咖啡因对UV诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用及机制

[目的]研究咖啡因对UV诱导的HaCaT细胞氧化损伤的影响及其作用机制.[方法]用UV诱导HaCaT构建氧化损伤模型.将HaCaT设置对照组、UV损伤组、不同浓度(50、100 μg·mL-1)咖啡因组.结晶紫染色检测细胞生长;特定活性氧指示剂测定胞内及线粒体内活性氧含量;Western blot检测p-p38、p-E...     

扇贝多肽对H2O2损伤HaCaT细胞的保护作用

[目的]建立H2O2诱导HaCaT细胞氧化应激损伤的体外模型,探讨扇贝多肽(PCF)对H2O2损伤HaCaT细胞的保护作用及其作用机制。[方法]采用不同浓度的H2O2(50、100、200、300、500μmol/L)作用HaCaT细胞12 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率;用不同浓度(1.42、2.84、5.68 mmol/L)的PCF分别处理细胞12 h后,加入H2O2(300μmol/L)继续作用12 h,采用CCK-8法检测细胞活力,采用酶生化法法测定细胞上清液中LDH活性以及细胞质中GSH-Px、T-AOC和CAT水平。[结果]与正常组相比,50~500μmol/L浓度的H2O2依赖性地引起HaCaT细胞氧化损伤,300μmol/L的H2O2使存活率降低到56%(P0.01);与模型组相比,不同浓度的PCF均可保护H2O2诱导的氧化损伤,增加细胞存活率,降低细胞LDH的释放量,提高GSH-Px、T-AOC和CAT含量,增强细胞抗氧化作用。[结论]扇贝多肽能对抗H2O2诱导的氧化应激,对细胞受损具有保护作用,其机制可能与提高抗氧化酶活力有关。     

柚皮素-镉配合物的合成·表征及其抗氧化作用

[目的]合成柚皮素金属镉配合物,并比较配合物与柚皮素的抗氧化活性。[方法]以柚皮素和乙酸镉为原料在无水乙醇溶液中制备柚皮素-镉配合物,通过紫外(UV)、红外(IR)对配合物进行表征,并采用ABTS法研究其清除自由基的能力。[结果]紫外、红外数据证实柚皮素与镉离子成功配合,且在试验浓度下,配合物对ABTS+·的清除能力随浓度增加而增强,且强于柚皮素。[结论]镉离子成功地与柚皮素形成配合物,其体外抗氧化活性较配体有所增强。     

LPS诱导奶牛子宫内膜上皮细胞氧化损伤模型的建立

[目的]采用脂多糖(LPS)作为刺激源,建立奶牛子宫内膜上皮细胞(BEEC)氧化损伤模型.[方法]体外培养BEEC并进行细胞鉴定,用不同浓度的LPS刺激细胞,在不同时间点用CCK-8法测定细胞存活率,以确定BEEC氧化损伤模型条件.倒置显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)含量,比色法检测细胞中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT).[结果]与空白对照组相比,当LPS浓度为80μg/mL,作用时间为12 h时,造成细胞损伤,其细胞凋亡率、ROS产生量和MDA含量明显高于对照组,SOD和CAT活性显著低于对照组.[结论]建立奶牛子宫内膜上皮细胞氧化损伤模型的条件为LPS作用浓度80 μg/mL,作用时间12 h.     

红树莓对UVB诱导HaCaT光损伤的抑制作用

为研究红树莓对中波紫外线(UVB)诱导的人表皮角质形成细胞(HaCaT)光损伤的抑制作用,用20、40、80mg/mL3个不同剂量的红树莓果汁预处理人永生化表皮角质形成细胞(HaCaT细胞)6h,再采用60mJ/cm2强度UVB照射细胞;用MTT法检测细胞的生存率,采用比色法检测细胞中丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性,用荧光法检测细胞内活性氧自由基(ROS)的含量,用倒置显微镜和流式细胞仪观察、检测细胞的凋亡状况。结果表明:UVB辐射对HaCaT细胞造成比较严重的损伤;相比于空白对照组,UVB辐射模型组HaCaT细胞活性下降了29.54%,SOD和GSH–Px活性极显著降低(P0.01);相比于模型组,红树莓各剂量组可显著提高UVB照射后HaCaT细胞的活性(P0.05或P0.01),提高SOD和GSH–Px活性(P0.01),减少MDA和ROS含量(P0.05或P0.01),降低LDH活性和增加Hyp含量(P0.01),呈剂量依赖关系,减轻UVB所导致的细胞损伤,凋亡率降低。红树莓可以明显减少UVB诱导HaCaT细胞的氧化损伤和凋亡,具有显著的光保护功效,其作用机理与增强细胞抗氧化能力、加速清除氧自由基以及促进胶原蛋白合成有关。     

