日本牡丹品种花粉超低温保存

为解决杂交育种工作中的时空不遇,延长花粉寿命,本文对23个日本牡丹品种花粉进行了超低温保存研究。对新鲜花粉及超低温保存花粉离体萌发率测定结果表明:不同日本牡丹品种新鲜花粉生活力存在差异,23个品种中,‘大藤锦’花粉萌发率最高,达到60.89%,而‘岛大臣’最低,仅3.49%;室温条件下,日本牡丹品种花粉寿命仅15d左右,而超低温保存可以使日本牡丹品种花粉寿命至少延长至2年。经超低温保存2年,花粉仍然具有较高的萌发率,有的甚至超过保存前水平,因此超低温保存技术可用于日本牡丹品种花粉的长期保存。     

黄帝陵古侧柏花粉生活力及其保存方法的研究

以黄帝陵千年古侧柏花粉为试验材料,用离体萌发法测定花粉的生活力,研究不同保存方法对花粉萌发率的影响,探讨花粉含水量、投入方式、化冻方式对超低温保存效果的影响。结果表明:古侧柏花粉在9%蔗糖+0.01%硼酸的培养基中离体培养4 d萌发率最高。90 d内,随着保存时间的延长,室温（20℃）保存的花粉迅速失活,低温（0℃、-20℃）保存的花粉萌发率呈逐渐下降趋势,超低温（-196℃）保存的花粉萌发率最高且保持效果最好,为古侧柏花粉长期保存的适宜方法。在超低温保存中,花粉以未经干燥、直接投入液氮、37℃恒温水浴化冻5 min保存效果最好;花粉含水量、投入方式、化冻方式之间交互效应显著。     

芍药花粉超低温保存4年后的生活力检测

为了探讨花粉长期保存的最佳方法,以及为芍药花粉库的建立提供依据,该文比较了冷冻保存（-20℃）和超低温保存（-196℃）芍药花粉的不同效果,检验了17个芍药品种花粉经超低温保存4年后的生活力。结果表明,超低温（-196℃）保存的花粉萌发率普遍高于冷冻保存和对照,而大部分品种花粉经冷冻保存（-20℃）4年后萌发率明显降低。离体萌发试验表明,超低温保存芍药花粉的效果因品种而异,但绝大部分品种（94.1%）花粉保存效果良好（相对保持率＞50%）。初步人工授粉试验表明,超低温保存4年后的芍药花粉仍具有受精结实能力。      

花楸花粉超低温保存及再生

【目的】探讨花楸(Sorbus pohuashanensis)花粉超低温保存及再生的方法,以延长其花粉保存时间,为科研、生产提供理论和实践依据。【方法】分别设置不同培养基配方、不同光照、不同采集时间处理,进行花楸花粉离体萌发试验,测定各试验处理的花粉萌发率;设置不同冷冻方式和化冻方式处理,测定两种方式不同处理的花粉萌发率;制备不同含水率的花粉,分别测定其在超低温保存前、后的萌发率。【结果】(1)培养基为100g·L~(-1)蔗糖+100 mg·L~(-1)硼酸的处理,花粉萌发率最高,达72.42%;(2)黑暗处理花粉萌发率为77.24%,比光照处理高8.96个百分点;(3)一天中,10∶00和14∶00采集的花粉,其活力显著高于其他时间采集的花粉;(4)-20℃预冷冻培养30min后投入液氮保存24h的处理效果最好,花粉萌发率达43.15%;(5)超低温保存后40℃水浴解冻5min处理比其他解冻方式处理的花粉活力高,萌发率为35.70%;(6)花楸花粉超低温保存最适含水率为7.72%,此含水率下花粉超低温保存后萌发率最高,为31.53%。【结论】花楸花粉采用超低温技术保存24h后仍具有活力,黑暗条件、花粉采集时间、花粉萌发培养基、花粉含水率、冷冻与化冻方式均会对花楸花粉超低温保存效果产生显著影响。     

