绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养的研究

研究了绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养,并就影响体外成熟的因素进行了探讨。试验表明:添加10%和15%的胎牛血清(FCS)绵羊卵巢卵母细胞的体外成熟率(81.25%和83.75%)明显高于不添加FCS的对照组的卵母细胞成熟率(65.00%);在基础培养基中10%的FCS存在的条件下,添加一定质量分数的促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)时,卵母细胞的体外成熟率明显高于不添加FSH和LH的对照组的绵羊卵母细胞的体外成熟率;培养24 h和26h卵母细胞体外成熟率(75.00%和80.00%)明显高于培养20 h的卵母细胞体外成熟率(63.30%);从3~6 mm卵泡中抽取的卵母细胞体外成熟率(81.50%)明显高于从1~3 mm卵泡中抽取的卵母细胞的体外成熟率(53.30%)。     

虹鳟卵巢发育的组织学研究

采用石蜡切片技术,对虹鳟的卵巢发育进行组织学观察,研究各期卵巢的形态、特征及变化.结果表明:虹鳟卵巢的发育可分为6个时期,相对应的卵母细胞也分为6个时相;4月龄卵巢处于第Ⅰ期,以第Ⅰ时相卵母细胞为主,细胞核占细胞大部分;8～13月龄卵巢处于第Ⅱ期,第Ⅱ时相卵母细胞质嗜碱性,滤泡细胞、外周环和丝状环出现;15～26月龄卵...     

条石鲷卵巢发育的组织学研究

采用常规的生物学调查和石蜡组织切片法,对条石鲷Oplegnathus fasciatus卵巢发育周期和卵巢发育中各个时期卵母细胞的形态特征以及产卵类型等进行了组织学研究。结果表明,条石鲷卵母细胞的发育过程在年周期中可分为6个时相：Ⅰ时相的卵母细胞呈原始分化状态,Ⅱ时相卵母细胞出现明显的卵黄核,Ⅲ时相卵母细胞出现皮质液泡,Ⅳ时相的卵母细胞分化明显,卵黄颗粒部分融合,Ⅴ时相和Ⅵ时相分别为卵子形成和退化吸收时相。卵巢发育可分为6个时期：繁殖期主要在5—7月,其卵巢有Ⅳ期、V期;8月卵巢开始退化,9月进入重新发育的Ⅱ期,直到翌年3月都为越冬Ⅱ期卵巢;3月下旬条石鲷卵巢开始重新发育为Ⅲ期卵巢。条石鲷卵巢的平均成熟系数为0.70%~12.57%。组织学观察结果表明,各时相卵母细胞发育不同步,因此条石鲷属多次产卵。     

条石鲷卵巢发育的组织学研究

采用常规的生物学调查和石蜡组织切片法,对条石鲷Oplegnathus fasciatus卵巢发育周期和卵巢发育中各个时期卵母细胞的形态特征以及产卵类型等进行了组织学研究。结果表明,条石鲷卵母细胞的发育过程在年周期中可分为6个时相:Ⅰ时相的卵母细胞呈原始分化状态,Ⅱ时相卵母细胞出现明显的卵黄核,Ⅲ时相卵母细胞出现皮质液泡,Ⅳ时相的卵母细胞分化明显,卵黄颗粒部分融合,Ⅴ时相和Ⅵ时相分别为卵子形成和退化吸收时相。卵巢发育可分为6个时期:繁殖期主要在5—7月,其卵巢有Ⅳ期、V期;8月卵巢开始退化,9月进入重新发育的Ⅱ期,直到翌年3月都为越冬Ⅱ期卵巢;3月下旬条石鲷卵巢开始重新发育为Ⅲ期卵巢。条石鲷卵巢的平均成熟系数为0.70%¹2.57%。组织学观察结果表明,各时相卵母细胞发育不同步,因此条石鲷属多次产卵。     

家兔原始卵泡卵母细胞体外发育的培养体系研究

本研究根据家兔卵巢的发育特征初步探讨了家兔卵巢卵母细胞体外发育的培养体系。采集新生或30日龄家兔卵巢在不同培养液中培养,并分析家兔卵母细胞的体外发生与成熟情况与体内正常发育的兔卵巢卵母细胞之间的差异,来筛选和优化家兔卵巢卵母细胞的体外培养体系。本试验从高糖DMEM、FSH浓度、BSA/血清等3个方面来筛选较好的培养条件,结果表明:①不添加高糖DMEM的M199培养液与添加的相比,卵巢上卵母细胞数量要多,但随着培养时间的延长,组织块上卵母细胞的形态会变得不清楚;②家兔卵巢组织在FSH浓度为50和100m IU/m l、添加血清的DMEM/F12培养液中生长较好,体外培养24d后,卵母细胞数量多,直径增加到65μm;③与添加BSA的培养液相比,添加血清的培养液中的卵巢卵母细胞生长状态较好,体外培养28d后,卵母细胞数量多,并且直径可达65μm。     

表皮生长因子受体在绵羊卵巢中的表达

收集成年绵羊卵巢标本,采用免疫组织化学的方法检测EGFR蛋白在绵羊卵巢组织中的表达情况。研究结果表明,在绵羊卵巢中EGFR蛋白的表达具有时空特异性,它集中分布在发育各阶段的卵泡颗粒细胞中,并随卵泡的发育程度表现出表这量的差异。本研究说明EGFR与其配体EGF结合具有刺激颗粒细胞增殖分化、促进卵丘扩展和刺激卵母细胞成熟的功能。     

绵羊体外受精的TCM199渐变培养体系的研究

应用TCM199作卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎培养的基础培养液,再添加不同组分组成TCM199体外受精渐变培养体系,进行绵羊体外受精的研究.结果表明:TCM199体外受精渐变培养体系(试验组)与目前沿用的常规体外受精体系(对照组)相比较,虽然成熟率差异不显著(81.3%,80.4%),但能显著提高绵羊卵母细胞体外受精后的卵裂率(72.1%,50.8%)和桑囊率(94.8%,24.5%).这说明TCM199体外受精渐变培养体系能有效地克服早期胚胎发育阻断.     

