侵染菊花的番茄不孕病毒

田间采集的菊花病毒病标样13~(?),能侵染菊花,病株表现出轻度花叶、斑驳;侵染烟草和心叶烟表现出花叶、畸形,叶背形成耳突症状;侵染番茄表现出花叶与畸形;还能使苋色藜、昆藜表现局部斑。寄主范围广泛,能侵染菊科、茄科、藜科等多种植物,并能通过汁液、蚜虫传毒。电镜负染或超薄切片可观察到球状病毒粒子,直径为28～30nm。紫外吸收光谱表现为典型核蛋白吸收峰。A260/280=1.7974.与番茄不孕病毒(TAV)有血清反应,而与CMV无血清反应。因此认为13~(?)分离物是番茄不孕病毒。     

切花菊的番茄不孕病毒脱除技术研究

番茄不孕病毒是福建省切花菊病毒病的主要病原病毒,平均带毒率高达８５．９％。为探讨其脱毒技术及其可行性,以福建省种植的菊花品种为试验材料采用（１）热处理。（２０热处理结合茎尖培养。（３）热处理结合茎尖培养再二次培养等３种处理,经生物学鉴定,电镜观察和间接酶联免疫吸附试验检测。３种处理的脱毒率分别为１３．３％－２０．０％,４１．６％－６０．０％和８３．３％－９０．０％。     

环介导等温扩增技术检测菊花中番茄不孕病毒

【目的】环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种特异、灵敏、快速的新型基因检测技术。本研究拟用该技术建立菊花中番茄不孕病毒(TAV)的检测方法。【方法】设计能识别TAV CP序列6个特定区域的4种LAMP特异引物,对MgCl2、dNTPs、甜菜碱等LAMP反应条件进行优化,利用新建的LAMP法检测TAV,比较LAMP和RT-PCR2种不同方法的检测灵敏度。【结果】建立了检测番茄不孕病毒的LAMP技术;LAMP比RT-PCR具有灵敏度更高、快速、简便等优点。【结论】建立的LAMP技术能快速、准确、简便地检测出菊花中的番茄不孕病毒。     

番茄不孕病毒实时荧光RT-PCR检测方法研究

番茄不孕病毒(tomato aspermy vires,TAV)是危害我国菊花生产的主要病毒之一.本研究根据该病毒外壳蛋白北京分离物的基因,设计特异性引物与荧光探针,建立了基于TaqMan探针的实时荧光RT-PCR检测方法.该方法与DAS-ELIAS相比,检测灵敏度提高了约1 000倍,重复性试验表明批内与批间变异系数均在5%以内,整个检测过程仅需2 h,是一种操作简便、特异性强、灵敏度高、快速有效的TAV检测方法.     

菊花上2种病毒的检测及其部分外壳蛋白基因序列分析

采集昆明地区花卉基地和公园的269份菊花样品,调查并分析侵染菊花的番茄不孕病毒(Tomatoaspermy virus,TAV)和菊花B病毒(Chrysanthemum virus B,CVB)的发病状况。ELISA和RT-PCR检测结果表明,TAV和CVB在菊花植株上的发病率分别为4.62%和16.70%。对3个TAV分离物和8个CVB分离物的外壳蛋白(coat protein,CP)基因的部分序列进行测定,并分别与GenBank登录的TAV和CVB序列进行比对和系统进化分析,结果显示各TAV分离物的CP基因核苷酸序列同源性为85.04%～98.02%。在系统进化树中聚集的2个簇中,昆明分离物都在同一簇。CVB的CP基因存在较明显的序列变异,核苷酸序列同源性为75.09%～84.99%,在系统进化树中聚为3个簇,昆明分离物均集中在同一簇。     

番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒复合侵染的分子鉴定

以番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)及番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus, ToCV)为对象,用分子检测方法对山东、安徽2省病原进行鉴定。选取山东、安徽2省7个地区,对2种病毒病进行田间调查,采集疑似样品扩增序列,对其进行同源性比对和遗传进化树等分析,进一步了解山东、安徽2个省蔬菜产区2种病毒病的发生情况。结果表明,YLCV在山东省大部及安徽省局部地区已经发生扩散且中国所有的分离物仍属于IL株系。明确了ToCV在安徽地区发生,且统计发现2个省6个地区ToCV、TYLCV存在单独侵染及复合侵染。ToCV分离物均可分为2个大组,其中该研究所得到的分离物均与中国其他地区的分离物聚类到一组。     

RT-PCR检测菊花B病毒的研究

根据菊花B病毒(CVB)的外壳蛋白基因序列设计、合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增,结果从感病组织中扩增出与预期的776bp大小一致的目标片段,而健康组织无此扩增产物;将PCR产物插入pGEM-T载体克隆并测序,序列分析表明与CVB的相应序列同源性达到85%;将感病组织总RNA以10 x梯度稀释成不同浓度,测出RT-PCR检测CVB的灵敏度为10-4x;PCR产物克隆作为RT-PCR反应的阳性对照,解决了毒源保存和传播的问题,从而建立了CVB快速、灵敏、准确的RT-PCR鉴定和检测技术.     