丁香属12种植物花粉保存方法研究

丁香属植物是重要的园林观赏植物。 试验测定了丁香属12种植物鲜花粉在室温(25℃)、冰箱(4℃)、液氮罐(－196℃)中保存不同时间的花粉活力。研究结果表明,在25℃保存条件下,11种花粉可保存至7 d,其中有5种保存30 d后仍有活力;在4℃条件下,12种丁香花粉均可保存至30 d,其中红丁香和紫丁香保存180 d后仍有生活力,但萌发率显著低于新鲜花粉萌发率,分别为219%和15%;在－196℃条件下,有11种花粉能够保存至180 d,且基本与新鲜花粉萌发率无显著差异。因此,超低温保存是较长期保存丁香属植物花粉活力的有效途径。     

桃叶卫矛花粉超低温保存

研究桃叶卫矛花粉萌发所需蔗糖和硼酸的最佳浓度、培养时间、培养环境以及花粉日活力的变化,分析不同含水量和不同解冻方式对花粉超低温保存效果的影响。结果表明:桃叶卫矛花粉培养基中蔗糖和硼酸最适浓度配比为100 g/L蔗糖+150 mg/L硼酸;最适培养环境和培养时间为室温条件下光照培养2 h;1 d中花粉活力最高的时间为16:00;经超低温(-196℃)保存后,含水量为4.14%的花粉经室温化冻30 min后,萌发率最高。     

茄子花粉的离体萌发和生活力保存研究（英文）

茄子是广泛栽培的蔬菜,花粉的离体萌发和生活力保存技术对杂交育种有重要意义。以2个茄子杂交一代组合的父母本为材料,开展了茄子花粉离体萌发培养基成分筛选,不同保存温度对花粉活力和授粉结实效果影响的研究。结果表明,在5%、10%和15%3个蔗糖浓度中,茄子花粉在5%的培养基上萌发最好,赤霉素对干燥保存花粉的萌发有促进作用,适宜的培养基成分是:0.5%琼脂+5%蔗糖+0.01%H3BO3+0.01%GA3;适宜培养时间为:新鲜花粉2 h,干燥低温保存的花粉4 h。低温(4℃)干燥有利于保持花粉活力,但时间长,适宜的干燥方式是室温(25～30℃)干燥花药4 h。茄子新鲜花粉活力随着分枝的增多有下降趋势,第2和第3次分枝上的花粉活力最强,第5次分枝上的花粉活力显著下降,第2和第3次分枝上的开花前1天的蕾期花粉平均萌发率在65%以上。以萌发率10%作为茄子花粉有效活力的下限,如取萌发率较高的第2、3次分枝上的花粉干燥保存,室温保存1 d,4℃保存5～10 d,-80℃保存368 d,花粉仍有活力,平均授粉坐果率在70%以上;以保存0～20 d的数据统计,不同保存温度之间和不同保存时间之间的平均单果结实率差异不显著,平均单果种子实粒数,-80℃的与新鲜花粉的差异不大,但比4℃的增加87.3%,差异极显著。     

