冬瓜组培再生体系的初步建立

以冬瓜子叶节为试材，探讨培养条件、不同基因型及诱导、伸长和生根培养基不同激素类型与配比情况，初步建立了冬瓜组培再生体系。结果表明：种子剥皮消毒后，在纸桥培养基暗培养发芽率较高，且节约成本；以暗培养5 d、见光培养1 d刚转为淡绿色的闭合子叶，其不定芽诱导率最高，约75％；以13个不同基因型冬瓜子叶节为外植体，接种至不同激素浓度组合的培养基上，筛选出分化率较高的品种B214，其不定芽再生率可达到79.2％，诱导分化培养基为MS+4.0 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA，伸长培养基为MS+1.0     

玉米组织培养及植株再生研究进展

玉米组织培养及再生,目的是让外植体能够高频率地诱导出愈伤组织,建立高效的体细胞再生体系,为玉米遗传转化和细胞工程研究创造有利条件。主要综述了玉米组织培养研究进展,并就玉米组织培养存在的问题提出了解决方法。     

甘蔗近缘属斑茅组织培养高频再生体系的建立

以甘蔗近缘属植物斑茅的幼嫩叶片为材料,研究MS、SH、B5三种基本培养基和不同激素(2,4-D、NAA、6-BA)配比对斑茅愈伤组织诱导及继代培养的影响,并筛选出斑茅细胞高频再生体系的最优培养基配方。研究结果表明,斑茅幼嫩叶片愈伤组织诱导培养基以MS+2,4-D 3.0 mg/L+6-BA 0.4 mg/L为最适,愈伤组织继代培养基以MS+2,4-D 3.0 mg/L为最适。在此条件下诱导的愈伤组织质地疏松,具有较强的分化能力。目的是建立斑茅组织培养的高频再生体系,为斑茅材料的细胞悬浮培养、染色体加倍和细胞融合等研究提供一定参考。     

玉米自交系成熟胚再生体系的优化

以优良玉米自交系昌7-2、齐319、郑58为试验材料,针对培养基类型、温度处理、激素配比等因素,优化玉米成熟胚再生体系。结果表明:玉米种子置于4℃预处理36 h,再置于34℃水浴中预处理36 h后愈伤诱导率有一定的提高。最适愈伤诱导培养基为NB+4 mg/L2,4-D+10 mg/LAgNO3,继代培养基为NB+2 mg/L 2,4-D+0.2mg/L 6-BA+10 mg/L AgNO3,分化培养基为NB+0.5 mg/L 6-BA。     

农杆菌侵染玉米芽尖转化BcWRKY1转录因子基因的初报

以玉米自交系鲁9801、K10芽尖为受体,采用农杆菌介导法转化BcWRKY1转录因子基因,同时优化了遗传转化体系。结果表明,乙酰丁香酮浓度为100μmol/L、0.05个大气压下真空处理侵染10 min转化率最高。实验共筛选出98株除草剂抗性植株,其中23株PCR呈阳性,18株结实。     

玉米自交系郑58和丹340幼胚再生体系的建立

研究选取9个优良玉米品种的自交系,以幼胚为外植体,以N6、MS培养基为基本培养基,诱导愈伤组织,探讨基因型、培养基类型、外植体大小、激素浓度等因素对愈伤组织诱导率的影响,分析不同基因型愈伤组织生长状态的差异,对诱导成功的愈伤组织进行分化和再生。研究结果表明,基因型对愈伤组织诱导率起决定作用,且基因型和培养基之间存在相互作用;外植体大小在1.5～2.0 mm时的幼胚较适合诱导胚性愈伤组织;2,4-D对玉米幼胚愈伤组织的诱导形成起关键作用,浓度在2.0～2.5 mg/L时大多能诱导出胚性愈伤组织。     

魔芋高效再生体系的建立与优化

研究不同激素及浓度配比对魔芋愈伤组织、不定芽和根诱导的影响。结果表明,诱导愈伤组织的最佳激素组合为ＭＳ＋６－ＢＡ０.5 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ,其诱导率为８２％;诱导不定芽分化的最佳配方为ＭＳ＋６－ＢＡ １．５ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ,其分化率为４９０％;诱导生根的最佳激素组合配方为ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ,其生根率为９０％。     