番茄黄化曲叶病毒侵染对番茄叶片光合及荧光特性的影响

以感病番茄‘1479’和抗病番茄‘H24’为试验材料,研究番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)侵染对植株叶片光合及荧光特性的影响。结果表明:TYLCV侵染后,‘1479’叶片叶绿素含量、净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)均显著降低,胞间CO2浓度(Ci)增加;‘H24’各个参数变化不显著;2个品种的PSⅡ最大光化学量子产量(Fv/Fm)降低幅度较小,‘1479’的PSⅡ有效光化学量子产量(Fv’/Fm’)、PSⅡ实际光化学量子产量(ΦPSⅡ)、表观光合电子传递速率(ETR)和光化学猝灭系数(qP)均显著降低,而‘H24’则降幅较小;‘1479’非光化学猝灭系数(qN)显著升高,而‘H24’升高不明显。表明TYLCV侵染使番茄植株光合作用受到抑制,对感病材料影响显著,而对抗病材料无明显影响。     

侵染番茄的中国番木瓜曲叶病毒基因组结构特征

从云南元谋采集表现曲叶症状的番茄样品中分离粉虱传双生病毒(Whitefly-transmitted geminivirus,WTGs)分离物YN678。序列分析表明其DNA-A为单链环状,全序列长度为2739 bp,编码6个ORFs。BLAST比对发现,该分离物与双生病毒科菜豆金色黄花叶病毒属的中国番木瓜曲叶病毒HeNZM1分离物(PaLCuCNV-[HeNZM1])最为接近,相似性为98.5%,表明番茄中的分离物YN678是PaLCuCNV的1个分离物。利用WTGs卫星分子DNAβ特异引物Beta01/Beta02进行PCR扩增、克隆和测序,在YN678中扩增到DNAβ分子,全长为1357 bp,该序列与中国番茄黄曲叶病毒YN149分离物(TYLCCNV-[YN149])伴随的DNAβ相似性最高,达到99.1%。这是首次从云南番茄中分离到中国番木瓜曲叶病毒。     

侵染河南省番茄的番茄黄化曲叶病毒及伴随卫星DNA分子的基因组特征

从河南省长葛市的番茄病株上分离到4份病毒分离物HNCG1、HNCG2、HNCG3和HNCG4,为明确病原类型及其亲缘关系,首先采用检测双生病毒的简并引物进行检测,均能从样品中扩增出约500 bp的片段,4个序列同源性达99%。对HNCG4基因组DNA-A全序列测定表明,其全长为2 781 bp,与番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)省内分离物(HNSQ1、HNNY1、HNLY1、HNQX)及其临近省份的河北分离物(TYLCV LF)、北京分离物(TYLCV BJ3)亲缘关系较近,序列同源性均达99%。进一步研究发现,HNCG1和HNCG4均伴随有1 347 bp的卫星DNAβ,而HNCG2和HNCG3中未检测到DNAβ。序列比对结果表明,HNCG1和HNCG4的DNAβ之间序列同源性为100%,与越南TYLCV分离物DX2的卫星DNAβ序列同源性最高,达88%。根据以上结果,引起河南省长葛市番茄黄化曲叶病的病毒为TYLCV,部分分离物伴随有卫星DNA分子。     

RT-PCR检测菊花B病毒的研究

根据菊花B病毒（CVB）的外壳蛋白基因序列设计、合成引物,以感病组织5和健康组织总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增,结果从感病组织中扩增出与预期的776bp大小一致的目标片段,而健康组织无此扩增产物;将PCR产物插入pGEM-T载体克隆并测序,序列分析表明与CVB的相应序列同源性达到85％;将感病组织总RNA以10x梯度稀释成不同浓度,测出RT－PCR检测CVB的灵敏度为10^-4x;PCR产物克隆作为RT－PCR反应的阳性对照,解决了毒源保存和传播的问题,从而建立了CVB快速、灵敏、准确的RT－PCR鉴定和检测技术。     