蓝藻抗病毒蛋白N衍生物的细胞毒性及抗病毒活性检测

[目的]研究蓝藻抗病毒蛋白N(CVN)衍生物(LCVN)对永生化上皮角质形成细胞(HaCaT)的毒性及LCVN凝胶的制备和体外活性检测。[方法]用MTT法测定LCVN对HaCaT细胞株的半数毒性浓度(CC50)以及LCVN对流感病毒毒株A/HK/8/68(H3N2)的半数抑制浓度(IC50);用流式细胞检测法检测LCVN对HaCaT细胞周期与细胞凋亡的影响;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测LCVN凝胶与HIV包膜蛋白GP120的相互作用。[结果]培养24和48 h后,LCVN对HaCaT的CC50分别为(9.25±1.21)与(1.94±0.12)μmol/L,将LCVN做成凝胶后,与HIV外膜蛋白GP120的结合在一定浓度范围内具有剂量关系,LCVN凝胶对A/HK/8/68(H3N2)毒株的IC50为(98.20±0.03)nmol/L。[结论]LCVN对HaCaT细胞的毒性明显小于CVN,当做成凝胶以后LCVN对流感病毒A/HK/8/68(H3N2)具明显抑制作用,并能与HIV包膜蛋白GP120相互作用。     

安石榴苷对热应激后IEC-6细胞HSPs表达及凋亡影响

[目的]本试验旨在研究安石榴苷对热应激大鼠肠上皮细胞(IEC-6)损伤的预防作用.[方法]通过MTT法检测细胞活力,倒置显微镜观察细胞形态学变化;RT-PCR检测HSP27、HSP70、HSP90的mRNA变化;AO/EB检测细胞凋亡.[结果]筛选热应激最佳时间为42℃6h,安石榴苷预处理细胞低中高浓度分别为2.5、5、10 μmol/L;药物预处理细胞后细胞损伤及凋亡程度减轻,能够显著抑制HSP27、HSP70、HSP90的高表达.[结论]安石榴苷对IEC-6细胞热应激损伤具有显著预防作用,HSP27、HSP70、HSP90参与安石榴苷对IEC-6细胞热损伤预防作用的调控.     

重楼皂苷Ⅰ对紫外损伤的人永生化角质形成细胞(HaCaT)的保护作用研究

【目的】研究重楼皂苷Ⅰ(polyphyllinⅠ，PPⅠ)对急性中波紫外线(medium wave ultraviolet rays,UVB)损伤的人永生化角质形成细胞(HaCaT)的保护作用及分子机制，为滇重楼在日化用品中的应用提供理论依据。【方法】采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度PPⅠ处理HaCaT的存活率，筛选出无毒性PPⅠ浓度；将HaCaT细胞随机分为4组：空白对照组、UVB处理组(21.6 mJ/cm2)、0.250μmol/L PPⅠ+UVB处理组和0.500μmol/L PPⅠ+UVB处理组，采用结晶紫染色法探究2种浓度PPⅠ对UVB处理后HaCaT细胞增殖的影响；采用蛋白质免疫印迹法检测HaCaT细胞凋亡蛋白多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP1)、cleaved-PARP1、乙酰基-赖氨酸、K68位点的线粒体超氧化物歧化酶重组蛋白(mitochondrial recombinant superoxide dismutase 2,K68-SOD2)和沉默调节3蛋白(sirtuin3,SIRT3)的表达。【结果】与空白对...     

水解驴胎盘提取物对UV诱导皮肤细胞损伤的保护作用

[目的]探究水解驴胎盘提取物防护光损伤的效果与作用机制，旨在填补水解驴胎盘提取物在防护UV光损伤方面的研究空白，实现驴胎盘的高值化利用。[方法]采用CCK-8方法探究水解驴胎盘提取物对HS68和HaCaT细胞增殖率的影响，利用UVA和UVB分别诱导HS68和HaCaT细胞建立体外光损伤模型，研究水解驴胎盘提取物对UV损伤HS68和HaCaT细胞的保护作用。[结果]0.10%～10.00%(V/V)的水解驴胎盘提取物可显著促进HS68和HaCaT细胞生长；1.00%和0.50%(V/V)水解驴胎盘提取物可显著减弱UVB对HaCaT细胞的损伤，显著减少细胞内ROS的产生和MDA的分泌，显著增加细胞内SOD活性；1.00%(V/V)水解驴胎盘提取物可显著降低UVA辐射HS68细胞造成的MMP-1、MMP-3和MMP-9 mRNA表达上升，但不能改善COLⅠ和COLⅢmRNA表达的减少。[结论]水解驴胎盘提取物能够防护UVA和UVB造成的皮肤光损伤，可能与提高抗氧化酶活性、降低脂质过氧化程度、抑制金属蛋白酶的异常分泌有关。     

