加维生素C组的精子冻后活率和复苏率极显著高于对照组(P<0.01).表明在猪精液冷冻液中,添加0.025,0.05,0.1 mol/L 3种不同浓度的海藻糖对猪精液没有起到保护作用,其中后两者对之有降低的作用;而添加10 mg/L维生素C可取得较好的冷冻保存效果.     

羧甲基纤维素钠对4℃保存藏猪精液指标的影响

试验旨在研究羧甲基纤维素钠(CMC)对藏猪精液4℃保存效果的影响,采用电刺激法采集健康藏猪精液,在改进的猪精液低温稀释液为基础液中,添加不同浓度的CMC(0、6、12、18和24μmol/L),将藏猪种公猪新鲜精液稀释后于4℃环境保存至第5天,以藏猪精子活力、精子畸形率和精子顶体完整率为评价精液品质指标,探讨CMC对藏猪精液4℃保存效果的影响。结果显示:12μmol/L CMC添加组藏猪精子活力、精子畸形率、精子顶体完整率均极显著好于其他试验组(P0.01)。总之,在改进的猪精液稀释液中添加CMC 12μmol/L可明显改善4℃环境保存藏猪精液品质,该试验研究为今后藏猪精液低温保存的生产应用奠定了基础。     

稀释液中添加海藻糖对猪冷冻精液质量参数和活性氧的影响

本试验旨在探讨海藻糖对猪精子冷冻效果以及精子内活性氧(ROS)的含量影响。试验分对照组和4个海藻糖处理组(0.025,0.05,0.1和0.2 mol/L)。精子冷却后,添加0.1 mol/L海藻糖处理组精子活力显著(P<0.05)高于对照组,而精子内和稀释液中各组间ROS发生量都没有显著的差异。精子冷冻解冻后,添加0.05 mol/L海藻糖处理组的精子活力显著(P<0.05)高于对照组;添加0.05 mol/L和0.1 mol/L海藻糖处理组的精子生存率显著(P<0.05)高于对照组;添加0.1 mol/L海藻糖处理组顶体完整的精子百分比显著(P<0.05)高于对照组;4个海藻糖处理组膨胀精子百分比都显著(P<0.05)高于对照组;添加0.025 mol/L海藻糖处理组ROS水平显著(P<0.05)低于对照组。结果表明:海藻糖对精子冷冻保存是有益的,且能抑制精子内ROS的发生,但它的作用机制有待于进一步的研究。     

Sch B对猪精液常温保存效果的影响

为了研究五味子乙素(Sch B)对猪精液常温保存效果的影响,本实验设计6个猪精液常温保存稀释粉配方,在筛选出的最佳自配基础稀释粉配方中添加了0、1、5、10、15μmol/L的Sch B,通过检测精子活率、质膜完整性、顶体完整性以及总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量,分析Sch B对猪精液常温保存效果的影响。结果表明:6号基础稀释粉猪精液常温保存效果最佳,有效保存时间为4d,精子活率为0.63,质膜完整率为59.33%,顶体完整率为78.29%,均显著高于其他处理组(P0.05);在6号自配基础粉中加入10μmol/L Sch B猪精液的有效保存时间为5d,精子活率达到0.61,T-AOC浓度为4.85 U/mL,显著高于其他处理组(P0.05),并使MDA浓度显著降低为1.44nmol/mL(P0.05)。因此,基础稀释粉中添加Sch B可提高猪精液常温保存品质,延长精子有效保存时间,其最佳添加量为10μmol/L。     

L-肉碱对猪精液冷冻保存效果的研究

本试验用5%二甲基甲酰胺(DMF)替代甘油作为冷冻保护剂,研究不同浓度(0、0.02、0.04、0.06、0.08 mg/mL)L-肉碱对猪精液冻后常规指标(精子活率、线粒体活性、顶体完整性、质膜完整性)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化酶(T-AOC)活性以及丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明:添加0.04和0.06 mg/mL的L-肉碱可有效改善猪精液冷冻后效果。0.04 mg/mL组可显著提高精子冻后活率和线粒体活性(P<0.05);0.06 mg/mL组可显著提高顶体完整性和质膜完整性(P<0.05)。添加0.06 mg/mL L-肉碱可显著提高冷冻后精子内T-AOC酶活性并且抑制MDA的产生(P<0.05),但CAT活性与0.04 mg/mL组差异不显著。在冷冻稀释液中添加0.06 mg/mL L-肉碱可以提高猪精液冷冻保存效果。     