番茄不孕病毒(TAV)脱除对怀白菊叶绿素含量及氮代谢相关指标的影响

[目的]探究番茄不孕病毒(TAV)脱除对怀白菊叶绿素含量和氮代谢水平的影响,为怀白菊脱毒苗的大田推广应用提供理论依据.[方法]以前期获得的TAV脱除怀白菊试管苗为试材,以未经脱除TAV的试管苗为对照(CK),对两者进行继代培养,并测定培养过程中叶片叶绿素含量及氮代谢的相关生理指标.[结果]继代培养过程中,CK与TAV脱除怀白菊试管苗叶片的叶绿素α和叶绿素b含量随培养天数的增加而升高,两者均以继代第22 d时的增幅最大,分别为5.24%和41.69%.与CK相比,TAV脱除提高了相同培养天数时叶片的叶绿素a、叶绿素b含量,且差异达显著(P<0.05,下同)或极显著(P<0.01)水平.怀白菊脱除TAV病毒后,其硝酸还原酶(NR)活力、游离脯氨酸和可溶性蛋白含量在继代培养过程中均显著高于CK,三者最大增幅分别为27.99%(继代22 d)、28.10%(继代22 d)和5.89%(继代38d).[结论]TAV脱除能有效提高怀白菊的叶绿素含量及氮代谢水平,利于其生长发育.     

番茄黄化曲叶病毒侵染危害海南番茄及其分子特征

[目的]明确引起海南三亚、东方和陵水番茄黄化曲叶病的病毒分子特征,为防控该病害提供科学依据.[方法]以2019年2月从海南三亚、东方和陵水采集的15份疑似番茄黄化曲叶病样本为材料,采用菜豆金色花叶病毒属病毒的通用简并引物AV494/CoPR对15份样本进行PCR检测,并对PCR检测为阳性的样本进行滚环扩增(RCA)及基因克隆,获得侵染海南三亚、陵水和东方番茄的病毒基因组全序列,进而在GenBank数据库BLASTh程序进行相似性比对,利用SDT 1.2的MUSCLE alignment进行序列相似性比较分析,采用MEGA 6.0的邻接法(Neighbor-joining,NJ)构建系统发育进化树,明确所获得病毒分离物与已报道分离物的亲缘关系.[结果]获得侵染海南三亚、陵水和东方番茄的3个番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)分离物基因组全序列,其大小均为2781 nt,编码6个开放阅读框(ORF),其中病毒链上AV1和AV2基因,互补链上AC1、AC2、AC3和AC4基因.相似性比对分析结果表明,TYLCV海南分离物与墨西哥和美国分离物的相似性在99.0%以上,与来自我国不同省(市)的14个TYLCV分离物的相似性在98.0%以上.系统发育进化分析显示,海南三亚、陵水和东方3个分离物与墨西哥、美国及我国北京和江苏分离物聚集在一个小分支,进一步与来自我国其他12个省(市)、韩国、哥斯达黎加和澳大利亚的分离物形成一个分支.[结论]侵染海南番茄的TYLCV可能来自我国大陆的番茄等种苗和烟粉虱带毒传入,也有可能来自墨西哥和美国等其他国家.     

3种番茄斑萎病毒属病毒侵染寄主植物的细胞病理特征

应用超薄切片电镜观察,对3种番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒侵染寄主细胞病理特征进行了比较分析.番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)侵染的番茄,叶部细胞中病毒粒体呈块状聚集于内质网池中,果实细胞中呈块状、管状或单个粒体散布于细胞质中,细胞核较完整,叶绿体空泡化;凤仙花坏死斑病毒(Impatiens necrotic spot virus,INSV)侵染的蝴蝶兰叶部细胞和亚细胞结构消失,病毒粒体分布较少,聚集于细胞质中的内质网池内;花生黄斑病毒(Groundnut yellow spot virus,GYSV)侵染的辣椒果实的亚细胞结构较完整,病毒粒体呈块状聚集于细胞质的囊腔内.研究结果表明,不同种类的Tospovirus病毒侵染寄主植物后,其病毒粒体在寄主细胞内的分布、聚集方式及对亚细胞结构的影响具有明显差异,可作为诊断的依据.     

2008年侵染江苏省番茄的粉虱传双生病毒发生分布

2007年底在江苏省兴化市保护地栽培番茄上发生了一种危害异常严重的病毒病,其病原初步鉴定为粉虱传双生病毒(Whitefly-transmitted geminivirus,WTG),为明确其在江苏省的发生情况及危害程度,2008年作者在省内各地展开调查,共采集病样115份并对其进行了分子鉴定.检测结果表明:2008年该病在南京、苏州、常州、徐州、泰州和盐城等地均有发生,已遍布于苏南、苏中、苏北;与2007年的发生情况相比,呈明显的蔓延态势.对其中17份代表性分离物的部分序列进行了序列测定,序列分析结果显示这些分离物的序列之间有着98.2%～100.0%的同源性,BLAST分析显示其与番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)同源性最高(超过99.0%). 发生情况及危害程度,2008年作者在省内各地展开调查,共采集病样115份并对其进行了分子鉴定.检测结果表明:2008年该病在南京、苏州、常州、徐州、泰州和盐城等地均有发生,已遍布于苏南、苏中、苏北;与2007年的发生情况相比,呈明显的蔓延态势.对其中17份代表性分离物的部分序列进行了序列测定,序列分析结果显示这 分离物的序列之间有着98.2%～100.0%的同源性,BLAST分析显示其与番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf     