毛喉素诱导猪卵泡颗粒细胞体外分化机制的研究

[目的]本试验旨在研究毛喉素(FSK)对体外培养的猪卵泡颗粒细胞分化的作用及机制.[方法]体外分离培养猪原代卵泡颗粒细胞,预培养24 h.用10 nmol·L-1 FSK处理细胞48 h,检测细胞形态、脂滴积聚、标记基因和周期相关基因表达状况;处理96 h后检测孕酮(P4)水平及类固醇合成相关蛋白的表达水平.[结果]与...     

黄芪多糖对H_2O_2诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤及凋亡的影响

[目的]本试验旨在研究黄芪多糖(APS)对H_2O_2诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡、氧化损伤及相关基因、蛋白表达的影响。[方法]体外培养奶牛乳腺上皮细胞并用H_2O_2(600μmol·L~(-1),2 h)诱导建立乳腺上皮细胞氧化应激模型;试验分组:空白对照组、H_2O_2组、H_2O_2+APS组(8 mg·mL~(-1)APS)。[结果]与空白对照组相比,H_2O_2组细胞活力显著下降(P0.05);与H_2O_2组相比,H_2O_2+APS组的细胞凋亡率和细胞中的活性氧(ROS)含量均显著降低(P0.05),而超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P0.05),从而缓解H_2O_2诱导奶牛乳腺上皮的氧化损伤;此外,与H_2O_2组相比,H_2O_2+APS组凋亡基因Bax/Bcl-2 mRNA比值及Caspase-3 mRNA的表达量极显著降低(P0.01),Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),且APS降低了H_2O_2诱导细胞凋亡率。[结论]APS能够提高H_2O_2诱导的奶牛乳腺上皮细胞抗氧化酶活性,并减缓氧化损伤引起的奶牛乳腺上皮细胞凋亡。     

纳米二氧化硅对体外培养HaCaT细胞凋亡的影响

[目的]比较不同粒径(15、30、100 nm)纳米二氧化硅(nano-SiO2)和常规二氧化硅(Micro-SiO2)对人皮肤表皮细胞(HaCaT)生长的抑制作用及凋亡的影响。[方法]采用不同浓度(2.5、5、10μg/ml)不同粒径(15、30、100 nm)的nano-SiO2和10μg/ml的Micro-SiO2(1～5μm)染毒体外培养的HaCaT细胞24 h,同时设溶剂对照组(nano-SiO2和Micro-SiO2的分散液染毒组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测HaCaT细胞暴露于不同浓度、不同粒径的nano-SiO2后的细胞活力,用Annexinⅴ-PI双染法和Hoechest33342染色法测定细胞凋亡情况;使用2’,7’-二乙酰二氯荧光素荧光探针检测细胞内活性活性氧(ROS)水平。[结果]不同粒径的nano-SiO2纳米对HaCaT细胞的半数抑制浓度分别为(19.4±1.3)、(27.7±1.5)、(35.9±1.6)μg/ml。当染毒浓度固定时,随着nano-SiO2粒径的减小,凋亡率逐渐增加。当粒径固定时,胞内ROS的水平也随着nano-SiO2浓度的增大而增高。相关分析表明,细胞存活率和凋亡率与胞内活性氧的水平的相关性分别为-0.952和0.898(P<0.01)。[结论]nano-SiO2能抑制HaCaT细胞生长并可诱导其凋亡,这种现象的发生可能与胞内产生的活性氧水平有关。     