卵巢因子对小鼠卵母细胞发育的影响

卵巢因子对卵母细胞发育的影响已成为发育生物学研究的主要内容,卵巢产生的大量生长因子通过自分泌/旁分泌方式对生发泡破裂(Germinal Vesicle Breakdown,GVBD)、第一极体释放、胚胎发生及早期胚胎发育发挥调控作用.对卵巢因子调控作用的深入研究有助于进一步了解卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的细胞通讯系统网,寻找治疗不孕不育的新途径和新方法,为体外成熟、体外受精及胚胎干细胞分化制定更加优化的培养环境.概述了目前卵巢因子在小鼠卵母细胞发育调控中的研究进展.     

Study on features of female fetal reproductive system development in Chinese northeast fine-wool sheep

Some charaterasics of female fetal reproductive system were studied in different gestation phases of Chinese northeast fine-wool sheep.The results showed that reproductive system consisted of ovary,oviduct,uterus and genitalia.The fetal ovaries were granular in early phase and became elliptic in later phase.The functional formula of ovarian weight,length and volume was obtained. Primary oocyte was encapsulated by monolayer cells in 7-week fetal ovary cortex.Primordial follicles were formed in 8-week fetal ovary,the follicular cells were sporadically arranged and not always regular.Complete organization of primordial follicles appeared until 10-week gestation,most of them scattered in nests in the following weeks of gestation.Two types of follicular complexes were found in fetal.There were continuous and quick mitosis of oogonia in fetal ovaries,large complexes were formed by oogoniaes encapsulated by multilayer of follicular cells,then they differentiated into small complexes,one or more primary oocytes were formed by mitosis of oogonia,primordial follicles which were caused by follicular cell approaching into them developed.     

培养条件对绵羊卵巢卵母细胞体外成熟及受精的影响

对绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养及体外受精培养条件进行筛选,结果表明:在基础培养基中添加FCS可以显著提高卵母细胞的体外成熟率,而添加10%、15%和20%FCS的组间,卵母细胞的成熟率差异不明显,表明在基础培养液中添加10%FCS即可使绵羊卵母细胞的体外成熟率达到一个比较高的水平;体外培养时间不同对绵羊卵母细胞的成熟有较大的影响,培养24 h和26 h的卵母细胞成熟率(分别为73.3%和77.5%)显著高于培养18 h和20 h的卵母细胞成熟率(分别为62.5%和65.0%);对活力较低的绵羊精子而言,采用直接上浮法要比离心洗涤法更有利于选取活力较高的精子,并可提高受精卵的卵裂率.     

版纳微型猪近交系胎儿成纤维细胞系的建立及其生物学特征

以版纳微型猪近交系妊娠47d的胎儿为材料,采用胰蛋白酶消化法消化培养胎儿成纤维细胞,对其进行细胞形态观察、细胞冻存前和复苏后存活率测定、生长曲线绘制和染色体核型分析等生物学特征检测.结果表明,培养的版纳微型猪近交系胎儿成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态;细胞冻存前和复苏后的存活率分别为98.06%和92.12%;生长曲线呈S形,倍增时间为36h;对所制备染色体核型进行分析,显示2n=38,XY,并在体外培养14个代次后仍能保持正常核型.     

昆明白小鼠卵母细胞去核研究

为了提高昆明白小鼠MⅡ期卵母细胞的去核效率及质量,该研究在不同条件下,比较了小鼠卵母细胞的去核效果:将小鼠MⅡ期卵母细胞放入含蔗糖浓度分别为0.01、0.02、0.03 g/mL的M2-液微滴中,在体式显微镜下观察显核效果以确定最佳浓度;将有清晰可见细胞核的卵母细胞放入含细胞松弛素B(Cytocha-lasin-B,CB)浓度分别为5、7.5、10μg/mL操作液中去核,显微镜下确定去核率。结果表明:操作液中加入蔗糖浓度为0.02g/mL时显核效果最好;去核时操作液中细胞松弛素B浓度为10μg/mL时去核死亡率最低。     

酵母β-1,3-D-葡聚糖制备过程中细胞破碎方法研究

通过正交试验设计,研究了细胞自溶法和超声波法的工艺条件,结果表明:在T=50℃、pH=7.0、浓度=10%、t=15 h的自溶条件下和在功率240W、占空比0.8、浓度5%、t=20 m in的超声波条件下,细胞破碎程度(即Y,用单位细胞干物质的损失率表示)分别为44.03%、35.87%,达到各自工艺的最优值,并且自溶法具有较好的细胞破碎效果。