菠萝叶基愈伤组织诱导体细胞胚

以菠萝[Ananascomosus(L.)Merr.]吸芽上的叶基部组织为材料,研究了2,4-D、NAA、BA、TDZ在菠萝愈伤组织诱导体细胞胚过程中的影响。结果表明,2,4-D在体细胞胚诱导过程中起着极为重要的作用,其适宜浓度为5mg/L,适当浓度(1mg/L)的BA在降低畸形胚比例和增加体细胞胚发生率方面有重要作用,但BA也会促进愈伤组织分化不定芽;低浓度的TDZ与BA效果相似,在不同生长调节物质处理组合中,MS+0.01mg/LTDZ+5mg/L2,4-D培养基的体细胞胚发生率最高(97%)。低浓度NAA(2￣5mg/L)利于非胚性愈伤组织的增殖,而高浓度的NAA虽能促进体细胞胚发生,但这种体细胞胚很难继续增殖,在萌发时只生根不发芽。成熟体细胞胚在MS+0.2%活性炭上30d时的转株率为22.7%。     

影响洋葱愈伤组织及胚性愈伤组织诱导的因素研究

以洋葱雄性不育系种子(10-8F)为外植体,研究了蔗糖浓度、暗处理及取材时间对洋葱愈伤组织及胚性愈伤组织诱导的影响,以期优化胚性愈伤组织的形成条件,为转基因提供良好受体并为建立高频再生体系奠定基础.结果表明:40 g/L蔗糖及光培养最适合愈伤组织的诱导;50 g/L蔗糖及暗培养最适合胚性愈伤组织的诱导,最适宜的取材时间为45 d.     

橄榄胚性愈伤组织的诱导初探

橄榄 (ＣａｎａｒｉｕｍａｌｂｕｍＲａｅｕｓｃｈ )属于橄榄科橄榄属 ,为福建的特产名果。可鲜食 ,也可加工制成各种风味佳美的蜜饯 ,而且还有药用价值。由于橄榄树体高大 ,童期长 ,且缺乏遗传背景研究资料 ,常规育种遇到很大困难。本文报道诱导橄榄胚性愈伤组织的有效途径 ,以期为利用现代生物技术改良橄榄品种及快速繁殖苗木打下基础。1　材料与方法花后 40～ 5 0ｄ的橄榄幼果采自闽侯村下橄榄园 ,供试品种为福建省的主栽品种惠圆 ,树龄为 2 0年左右。橄榄幼果先用 75 %的酒精浸泡 1ｍｉｎ ,再用 0 1 %的升汞浸泡消毒 1 0ｍｉｎ ,无菌水…     

油松未成熟合子胚离体培养诱导胚性愈伤组织

研究了油松未成熟合子胚不同发育时期和不同植物生长调节剂组合对油松胚性愈伤组织诱导的影响。结果表明:在沈阳地区,油松未成熟合子胚诱导胚性愈伤组织的最佳采种时间为7月10日左右;以DCR为基本培养基,添加较低浓度的KT和较高浓度的2,4-D有利于油松胚性愈伤组织的诱导,其中以添加2,4-D 2mg/L和KT 0.5mg/L时诱导率最高,可达88.3%。     

本地早胚性愈伤组织耐盐性研究

柑桔是对盐分极度敏感的植物,盐分可导致柑桔焦叶、枯枝,生长抑制和品质变劣等,砧木对盐分也十分敏感,土壤中可溶性盐分的存在与增加,往往成为柑桔栽培的限制因子,因此,研究柑桔的耐盐性及选择耐盐品种类型,对柑桔栽培具有十分重要的意义。     

南丰蜜桔胚性愈伤组织的诱导

以南丰蜜桔"杨小—26"花药为外植体,培养诱导胚性愈伤组织。结果表明:在不同取材时期和培养基条件下,胚性愈伤组织发生率是不同的。南丰蜜桔花药培养的取材最佳时期是单核靠边期;培养基LP+TDZ3.0mg/L+A1.03.0mg/L+NAA1.0mg/L+10mg/LAgNO3较适于胚性愈伤组织再生,再生率高达20.3%;培养基配方中AgNO3对胚性愈伤组织再生无显著影响。本研究首次报道了南丰蜜桔花药离体培养,诱导出胚性愈伤组织。     

侧柏胚性愈伤组织的诱导研究

以侧柏未成熟合子胚、胚根为试材,研究了基本培养基、不同外植体、植物激素、合子胚发育阶段等因素对侧柏愈伤组织诱导的影响.结果表明:未成熟合子胚、胚根在适宜的培养基上都能诱导出愈伤组织,DCR+2.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+0.5 g/L谷氨酰胺是未成熟合子胚诱导愈伤组织的最佳培养基,诱导率高达96.67％.DCR+1.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA+0.5 g/L谷氨酰胺是胚根诱导愈伤组织的最佳培养基,诱导率高达93.33％.最佳采样时期为7月3日前后.     

