哺乳动物胚胎玻璃化冷冻方法

哺乳动物胚胎冷冻技术自建立以来,已进行了一些重大改进。其主要进展有: 1.缩短冷冻时间:提高慢速(0.3℃/分钟)降温操作的中止温度,至到较高的零下温度(-30～-40℃)或者快速降温,降到一定低温便保持此温度一段时间(两步冷冻法)。这样做虽然时间缩短了,但胚胎仍含有水分,这些水分在胚胎投入液氮的急剧降温过程中,便形成小冰晶或者不太稳定的玻璃态。因此,需快速解冻,以防止升温过程中形成有损于胚胎的冰晶。 2.缩短解冻后脱除低温保护剂时间:用非渗透剂(蔗糖)一步稀释,以避免保护剂脱出后胚胎发生渗透性膨胀。 3.玻璃化冷冻法(Vitrification):这是前不久研究出的一种新冷冻方法。其设计根据是,保护剂的稀释液在急剧降温到很低温度时,能被浓缩,而不会形成冰晶。作者已试验成功用两种浓度的低温保护剂,作为胚胎内液(10％甘油和20％丙二醇混合液)和外液(25％甘油和25％丙二醇混合液),且均能达到玻璃化。用此法冷冻的小鼠和牛的晚期桑葚胚已移植成功并产仔。     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻研究进展

近40年来,利用冷冻保存技术将哺乳动物胚胎长期保存起来,建立"胚胎库"是保护物种资源和拯救濒危动物的有效手段,同时也是加快家畜品种改良、建立动物基因库和实施胚胎移植产业化的重要组成部分,也可以为克隆、转基因等现代生物技术提供丰富的试验材料,使胚胎的供给不受时间和空间的限制。胚胎冷冻保存技术在人类辅助生殖方面也具有广阔的应用前景。本文主要介绍了玻璃化冷冻过程中胚胎冷冻主体承载工具特点和应用,并展望未来哺乳动物胚胎冷冻发展的方向。     

简单而有效的哺乳动物胚胎玻璃化冷冻方法

简单而有效的哺乳动物胚胎玻璃化冷冻方法王海彦朱士恩译１前言如果胚胎可以有效地进行冷冻保存，那么这项技术将可应用在多种哺乳动物如家畜、实验动物、野生动物以及人。然而，在胚胎冷冻和解冻过程中都存在好多会使胚胎受到损伤的因素。如：抗冻保护剂的毒性；冷冻损伤...     

哺乳动物胚胎冷冻方法研究进展

自上世纪70年代小鼠胚胎冷冻获得成功以来,许多学者在简化冷冻程序,缩短冷冻时间等方面进行了深入研究,试图寻找一种可用于生产的冷冻方法.文章对目前广泛采用的三种哺乳动物胚胎冷冻方法的研究进展及应用情况进行了综述,为今后开展哺乳动物胚胎冷冻工作提供参考.     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的研究进展

玻璃化(vitrification)是指利用物理学原理将高浓度的抗冻保护剂急速降温后，由液态转化为外形类似玻璃状的稳定而透明的非晶体化固体状态的过程。玻璃化的固体保留了液体正常的分子和离子分布，可以视为一种无序黏稠的超冷液体，因而避免了细胞内形成冰晶而对细胞产生伤害。1985年，Rall等率先将玻璃化冷冻方法用于小鼠胚胎的冷冻保存，推动了该方法在哺乳动物胚胎冷冻保存的方面的应用。之后，玻璃化冷冻保存不断改进，     

牛胚胎玻璃化冷冻技术研究进展

胚胎冷冻保存是保存和繁殖遗传优势动物的主要工具,是胚胎移植产业的重要组成部分。目前广泛使用的冷冻方法主要有慢速冷冻和玻璃化冷冻2种。由于玻璃化冷冻具有成本低、效率高、操作简单等优点,玻璃化冷冻法越来越受到人们的重视。经过多年研究,研究人员已经在玻璃化冷冻方法、冷冻液等方面取得了大量进展,玻璃化冷冻法已经开始进入商业化应用。本文综述了牛胚胎冷冻保存技术的研究进展,旨在为相关从业人员提供一定借鉴和参考。     

哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

哺乳动物胚胎的超低温保存技术不仅为动物种质资源的保存和良种家畜的国际交流提供了简单的手段，而且还是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等胚胎生物技术不可分割的组成部分。1972年，英国学者Whittingham等人首次利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功，此后许多学者对冷冻方法进行了广泛的研究。至今，牛、绵羊、山羊、马、兔子、猫、羚羊、狒狒、狨猴、猴和人等的胚胎冷冻保存也获成功。然而，在     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的研究进展

自1985年胚胎玻璃化冷冻(v itrification)保存技术发明以来,玻璃化法先后在小鼠、兔、绵羊、牛、猪、山羊等动物胚胎上获得成功,近年来有关哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的研究主要集中在冷冻和解冻方法上,相继发明了一些新的玻璃化冷冻方法:冷环玻璃化法(cryo loop)和开放式细管法(open pu lled straw,OPS),并且对解冻后细管内直接脱除防冻剂进行了广泛深入的研究,使得冷冻胚胎移植更易于在生产上推广应用。现将胚胎玻璃化冷冻的原理、冷冻保护剂、冷冻方法、解冻后保护剂脱除方法的最新研究进展作一综述。     

哺乳动物胚胎冷冻技术研究进展

胚胎冷冻保存已广泛用于胚胎移植，动物克隆以及动物资源保护。此技术的应用需保证胚胎在冷冻一解冻后具有较高的成活率。自1972年小鼠胚胎冷冻获得成功以来，许多学者在简化冷冻程序，缩短冷冻时间等方面进行了深入研究，试图寻找一种可用于生产的冷冻方法。本文全面地比较了不同的冷冻方法及其结果，籍此为该领域工作者提供一定帮助。     

胚胎玻璃化冷冻的实验研究

用小鼠胚胎分别在甘油、丙二醇、乙二醇不同浓度比例的10组玻璃化1液中平衡,每组均分室温和低温平衡,共20个组合。研究表明,提高甘油浓度、降低丙二醇及乙二醇浓度,可明显提高玻璃化冷冻后的胚胎体外培养发育率。低温平衡优于室温平衡。15%甘油 5%丙二醇 5%乙二醇的PBS液,是较为理想的第1冷冻液组合。室温平衡的培养发育率为37.5%（18/48）,低温平衡的培养发育率为71.4%（30/42）,差异极显著（P<0.01）;采用2步低温平衡,优选上述第1冷冻液,玻璃化冷冻200枚小鼠胚胎,解冻后培养至膨胀发育率为82.5%（165/200）。     

小鼠胚胎的玻璃化冷冻研究

用不同冷冻载体(玻璃管、塑料管和0.25 mL细管)及不同冷冻方法(程序化冷冻和玻璃化冷冻)对小鼠3.5 d~4 d桑椹胚和囊胚进行冷冻保存,并与不做任何冷冻保存处理直接培养进行对比。结果表明,使用玻璃管、塑料管和0.25 mL细管作为胚胎的承载材料进行玻璃化冷冻,效果差异不显著;采用程序化冷冻与OPS玻璃化冷冻法,对小鼠胚胎进行冷冻保存可以取得较好的结果。从而得出,用不同材质的冷冻载体进行玻璃化冷冻,可以获得与程序化冷冻相同的良好效果。     

哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

哺乳动物胚胎的超低温保存技术对于动物种质资源的保存和良种家畜的国际交流具有重要意义,是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等胚胎生物技术不可分割的组成部分。1972年,英国学者Whittingham等人首次利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功。此后许多学者对冷冻方法进行了广泛的研究。然而,在胚胎冷冻和解冻过程中都存在许多会使胚胎受到损伤的因素,如:抗冻保护剂的毒性,冷冻损伤,细胞内冰晶的形成,破裂损伤,渗透压引起的膨胀。因此,使用不同的冷冻和解冻法应避免或减少胚胎受到损伤,以提高胚胎解冻后的存活率。1抗冻保护剂和冷冻溶液在哺乳…     