番茄子叶、茎段及菊花愈伤组织对潮霉素敏感性的研究

分别以番茄东农704、东农708、东农709三品种的子叶、茎段及菊花30、33、34的愈伤组织为材料,用不同浓度的潮霉素进行敏感性试验.结果表明,随着潮霉素浓度的升高,番茄子叶、茎段的出愈率下降,菊花愈伤组织的褐化率增加.在以潮霉素作为抗性选择标记时,选择压力番茄以15 mg/L为宜,菊花3品种潮霉素的选择压力以15～20 mg/L为好.     

侵染云南烟草的番茄斑萎病毒（TSWV）的RT-PCR检测

 番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus, TSWV）寄主广泛,危害多种作物,近年发现侵染烟草引起严重经济损失。研究该病毒的分子检测方法,对健康烟草种苗培育和指导病害防控具有重要意义。本文根据 TSWV核壳体蛋白基因(N基因)序列设计引物,用RT PCR方法对采于云南疑似番茄斑萎病毒症状的5个烟草病害标样（102,514,自10,自16,自58）进行检测,PCR产物连接pMD载体并测序。测序结果表明：这5种烟草病害分离物与已报道TSWV N基因核酸序列相似性大于9704%,所编码氨基酸序列的相似性达9767%以上。这说明获得的5种病毒分离物均属于TSWV。本研究建立了侵染云南烟草的番茄斑萎病毒（TSWV）的RT PCR检测方法。     

番茄褪绿病毒的研究进展

番茄褪绿病毒病是近年来在番茄上广泛发生且为害严重的病害,由长线形病毒科毛形病毒属中的典型成员番茄褪绿病毒系统侵染引起。目前,该病毒在我国许多地方均有发生且呈迅速蔓延之势。本研究较为系统全面地综述了番茄褪绿病毒病的症状学、病原的分子生物学特征、病害的侵染特性以及病害防控方面的研究进展。     

番茄褪绿病毒研究进展

番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus, ToCV)属于长线形病毒科(Closteroviridae),毛形病毒属(Closteroviridae),可以侵染番茄、马铃薯、黄瓜等多种农作物,自2011年在我国山东发现该种病毒以来,目前已经逐步蔓延至多个省份,对我国番茄的安全生产造成了重大损失。本文从番茄褪绿病毒的基本特点、检测方式、防治措施等多方面进行归纳总结,以期为番茄褪绿病毒的防治工作以及抗番茄褪绿病毒品种育种奠定基础。     

不同方法脱除菊花体内3种病毒效果的研究

【目的】探讨脱除菊花体内菊花B病毒(CVB)、黄瓜花叶病毒(CMV)及烟草花叶病毒(TMV)3种病毒的最佳方法。【方法】以菊花品种"墨菊"为材料,采用茎尖培养法、病毒唑结合茎尖培养法及热处理结合茎尖培养法对脱除CMV、CVB、TMV的效果进行研究,其中病毒唑结合茎尖培养法采用L9(34)正交试验,对茎尖长度、病毒唑质量浓度及处理时间进行筛选,热处理结合茎尖培养法中热处理采用昼夜变温并逐步升温的方式。【结果】茎尖培养法中以长度为0.4～0.5mm茎尖的脱毒效果最佳,茎尖成活率为66.7%,CMV、CVB、TMV 3种病毒的脱毒率分别为61.9%,63.2%,55.0%;病毒唑结合茎尖培养法中以茎尖长度为0.4～0.5mm、病毒唑质量浓度为10mg/L、处理时间为42d组合的脱毒效果最佳,茎尖成活率为53.3%,CMV、CVB、TMV 3种病毒的脱毒率分别为88.2%,86.7%,81.3%;热处理结合茎尖培养法中以试管苗热处理60d后,剥取长度为0.4～0.5mm的茎尖进行培养的脱毒效果最佳,茎尖成活率为56.7%,CMV、CVB、TMV 3种病毒的脱毒率分别为100.0%,100.0%,94.1%。【结论】3种脱除菊花体内病毒的方法中,热处理结合茎尖培养法的脱毒效果最佳。