荔枝胚性愈伤组织的诱导和保持

以荔枝绿沙，兰竹，东刘一号三个品种的４－７周幼胚为外植体，培养胚性愈伤组织的发生，结果表明，以２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ和ＢＡ０．５－１ｍｇ／Ｌ配合使用，可使以上三个品种的胚性愈伤组织诱地率分别为绿沙２３－２７％，兰竹２８．６－３０５．％，东刘一号２９－３３．７％。采用有激素和无激素培养基交替继代可以长期保持兰竹，东刘一呈的胚性愈伤组织。     

枣幼胚愈伤组织诱导和胚状体发生

以陇东马牙枣盛花后50～60d的幼胚为试材,采用三步培养法诱导胚状体。结果表明:诱导愈伤组织适宜的培养基为Nitsch培养基上附加BA 1.0mg/L+2,4-D 1.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4.0g/L。诱导胚状体培养基宜选用,MS+BA 1.0mg/L+IBA 0.2mg/L+LH0.5mg/L+VC 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4.0g/L,并获得完整植株。     

长寿花胚性愈伤组织的诱导及胚状体再生

 研究了长寿花胚性愈伤组织的筛选，胚状体的诱导发生、发育过程及植株再生。经过对外观及细胞学观察，看出外观质地疏松、颗粒状的淡黄色愈伤组织细胞圆形且形状规则，是胚性愈伤组织。诱导胚性愈伤组织的最适培养基为：MS+2，4-D 2 mg·L^-1 +BA 0.2 mg·L^-1；胚状体的诱导培养基为MS+BA 2 mg·L^-1 +NAA 0.2 mg·L^-1 +活性炭4 g·L^-1+蔗糖30 g·L^-1，胚状体诱导率可达185个胚状体；胚状体的再生培养基为MS+蔗糖30 g·L^-1。利用石蜡切片对胚状体的发生过程进行了观察。     

菠萝微卫星指纹图谱的构建

初步构建了菠萝种质的SSR指纹图谱,为菠萝种质鉴定提供了依据.从菠萝EST-SSR开发的20对微卫星引物扩增31份不同的菠萝种质,筛选出能够稳定扩增且带型差异明显的SSR引物.挑选5对多态性高、分辨率高、重复性好的SSR引物对,作为标准引物对材料进行扩增.每对引物得到的多态性带数8~15个,平均为11条;引物的多态信息...     

菠萝AcSERK1启动子的克隆及其初步活性分析

【目的】探讨Ac SERK1启动子的活性,为进一步研究Ac SERK1转录调控的分子机制提供依据。【方法】利用hi TAIL-PCR法从菠萝基因组DNA中分离Ac SERK1启动子序列,并利用Plant Care和PLACE分析该序列的顺式作用元件。将启动子与GUS融合,农杆菌真空渗透法浸染烟草叶片后,光照处理、暗处理和0.5 mg·L~(-1)2,4-D处理36 h后利用组织化学染色法检测GUS活性。【结果】克隆了Ac SERK1上游2097bp启动子序列,命名为P_(Ac SERK1)。预测结果显示,该序列除含有TATA-box、CAAT-box等真核生物启动子核心元件外,还含有生长素、赤霉素和茉莉酸甲酯等激素响应元件,高温和低温胁迫响应元件以及光响应元件。瞬时表达结果表明,在光和2,4-D的诱导下P_(Ac SERK1)具有启动基因表达的功能。【结论】分离获得了Ac SERK1启动子序列且该启动子在光和2,4-D诱导下能驱动GUS的表达。     

皇帝蕉薄片外植体愈伤组织的诱导及植株再生

将皇帝蕉试管苗茎段徒手切成厚约1mm的薄片,经无菌的0.5%柠檬酸溶液处理片刻后,接入各种培养基中。结果表明:(1)适度的暗培养预处理有利于愈伤组织诱导,合适暗培养天数为4d;(2)诱导愈伤组织最佳培养基为:B5+2,4-D13.572μmol/L+IBA4.921μmol/L+NAA5.371μmol/L+KT13.94μmol/L+椰乳5%+PP3330.0001mg/L,愈伤组织诱导率为86.0%;(3)最佳愈伤组织分化芽培养基为:改良MS培养基+BA13.6831μmol/L+NAA0.537μmol/L,芽分化率达到87.0%;(4)诱导芽生根的最佳培养基是:1/2MS+IBA0.492μmol/L(或+NAA0.537μmol/L),生根率达到100%。     

苹果砧木M26离体叶片愈伤组织发生及分类研究

对苹果砧木Ｍ２６ 离体叶片愈伤组织的发生研究表明,取继代后３０ ～３５ ｄ 的试管苗顶部１～４ 叶位的叶片,沿与主脉垂直方向横切后,以叶背面朝上方式置于愈伤组织诱导培养基上,经观察在叶片近柄端切口处愈伤组织发生较早,产生量较多。最适的愈伤组织诱导培养基为：ＭＳ＋２ ,４ － Ｄ０ ．２ ～２ ．０ ｍｇ·ｌ－ １ ＋ＩＡＡ０ ．２ ～２．０ ｍｇ·ｌ－ １ ＋ ＢＡ０ ．５ ～１．０ ｍｇ·ｌ－ １ ＋ 蔗糖３ ％ ＋ 琼脂０．６％ 。将诱导产生的愈伤组织按外部形态、细胞特点及生理生化指标等分为三类,其中表面干燥致密、细胞内含物丰富、淀粉、蛋白质及干物质含量均较高的Ⅲ类愈伤组织的芽再生频率最高,可达８３ ．３３ ％ ,是能利用的愈伤组织类型。     