Ops法玻璃化冷冻兔胚胎的实验

拉细开口型细管(Open Pulled Straw,OPS)法玻璃化冷冻是近年来国内外所采用的最快速的冷冻方法。此法具有成本低、易于操作、快速、所需设备简单等特点。有望成为在生产中值得推广的一种胚胎超低温冷冻保存方法。1材料与方法1.1试验动物本试验选择江苏省农科院种兔场的健康、体成熟的中国大白兔50只,其中公兔10只,母兔40只,体重为2~3kg/只,年龄为0.5~1岁作为试验兔。1.2超排方法与同期发情处理用FSH对25只母兔进行超排,肌注2次/d,间隔12h,连续3d,剂量递减,每只供体兔FSH总剂量为40I U,在最后一次注射FSH后12h,供体兔与15只受体兔同时…     

哺乳动物胚胎冷冻原理及研究进展

哺乳动物胚胎冷冻研究始于 5 0年代 ,先后在小鼠、大鼠、兔、马、牛、绵羊、山羊等动物胚胎上获得成功。目前该方面的研究进展很快 ,部分家畜的冷冻胚胎已逐步走向商品化应用。本文比较全面的综述了哺乳动物胚胎冷冻的原理、方法过程和冷冻胚胎的解冻及解冻后保护剂脱除。     

影响哺乳动物胚胎冷冻效果的因素分析

影响哺乳动物胚胎冷冻保存的因素很多。本文在总结近１０年来有关胚胎冷冻方面资料的基础上，就胚胎冷冻保护剂，冷冻方法、解冻方法，冷冻保护剂的稀释以及胚胎发育时期等对胚胎冷冻效果的影响进行了探讨。     

猪胚胎的OPS玻璃化冷冻

以广西巴马小型猪为供体,采用超数排卵技术,采集5~6日龄具有完整透明带的胚胎(囊胚/桑葚胚),采用二步法OPS(Open pulled straw)玻璃化冷冻技术进行保存,即胚胎首先在冷冻液1(TCM199 20?S 10%EG 10%DMSO)中平衡3 min,然后立即转入冷冻液2(TCM199 20?S 20%EG 20%DMSO 0.4 mol/LSUC)中并在1 min内装管(每管含2~6枚胚胎),直接投入液氮保存;3个月后解冻移植给8头受体母猪(每头移入25~26枚胚胎),其中1头怀孕产仔(8头活仔),获得猪胚胎超低温(-196℃)冷冻后代。     

哺乳动物胚胎冷冻技术的研究进展

胚胎冷冻保存已广泛用于胚胎移植、动物克隆以及动物资源保护.此技术的应用需保证胚胎在冷冻-解冻后具有较高的成活率.自从1972年小鼠胚胎冷冻保存获得成功以来,许多学者在简化冷冻程序,缩短冷冻时间,方面进行了深入的研究.本文就胚胎冷冻的原理、保护剂、冷冻方法以及解冻方法等方面进行了综述.     

哺乳动物胚胎冷冻技术的研究进展

胚胎冷冻保存已广泛用于胚胎移植、动物克隆以及动物资源保护。此技术的应用需保证胚胎在冷冻—解冻后具有较高的成活率。自从1972年小鼠胚胎冷冻保存获得成功以来,许多学者在简化冷冻程序、缩短冷冻时间等方面进行了深入的研究。文章就胚胎冷冻的原理、保护剂、冷冻方法以及解冻方法等方面进行了综述。     

动物胚胎玻璃化冷冻的试验

胚胎的玻璃化冷冻技术是胚胎生物工程技术在生产中进行生产化应用的技术关键,本研究通过对该方法的研究和探讨,试图取得该技术在牛胚胎生产中应用的技术关键,为牛胚胎的玻璃化冷冻提供科学依据和技术支持。我们利用小白鼠和牛超排胚胎开展了本项试验,并在小白鼠和牛胚胎的玻璃化冷冻和解冻方面,选出了一组比较理想的玻璃化冷冻剂、解冻剂和操作程序,在实验中获得了良好的冷冻和解冻效果。