柚皮素磷脂复合物的制备及其理化性质的研究

采用溶剂挥发法制备柚皮素磷脂复合物,利用紫外光谱法、傅里叶变换红外光谱法、X射线衍射法对柚皮素磷脂复合物的结构进行表征,用差示扫描量热法对复合物的热特性进行分析,利用气相色谱法测定磷脂复合物的溶剂残留量,利用高效液相色谱法测定其在水、正辛醇、磷酸盐缓冲液(PBS)(pH值分别为2.5、5.0、6.5、7.0、7.8～8.0)中的平衡溶解度、油水分配系数以及体外溶出度。结果显示,在柚皮素质量浓度5g/L、柚皮素与磷脂质量比1∶1.5、反应时间2h、反应温度40℃的条件下,柚皮素磷脂复合物载药量为31.79%±0.99%。柚皮素磷脂复合物中二氯甲烷残留量为0.016 3%±0.002 5%,乙酸乙酯残留量为0.040 8%±0.001 9%,均符合药典标准。柚皮素磷脂复合物可显著提高柚皮素在水、正辛醇及不同pH下PBS中的平衡溶解度,其油水分配系数对数值(logP)为1.11±0.09。体外溶出试验结果显示,柚皮素磷脂复合物溶出度明显增加,较易被人体吸收利用。     

绿茶和红茶提取物抑制中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化损伤和凋亡的比较

为比较绿茶、红茶提取物对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞光损伤的抑制作用,用不同浓度的绿茶、红茶提取物对人表皮角质形成细胞(HaCaT)预处理6 h,以60 mJ/cm2的剂量照射细胞,比较细胞生存率和细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性以及丙二醛(MDA)含量的变化,用荧光法检测细胞内活性氧(ROS)的含量,用流式细胞仪检测细胞的凋亡变化,并对绿茶、红茶的茶多酚及儿茶素类物质含量进行比较。结果表明：与空白对照组相比,UVB辐射模型组的HaCaT细胞活性下降了21.61%,细胞损伤严重;与UVB辐射模型组相比,绿茶、红茶提取物可提高UVB辐射后HaCaT细胞的存活率,提高SOD、GSH–Px活性(P<0.01),降低LDH活性、MDA含量和细胞内氧自由基含量(P<0.01),降低由UVB辐射导致的细胞凋亡率(P<0.01),使细胞凋亡率分别降低了6.94%和3.68%;绿茶中茶多酚和儿茶素类物质的含量明显高于红茶,绿茶提取物的抑制效果优于红茶提取物。综合分析以上结果,认为绿茶、红茶提取物可以减少由UVB辐射导致的HaCaT细胞损伤和凋亡,具有光保护作用,其机制与细胞抗氧化能力的增强和氧自由基的加速清除有关,且绿茶提取物的作用效果比红茶提取物的好。     

牛病毒腹泻病毒(BVDV)E2重组蛋白ELISA检测方法的初步建立

[目的]为牛病毒性腹泻病毒抗体快速检测提供敏感、特异检测方法.[方法]重组质粒pET-(1-345)转化宿主菌BL21(DE),以IPTG进行诱导表达,使外源基因获得了较高水平的表达; Westem一blot检测表达产物反应原性,同时进行特异性检测;将收集的纯培养物进行超声波裂解后以His bind kit蛋白质纯化试剂盒纯化回收目的蛋白,再以纯化后的目的蛋白作为包被抗原进行方阵滴定试验,确定目的蛋白作为包被抗原的最佳稀释度.[结果]重组蛋白表达可达菌体蛋白总量的19.7;,且具有较好的反应原性和特异性,以此方法建立的间接ELISA方法对收集的约43头份血清样品进行检测, 检测阳性结果与进口试剂盒检测结果符合率达到93.55;.[结论]以BVDV E2重组蛋白作为抗原建立的间接ELISA检测方法是可行的,为其进一步的标准化莫定基础.     

树莓果油抑制UVB诱导HaCaT细胞光老化的作用研究

【目的】探究树莓果油对中波紫外线(UVB)诱导的人永生化角质形成细胞(HaCaT)光老化的抑制作用。【方法】采用超临界CO₂流体萃取技术提取树莓果油后，通过气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析其化学成分。建立HaCaT的UVB光老化模型，通过CCK-8法检测细胞存活率，用酶联免疫吸附法(ELISA)和微板法测定被UVB损伤的HaCaT细胞中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、硫氧还蛋白(Trx)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。【结果】GC-MS分析显示，树莓果油中含有脂肪酸、脂肪酸酯、生育酚、甾醇等53种化学成分，其中油酸、亚油酸、Z-9-油酸乙酯、维生素E和谷甾醇与其抑制UVB诱导HaCaT细胞的光老化密切相关。抗光老化活性研究发现，与模型组相比，树莓果油能明显提高UVB辐射后HaCaT细胞的存活率(P<0.01),且具有明显的剂量依赖关系。此外，树莓果油能明显升高UVB诱导的HaCaT细胞中COL1A1的含量且降低MMP-3的含量...     