东北春玉米骨干自交系组织培养再生系统研究

东北玉米骨干自交系在诱导愈伤组织和植株再生中,基因型差异非常显著。自交系7922最高愈伤诱导率达89.1%,芽苗率为66.4%;而最低的921诱导率仅有18.9%,芽苗率为0。再生途径主要有两种:7922主要以体胚发生途径为主,4122、8902主要以器官发生途径为主。2熏4-D是体胚诱导不可缺少的植物生长激素,适当的细胞分裂素能促进诱导4112、8902不定芽的产生。而且,再生途径并不是一成不变的,在一定条件下可以相互转变。     

工业大麻高效再生体系的初步研究

选用工业大麻新品种龙麻一号的下胚轴作为外植体进行组织培养,对无菌苗的获得、植物生长调节剂的选择及浓度等影响工业大麻组织培养的关键因素进行研究,愈伤组织诱导的最适植物生长调节剂组合为1.0mg/L 6-BA和0.5mg/L NAA,不定芽分化的最适激素组合为1.0mg/L KT和0.5mg/L NAA,以1/2MS+0.05mg/L IBA+0.05mg/L NAA激素组合生根效果较好。初步建立工业大麻高效再生体系,愈伤组织诱导率达到91.67%,不定芽分化率达到76.67%,生根率达到75%。     

番茄突变体jai1-1高效筛选—再生体系的建立

利用番茄野生型JAI1和通过不同浓度茉莉酸甲酯（MeJA）处理筛选得到的突变体jai1-1的子叶和下胚轴为材料进行离体组织培养,以探究不同激素组合对愈伤组织的诱导、不定芽分化及生根的影响,最后利用PCR反应验证筛选得到的材料的准确性。结果表明,1/2 MS＋50μM/L MeJA是突变体jai1-1筛选的有效培养基。野生型JAI1和突变体jai1-1在MS＋6-BA 2.0 mg/L＋IAA 0.2 mg/L诱导愈伤组织的效果最好;JAI1在MS＋ZT 1.0mg/L＋IAA 0.1mg/L诱导分化不定芽的效率最高,而jai1-1则以MS＋ZT 2.0 mg/L＋IAA 0.2 mg/L为佳;1/2 MS＋NAA 0.1 mg/L是两者诱导生根的理想培养基。     

三倍体枇杷茎尖培养与植株再生

以三倍体枇杷茎尖为外植体,研究了取材时间及茎尖大小、植物生长调节剂对三倍体枇杷茎尖培养与植株再生过程中萌发、伸长、生根及移栽的影响。结果表明:春季取材且茎尖大小为0.7 cm时,茎尖成活率最高,为77.5%;初代培养适宜培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+IBA 1.5 mg/L,在此培养基上,三倍体枇杷茎尖萌发率高达91%;茎尖伸长适宜培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L+GA30.3 mg/L,平均芽苗高度可达4.9 cm;芽苗增殖适宜培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+Tryptone 750 mg/L,增殖系数为7.7;生根适宜培养基为1/2MS+NAA 0.25 mg/L+IBA 2.0 mg/L,生根率为73.3%;三倍体枇杷组培苗移栽入腐熟有机肥∶园土∶锯末(1∶2∶1)的基质中成活率达到93.67%。     

适于子叶节和胚尖再生体系的大豆基因型筛选

以吉育91等6个基因型大豆的子叶节和胚尖为外植体,研究了大豆不同基因型在子叶节、胚尖2个再生体系中的不定芽诱导率、不定芽伸长率和不定芽数。结果表明:基因型对大豆不同再生体系的再生有显著影响,合丰35和合丰25在子叶节体系中的不定芽诱导率和伸长率均高于胚尖体系,而黑农37的不定芽诱导率和伸长率在胚尖体系高于子叶节体系。不同基因型适合的大豆再生体系不同,合丰35、合丰25和绥农14适合选用子叶节再生体系,黑农37更适合选用胚尖再生体系,而吉育91和北京小粒豆则既可以选择子叶节再生体系又可选择胚尖再生体系。     