添加咖啡因、亚牛磺酸对牛精子功能的影响

为研究获能液中添加咖啡因和亚牛磺酸对牛精子功能的影响,本研究将荷斯坦牛冻精解冻后分别添加在含不同浓度咖啡因(0、2.5、5.0、7.5mmol/L)或亚牛磺酸(0、5、10、20、40μmol/L)的获能处理液中,且每个处理组加入约200μL的精液,在CO_2培养箱里经上游处理45min,以评估咖啡因和亚牛磺酸对牛精子活力、顶体及质膜完整性的影响,进而探讨在获能液中亚牛磺酸替代咖啡因的效果。结果显示,添加2.5、5.0mmol/L咖啡因组经上游法获能处理后的牛精子活力和顶体完整率均显著高于对照组(P0.05),且2.5mmol/L咖啡因组精子活力最高;添加10、20μmol/L亚牛磺酸组经上游法获能处理后的牛精子活力、顶体完整率和质膜完整率均显著高于对照组(P0.05),且20μmol/L亚牛磺酸组的精子功能参数值最高;将筛选的最佳浓度2.5 mmol/L咖啡因和20μmol/L亚牛磺酸采用同样的方法处理,发现20μmol/L亚牛磺酸组的精子顶体完整率和质膜完整率均显著高于2.5mmol/L咖啡因组和对照组(P0.05)。因此,20μmol/L亚牛磺酸可以替代2.5mmol/L咖啡因用于体外受精体系中的精子获能处理,有助于提高精子功能参数。     

外源NO对镉胁迫下草地早熟禾幼苗根系生长及生理的影响

为了探究外源NO对镉胁迫下草地早熟禾幼苗生理特性的影响,以草地早熟禾品种午夜(Poa pratensis cv.Midnight)为试验材料,研究在1 000μmol/L的镉胁迫下, 50μmol/L的外源NO对镉胁迫的缓解效应,试验共设置4个处理CK(蒸馏水)、Cd、NO、Cd+NO。NO供体硝普钠(SNP)采用叶面喷施,Cd处理采用根部施入,测定NO对草地早熟禾幼苗叶片相对含水量、丙二醛含量、游离脯氨酸含量、抗氧化酶活性及根系总根长、根表面积、根尖数、分支数、交叉数的影响。结果表明:Cd胁迫可降低早熟禾相对含水量,抗氧化酶活性,增加MDA和脯氨酸的积累,抑制根系生长;Cd胁迫下添加NO可增加草地早熟禾叶片相对含水量,提高抗氧化酶活性,减少MDA和游离脯氨酸的累积,增加总根长、总根表面积、根尖数、分支数、交叉数。试验表明1000μmol/L的镉胁迫可加重草地早熟禾氧化损伤,抑制草地早熟禾幼苗生长,施加50μmol/L NO可提高抗氧化酶活性,降低游离脯氨酸的累积和促进根系生长,缓解镉胁迫对草地早熟禾的生长抑制。     