现代月季6个品种花粉超低温保存研究

【目的】为实现月季花粉长期保存,满足杂交育种和种质资源保存需要,本文以6个现代月季品种的花粉为试验材料,研究其超低温保存技术。【方法】用扫描电子显微镜观察比较6个品种花粉形态、干燥法测定花粉自然含水量、悬滴法检测花粉活力,筛选出适宜萌发培养液,在此基础上进行了液氮保存,并研究这些因素对超低温保存效果的影响。【结果】6个品种花粉悬滴培养的适宜萌发液为15%蔗糖+0.05%硼酸。不同品种新鲜花粉萌发率不同,春季采收的新鲜花粉萌发率为8.91%～27.07%,秋季为9.95%～24.32%,6个品种春季采集的花粉萌发率均高于秋季,但3个差异显著,3个差异不显著。不同品种新鲜花粉含水量不同,春季采收的花粉含水量为9.6%～11.9%;秋季为9.2%～11.5%,4个品种春、秋两季采收的花粉含水量没有显著差异,另外2个品种春季采收的花粉含水量分别显著高于或低于秋季花粉2.4%或1.6%,含水量变化值差异不大。超低温保存后花粉萌发率变化因品种和花粉采收季节而异,6个月季品种花粉经过液氮保存1个月后萌发率为10.36%～21.28%,为新鲜花粉的59.3%～133.9%。长球形的‘金凤凰’和‘希望’,超低温保存后花粉活力有所下降;而超长球形的‘金玛丽’、‘雨果’、‘伦特娜’和‘仙境’,超低温保存后萌发率基本保持稳定。花粉含水量与花粉超低温保存前后萌发率未显著相关。【结论】不同季节采收的自然成熟散粉的6个月季品种花粉均能实现超低温保存,秋季采收的花粉液氮保存后萌发率较新鲜花粉变化较小,但是春季采收的花粉萌发率更高,更适合超低温保存。超低温保存效果与品种、新鲜花粉萌发率、花粉形状和采收季节有关。     

不同低温保存对雪花梨花粉萌发的影响

针对梨树生产与科研中各品种间存在花期不遇和授粉树配置不合理,从而影响梨树授粉的问题,研究了不同低温保存方法对雪花梨花粉萌发率和萌发速度的影响。结果表明：2002～2004年雪花梨花粉萌发率3 a平均为84.1%,与胎黄梨（91.0%）无显著差异,但显著〉鸭梨（66.3%）和金坠梨（44.7%）。雪花梨花粉在室温（20～22℃）条件下保存1个月,萌发率迅速降为5%,保存5个月后萌发率降为0;在冰箱（2～3℃）条件下只能保存5个月,保存1 a后萌发率（11.2%）降低明显;在冰柜（-18℃）条件下保存3 a仍能保持较高的萌发率（56.3%）,冰柜保存是雪花梨花粉较适宜的保存方法。雪花梨花粉在23～25℃发芽培养基中4 h即全部萌发,低温保存1 a后萌发时间较新鲜花粉增加1倍,生产上授粉时应先对贮存花粉进行加湿处理,使花粉充分吸水,以保证花粉迅速发芽,确保授粉效果。     

玉蝉花花粉生活力检测和超低温保存研究

[目的]研究花粉超低温保存方法,对于解决植物杂交育种花期不遇问题以及实现种质资源的保存等都具有重要的现实意义。[方法]以鸢尾属植物观赏价值很高的耐寒种玉蝉花为研究对象,对其花粉悬滴法活力检测离体培养基筛选和超低温保存方法进行研究。[结果]玉蝉花花粉活力检测较适合的液体萌发培养基配方为蔗糖150 g/L+H_3BO_3200 mg/L+CaCl_2150 mg/L+Fe_2(SO_4)350 mg/L+KNO350 mg/L+MgSO_4·7H_2O 100 mg/L;超低温保存要采集活力较高的初花期花粉,较适宜含水量为15.0%~20.0%,超低温保存后选用自来水水冲化冻,花粉萌发率由保存前的56.04%提升到保存后的60.53%;玉蝉花花药也可作为超低温保存材料,保存后采用自来水水冲化冻其花粉萌发率为54.11%。[结论]保存后的花粉活力符合花粉使用活力要求,可用于指导实践。     

梅花基因组DNA提取的方法学研究

设计 4种方法 :“简易CTAB法”、“预先去杂 CTAB法”、“简易SDS法”和“预先去杂 SDS法” ,提取梅花‘南京红须’、‘南京红’和‘粉皮宫粉’叶片的基因组DNA。分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和限制酶酶切反应鉴定表明 :“预先去杂 SDS法”尽管提取DNA得率最低 ,却是唯一能够从梅花叶片提取到高质量基因组DNA的方法 ;嫩叶的提取效果好于成熟叶。A2 6 0 A2 80 比值偏高和降解是所获低质量DNA表现的两个主要现象。RNaseA的再次消化无法降低A2 6 0 A2 80 。     