影响油桃叶片产生胚性愈伤组织的因素

以早熟油桃华光和曙光为试材,对影响早熟油桃叶片产生胚性愈伤的基本培养基、外源激素、碳源、环境(光照强度,温度,暗培养时间)等因素进行研究,结果表明:碳源对两种油桃叶片胚性愈伤的诱导影响不显著,其他影响因子对油桃叶片胚性愈伤的诱导均显著。其中华光和曙光在暗培养21d时,产生的有效愈伤较其他处理有极显著差异,有利于有效愈伤的产生;外源激素对诱导桃叶片产生胚性愈伤组织影响显著,NAA不是影响胚性愈伤产生的主效因子;基本培养基中,QL,1/2MS培养基有利于华光胚性愈伤的发育,QL,LP培养基有利于曙光胚性愈伤的发育;当温度在24￣27.5℃时,光照强度为2000lx,有利于胚性愈伤组织的诱导及生长;接种方式上,叶背横切,叶面贴于培养基表面的接种方法易产生胚性愈伤。实验中发现:叶背横切,叶面接于G+2.5mg/LBA+0.5mg/LIBA培养基上,暗培养21d,转入1/2MS+2.0mg/lTDZ+2.0mg/LBA+0.5mg/LNAA的培养基中,温度控制在24￣27.5℃,光照强度为2000lx时,愈伤组织发育良好,获得高频胚性愈伤,进一步分化产生8%的不定芽。     

High frequency shoot regeneration from cotyledon explants of cucumber via organogenesis

Organogenic callus induction and high frequency shoot regeneration were achieved from cotyledon explants of cucumber. About 86.2% of cotyledon explants derived from 5-day-old in vitro raised seedlings produced green, compact nodular organogenic callus in MS medium containing NAA (2.69 μM) and BA (4.44 μM) after two successive transfers at 20 days interval. Adventitious shoots were produced from the organogenic callus when it was transferred to MS medium supplemented with NAA (1.34 μM), BA (8.88 μM), zeatin (0.91 μM) and l-glutamine (136.85 μM) with shoot induction frequency of 75.6%. Shoot proliferation occurred when callus with emerging shoots was transferred in the same medium at an interval of 20 days. Shoots (1.0 cm length) were excised from callus and were elongated in MS medium fortified with GA₃ (1.44 μM) and BA (4.44 μM). The elongated shoots were rooted in MS medium supplemented with IBA (3.42 μM) and BA (4.44 μM). Rooted plants were acclimatized in green-house and subsequently established in soil with a survival rate of 80%. This protocol yielded an average of 35 shoots per cotyledon explant in a culture duration of 120–140 days.     

从菠萝薄细胞层切片直接诱导体细胞胚

 以菠萝(Ananas comosus L. Merrill) 杂交种MD1 无菌苗为材料, 通过培养薄细胞层切片 (Thin cell layer, TCL) 的方法, 研究直接再生胚的固体培养体系。结果证明, 预培养的设计2 (在预培养基PT上黑暗预培养无菌苗1周后, 从预培养苗茎顶端切取TCL, 在MS + 2, 4-D 2 mg·L ^{- 1}或1 mg·L ^{- 1}胚诱导培养基EI2上黑暗培养1周, 然后转到光照条件下继续诱导胚1周, 再在成熟胚培养基EM上培养2周, 最后转入幼苗培养基PL上培养) 是直接诱导获得体胚的最佳途径; 诱导的体胚最初均来自于薄细胞层上微管束附近的细胞; picloram有利于芽的诱导, 2, 4-D有利于直接再生胚, 但如果球形胚形成后一直培养在较高浓度的2, 4-D培养基中, 将阻碍球形胚和心形胚进一步发育为成熟胚, 反而促进芽的生成。     

中国李Nubiana胚性愈伤组织诱导及植株再生

以中国李Nubiana试管苗幼嫩叶片为外植体,探讨激素浓度配比、暗培养时间、琼脂浓度等对胚性愈伤组织诱导及TDZ浓度对胚性愈伤组织不定芽再生的影响,建立其愈伤组织诱导及不定芽再生体系。结果表明,外源激素对中国李Nubiana胚性愈伤组织诱导影响显著,TDZ不适合胚性愈伤组织的诱导;暗培养28 d,产生的愈伤组织质地较好,诱导愈伤组织的效果最佳。胚性愈伤组织在WPM+NAA 0.5 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1+TDZ 2.0 mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂6.0 g·L-1培养基上光培养可再生出不定芽,其再生率为6.7%。