狭鳕鱼皮胶原肽对过氧化氢诱导的人成骨细胞氧化损伤作用

[目的]复制过氧化氢诱导人成骨细胞氧化损伤模型,探讨狭鳕鱼皮胶原肽保护作用机制。[方法]以人成骨细胞为研究对象,将对数生长期的细胞分为6组:正常对照组、H_2O_2损伤组、胶原蛋白肽低(100μg/m L)、中(300μg/m L)、高(600μg/m L)浓度组、阳性对照组(300μg/m L维生素E),CCK-8法检测成骨细胞的存活率,酶联免疫法检测细胞培养液中SOD、MDA的含量,PCR技术检测Foxo3amRNA的表达水平,Western blot技术检测Sirt1、Foxo3a的蛋白表达水平。[结果]与模型组相比,胶原肽组细胞存活率及SOD的水平升高,MDA含量下降,Foxo3amRNA及蛋白表达水平下降,Sirt1蛋白表达水平上升。[结论]300μmol/L H_2O_2可成功复制成骨细胞氧化损伤模型;一定浓度的胶原蛋白肽能降低MDA的含量,提高SOD水平,并具有抗氧化损伤功能,胶原肽对成骨细胞的保护作用可能与下调Foxo3a和上调Sirt1的表达水平有关。     

酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变对细胞自噬和液泡形态的影响

[目的]探讨酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变对细胞自噬和液泡形态的影响.[方法]通过尼罗红染色观察酵母中磷脂合成相关基因突变后脂滴的形态;用绿色荧光蛋白(GFP)标记细胞自噬蛋白Atg8后,采用荧光显微镜和免疫印迹试验检测突变体细胞自噬的发生情况,并使用荧光染料FM4-64检测液泡形态;此外,检测相关突变体对吩嗪-1-羧酸(申嗪霉素)的敏感性.[结果]在营养有限条件下,酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变体中脂滴的大小或数量受到不同程度的影响,但细胞自噬在常规检测条件下正常;其中磷脂酸胞苷转移酶编码基因CDS1突变导致液泡形态异常(碎片化),而其他磷脂合成相关基因突变不影响液泡形态;回补CDS1后,cds1-DAmP突变体中液泡形态恢复正常;此外,cds 1-DAmP突变体对吩嗪-1-羧酸处理更为敏感.[结论]酿酒酵母中脂滴和液泡形态异常不一定影响细胞自噬的正常进行,但可能影响其对外界环境的响应.     

改性柚皮吸附剂的制备及其去除水中六价铬效果分析

[目的]研究改性柚皮吸附剂制备工艺及其对水中六价铬[Cr(VI)]的去除效果,为实现果皮类废弃物资源化利用提供参考依据.[方法]以柚皮为原料,采用磷酸活化改性并经挤压成型制备柚皮炭基颗粒吸附剂(PP-H3PO4),通过红外光谱(IR)、扫描电镜(SEM)和热重—差热(DSC/TG)检测分析柚皮活化改性前后的组成、结构和性质变化,并考察PP-H3PO4投加量、pH、处理时间和盐浓度等因素对含100 mg/L Cr(VI)污水去除效果的影响.[结果]正交试验获得柚皮粉最优磷酸改性制备工艺为:柚皮粉与磷酸质量比1:1.2、活化温度130℃、活化时间45 min,所得产物碘值达1036.79 mg/g;经IR、SEM和DSC/TG检测分析证实,改性吸附剂的-OH、-NH2和-C=O活性基团增多,内部孔道更丰富、结构变粗糙.PP-H3PO4对含100 mg/L Cr(VI)污水处理的最佳条件为:吸附剂投加量3.0 g/L、温度25℃、pH 2.0,处理120 min可达吸附平衡,Cr(VI)去除率在99.50%以上,且0~3.0 mol/L的氯化钠盐物质对Cr(VI)去除率影响较小.[结论]采用磷酸活化改性并经挤压成型制备的柚皮炭基颗粒吸附剂(PP-H3PO4)对Cr(VI)有很强的吸附能力,可用于去除污水中Cr(VI).     

大豆油体蛋白基因GmOLE2的功能分析

[目的]本文旨在对编码栽培大豆(Glycine max)油体蛋白(oleosin,OLE)的GmOLE2基因进行功能研究,分析其蛋白结构、在油脂合成中的调控作用以及对非生物胁迫的响应.[方法]运用生物信息学方法,分析其蛋白保守结构、亲疏水性以及进化关系;利用农杆菌侵染获得转基因拟南芥纯合株系,并利用气相色谱检测转基因拟...