ROS诱导的氧化应激和细胞程序性死亡对超低温保存后花粉生活力的影响

[目的]超低温保存后花粉生活力呈多种变化情况,已有研究表明活性氧(ROS)是超低温保存后花粉生活力变化的主要原因之一.因此,本研究探讨液氮冻存后花粉生活力与ROS诱导的氧化应激和细胞程序性死亡间的关系,以进一步揭示ROS在超低温保存后花粉生活力变化中的作用机制.[方法]以芍药'粉玉奴'的花粉为材料,对比分析超低温保存不...     

杨树花粉低温贮藏技术

设定了-90,-30,-15,5℃和室温5个水平贮藏银中杨花粉,用氯化2,3,5-三苯基四唑（TTC）染色法测定花粉活力.结果表明：银中杨单株间花粉寿命变异显著;花粉活力因贮藏温度不同而存在显著差异,温度越低花粉寿命越长.室温条件下银中杨花粉7 d后即丧失活力;在5℃贮藏10 d时,有活力花粉为22.98%,15 d后丧失活力;15 d后在-15,-30℃条件下贮藏的有活力花粉分别为31.98%,38.56%;在-90℃条件下贮藏15 d后,有活力花粉为82.70%,30 d时有活力的花粉为50.68%.     

玻璃化法超低温保存龙眼胚性愈伤组织的初步探讨

采用玻璃化法对不同基因型的龙眼胚性愈伤组织超低温保存进行了初步探讨.将保存一定时间的胚性愈伤组织于常温下用60%玻璃化溶液(2PVS2)装载30 m in,再于0℃下用PVS2溶液平衡60 m in;换新鲜的PVS2溶液,迅速投入液氮中保存;48 h后化冻.结果表明,具有原胚分化的胚性愈伤组织保存后的存活率明显高于普通胚性愈伤组织;40℃温水浴、25℃左右室温和自来水冲洗等3种不同的化冻方式对龙眼胚性愈伤组织玻璃化超低温保存后的存活率具有同样的效果.     

不同贮藏温度对小黑麦花粉活力的影响

在室温、4℃、-20℃和液氮(-196℃)下贮藏小黑麦的花粉,研究不同温度对新小黑麦1号、3号、4号和5号花粉活力的影响,结果表明:室温条件下保存3 h,小黑麦花粉活力均在80%左右,3~4 h后花粉活力降低很快,7~8h后花粉活力几乎全无。4℃保存可适当延长花粉活力,保存8 h后,新小黑麦1号、5号花粉的活力降低到60%,而3号和4号降低为80%左右。48 h左右花粉活力降至0%。与4℃相比,-20℃保存下不同品种小黑麦花粉活力降低更快,4 h后花粉活力降低到50%~65%,16 h后花粉活力接近0%。液氮超低温冷冻保存下小黑麦花粉活力相对稳定,保存10天后活力仍然很高,其活力相对保持率在92%左右,理论上可以长时间保存花粉。     

玻璃化法超低温保存匍匐翦股颖胚性愈伤组织及其植株再生

采用玻璃化法对匍匐翦股颖愈伤组织进行超低温保存条件及植株再生进行初步研究.结果表明:将继代2次的愈伤组织接种到预培养基上,4℃低温预培养5 d.预培养后的愈伤组织在常温下用装载液过渡10 min,再于0℃下用玻璃化溶液PVS2处理50 min后,加入新鲜的PVS2迅速投入液氮中保存1 h以上,取出后在30℃水浴中解冻,用MS+1.0 mol.L-1蔗糖溶液洗涤3次,每次10 min,细胞存活率可达85.6%,接种在恢复培养基上培养,胚性愈伤组织能正常进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生.