不同处理方法对马铃薯茎尖成苗率的影响

试验以带马铃薯病毒的N88为材料,分别在40℃/25℃(4 h/20 h)的变温环境中,培养2、3、4周处理后茎尖剥离;以N88和D575试管苗为材料,在加入0,20,30 mg·L-1病毒唑的培养基中处理40 d后茎尖剥离。茎尖培养基为MS+0.05 mg·L-1 NAA+0.1 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 GA3+4 g·L-1琼脂粉+30 g·L-1白砂糖的改良固体培养基,30 d后开始调查成苗率,每隔10 d调查1次,直到60 d,统计茎尖成苗率。结果表明:2周变温处理的茎尖成苗率和对照接近,但脱毒率有所提高;4周变温处理剥离茎尖成苗率最低,60 d成苗率仅为15%,脱毒率为100%;病毒唑浓度对不同材料的茎尖成苗率影响不同,其中D575经过20 mg·L-1病毒唑处理,茎尖培养60 d后成苗率最高达到83.3%,PVS脱除率为40%;材料N88在加入20 mg·L-1和30 mg·L-1浓度病毒唑的培养基中培养40 d后茎尖剥离,60 d成苗率分别为40.0%和41.7%,PVY、PLRV的脱毒率为100%。     

玉米幼胚愈伤组织诱导及再生

利用综3、87-1、郑58、昌7-2、137和K12等6个骨干自交系玉米幼胚进行愈伤组织诱导并建立再生体系。结果显示,2,4-D对玉米幼胚愈伤组织的诱导形成是必需的,浓度在2.0～2.5 mg/L;6-BA不利于愈伤组织的形成,但能促进幼胚直接长芽、长根,尤其以郑58最明显。材料综3、郑58、K12诱导愈伤组织比较容易,诱导率均≥85%;材料137和87-1表现中等,诱导率约在50%～60%;材料昌7-2表现最差,愈伤组织诱导率≤25%。     

大麦茎尖愈伤组织的诱导和植株高频再生

为明确大麦茎尖高频再生培养体系的影响因素,以大麦品种甘啤3号、甘啤4号和甘啤6号为材料,研究颖壳去除方法、灭菌处理方式、无菌苗的苗龄、茎尖切段的大小和位置以及外源激素(2,4-D)浓度对大麦茎尖愈伤组织培养和植株高频再生的影响。结果表明,大麦种子颖壳去除的最佳方法是将种子浸泡在30%的硫酸中,并置于水平摇床30℃、180r·min~(-1)摇动1h;同时发现参试品种中甘啤4号发芽率最高;75%的乙醇1.5min+2%的NaClO 15min的灭菌处理效果最好,其带菌率和发芽率与其他处理有显著差异,并且对种子伤害较小,幼苗整齐度较好,有利于无菌苗的培养;茎尖外植体愈伤组织的形成和植株再生频率与茎尖切段的位置和苗龄密切相关,3d苗龄、茎尖基部2mm处的切段效果最好;3mg·L~(-1) 2,4-D适宜愈伤组织的离体培养,在出愈率和植株再生率上差异显著,可以诱导出大量愈伤组织。     

离体玉米茎尖直接产生雌、雄花序过程中内源激素的研究

Using ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay) methods,three-type phytohormone in cultured shoot apices of maize were determined.It showed that the contents of three kinds of endogenous cytokinins changed unbalanced,which including ZRs,DHZRs and iPAs,cytokinins kept in high contents totally compared to the contents of IAA and GA_1/3.The concentration of IAA decreased with the in-vitro culture time was postponed,specially at the time of the 35-40 days when the ears or tassels emerged from the in vitro cultured shoot apices.The contents of GA_1/3 increased steadily in all 40 days of the in-vitro culture progress,but the concentration of ABA kept in a very low level in all the in-vitro culture progress.These results exhibited that both GA_1/3 and three kinds of cytokinins played an important and positive role when the maize shoot apices changed from the vegetative developmental stage to the reproductive one.     

玉米茎节再生体系建立及AGPL基因遗传转化的研究

以玉米优良自交系郑58的子粒为材料,切取无菌苗的第1个茎节,上下各保留0.5 cm,接种于诱导培养基(1/2MS+0.3 mg/L NAA)培养,直接获得再生苗。腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)是玉米淀粉合成过程中的一个限速酶,AGPase酶大亚基(AGPL)是酶的调节中心,在玉米胞质中过表达能够提高玉米淀粉含量。利用农杆菌介导法将玉米AGPL基因导入郑58的茎节体系,转化后的茎节在含有3mg/L双丙氨膦的1/2 MS培养基上进行筛选培养,对筛选后的抗性苗进行PCR和PCR-Southern blot检测,获得了4株转基因植株。