抑制泛素结合酶改变猪卵母细胞透明带泛素化状态及精-卵结合能力

本研究旨在探究猪卵母细胞体外成熟过程中添加泛素结合酶(E2)抑制剂对卵母细胞透明带蛋白泛素化水平及精-卵结合能力的影响。试验分为6组:对照组、DMSO组、5、10、15和20μmol·L^-1 NSC697923处理组。采用Western blot方法分析体外成熟培养液中添加不同浓度泛素结合酶抑制剂NSC697923对猪卵母细胞透明带泛素化水平表达的影响。通过Hoechst染色检测不同组别的精卵结合能力。结果表明:1)猪卵母细胞体外成熟培养液中,添加10、15和20μmol·L^-1 NSC697923显著降低卵母细胞成熟率(P<0.05),透明带硬化时间(P<0.05)以及精卵结合率(P<0.05)。2)对照组和各处理组的透明带蛋白在61、81、106 ku处发生不同程度的泛素化标记,而添加15和20μmol·L^-1 NSC697923显著地降低透明带蛋白泛素化水平(P<0.05)。综上表明,猪卵母细胞体外成熟过程中泛素结合酶(E2)改变成熟卵母细胞透明带泛素化水平以及精卵结合能力。     

大豆异黄酮抵抗体外培养猪脂肪细胞氧化损伤的作用

为了探明大豆异黄酮对猪脂肪细胞氧化损伤的保护效应,试验分别用含0、10、20、40μmol/L和80μmol/L异黄酮S(一种合成的大豆异黄酮)或三羟基异黄酮(GEN)的完全培养液培养猪脂肪细胞48h,用终浓度为100μmol/L的FeSO4和H2O2溶液进行氧化处理1 h。结果表明:与正常对照组相比,氧化对照组细胞内活性氧(ROS)水平和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量分别升高了1.61倍和2.74倍(P<0.01);与氧化对照组相比,添加10、20、40μmol/L和80μmol/L异黄酮S使细胞内ROS水平分别下降了24.62%(P<0.05)、20.03%(P<0.05)、37.88%(P<0.01)和41.20%(P<0.01);添加10、20、40μmol/L和80μmol/L GEN均显著降低了细胞内ROS水平(P<0.01)和MDA含量(P<0.05)。试验结果提示在本试验条件下,异黄酮S和GEN能通过抑制猪脂肪细胞的脂质过氧化、降低ROS产生,抵抗羟自由基对猪脂肪细胞的氧化损伤。     

某屠宰场杂交育肥猪胰脏功能研究初探

对某屠宰场150头杂交育肥猪的血液、尿液中的肌酐含量和淀粉酶活性进行了测定。结果表明,所测杂交育肥猪的血清中肌酐含量为110.50μmol/L±20.54μmol/L,淀粉酶活性为258.67 U/L±61.81 U/L;尿液中肌酐的含量为3 094.36μmol/L±397.57μmol/L,淀粉酶活性为196.82 U/L±16.83 U/L;淀粉酶和肌酐比值(CAMS/CCR)为2.72%±1.41%。     

在GW9662作用下共轭亚油酸对断奶仔猪淋巴细胞炎性细胞因子分泌的影响

实验主要探讨了GW9662对过氧化物酶体增殖物激活受体(γPPAR)γ的拮抗作用,以及PPARγ被拮抗后共轭亚油酸(CLA)对淋巴细胞炎性细胞因子TNF-α和IL-6分泌的影响。实验1设置5个处理:淋巴细胞培养体系中GW9662添加量分别为0、5、10、20μmol/L和40μmol/L。实验2设6个处理:空白对照组、20μmol/L的GW9662组、CLA处理组(c9,c11-CLA或t10,c12-CLA各100μmol/L)、CLA(c9,t11-CLA或t10,c12-CLA各100μmol/L)+20μmol/L GW9662处理组。结果表明:淋巴细胞PPARγ活性呈剂量依赖性地被GW9662抑制(P<0.05),而TNF-α和IL-6的分泌则随GW9662添加剂量的增加呈线性或二次曲线变化趋势(P<0.05)。这种变化随着培养体系中CLA的添加而得到缓解,即与20μmol/L GW9662处理组相比,CLA+GW9662处理组TNF-α和IL-6的分泌量显著降低(P<0.05),而与CLA处理组相比,TNF-α和IL-6的分泌量则无显著变化。从本实验可得出,PPARγ活性被GW9662抑制后,添加CLA同样可抑制淋巴细胞炎性细胞因子TNF-α和IL-6的分泌。