腺苷及类似物对猪血小板膜磷酯酰肌醇磷酸化的抑制作用

为进一步探讨腺苷的作用机理,本文研究了腺苷对猪血小板膜磷酯酰肌醇磷酸化的影响,其过程及结果如下:猪血小板膜与不同浓度的腺苷或100μmol/L的腺苷类似物及γ—~(32)P—ATP37℃反应5min,被标记的     

腺苷对猪血小板膜上磷脂酰肌醇激酶和磷脂酰肌醇-4-磷酸激酶的抑制作用

用差速离心法分离猪血小板膜，在适当条件下，用［ γ－３２ Ｐ） ＡＴＰ与其保温，观察３２Ｐ掺入磷脂情况。结果表明：（１）无外源性磷脂酰肌醇－４－磷酸（ＰＩＰ）时，３２Ｐ主要掺入ＰＩＰ；补充外源性ＰＩＰ后，３２Ｐ也可掺入磷脂酰肌醇－ ４， ５－二磷酸（ ＰＩＰ２） ９（ ２）腺苷及类似物 ５’－氧－ ５’－脱氧腺苷对３２ Ｐ掺入这两种磷脂均有强烈的抑制作用；（３）这种抑制作用呈剂量—效应关系（ＩＣ５０分别为８０μｍｏｌ／Ｌ和７０μｍｏｌ／ Ｌ），并与ＡＴＰ里竞争性。提示腺苷及类似物５’－氯－５’－脱氧腺苷这种抑制作用可能与其抑制血小板聚集作用有关。     

肝素等药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响

在Mg~(2+)存在下,用(γ-~(32)P)ATP与猪红细胞膜保温(30℃)3min,观察一些药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响。用氯仿:甲醇中止反应。用酸性氯仿:甲醇混合液抽提磷脂及硅胶板TLC分离磷脂。经放射自显影及液体闪烁计数测定生成的(~(32)P)-磷脂酰肌醇-4-磷酸。结果表明①肝素和新霉素对磷脂酰肌醇磷酸化有抑制作用;②六氯环己烷对磷脂酰肌醇磷酸化有促进作用;③Li_2SO_4(10mmol/L)、EGTA(100μmol/L)、茶硷(100μmol/L)作用不明显;④二甲亚矾在低浓度时有促进作用,而在较高浓度时则有抑制作用。结果提示上述作用可能与这些药物的作用机理有关。     

腺苷及其类似物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

本文研究腺苷及其类似物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响,结果表明:(1)腺苷对磷脂酰肌醇磷     

牛脑细胞膜上腺苷结合蛋白质的分离

本文采用改良的梁念慈腺苷亲和层析凝胶合成法，合成了 Ｎ６－（ ６－ 氨己基）腺苷Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析凝胶。并以这种凝胶作为工具，从脑细 胞膜上分离出几种腺苷结合蛋白质。其中亚基分子量为６４，０００和４５，０００Ｄａｌ的蛋 白质经初步的分析鉴定，分别为膜上腺苷载体和磷脂酰肌醇激酶。分离出膜上腺苷 载体和磷脂酰队醇激酶，对腺苷细胞内外转运机理的研究及腺苷与肌醇脂质信使系 统间的相互关系具有重要的意义。     

腺苷对大鼠心肌原蛋白I及磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

用差速离心及等密度离心法从大白鼠心肌细胞中分离收缩蛋白质及质膜,分别与[γ-~(32)P]ATP 保温,观察细胞成分的磷酸化,以及腺苷或腺苷类似物对磷酸化的影响.结果表明,在收缩蛋白质组分,~(32)P 主要掺入肌原蛋白Ⅰ(TroponinⅠ,29000Da);在质膜组分、~(32)P主要掺入磷脂酰肌醇-4-—磷酸(PtdIns-4-P);也就是 ATP 使磷脂酰肌醇(PtdIns)磷酸化。腺苷对此两种磷酸化都有抑制作用,尤以对PtdIns 的磷酸化抑制作用最强。cAMP 对肌原蛋白Ⅰ的磷酸化有刺激作用,这与文献报道相符.作者认为腺苷和 cAMP 对肌原蛋白Ⅰ磷酸化的拮抗作用,与腺苷和肾上腺素对心肌调节的拮抗作用有明显的相关性。鉴于近年发现肌醇磷脂转换在调节细胞活动中起有重要作用,腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用,可能具有重要的生物学意义。     

腺苷对大鼠心肌钙蛋白 I 及磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

用差速离心及等密度梯度离心法从大白鼠心肌细胞分离收缩蛋白质及质膜,分别与[γ—~(32)P]ATP 保温以观察细胞成分的磷酸化,以及腺苷和腺苷类似物对磷酸化的影响。结果表明,在收缩蛋白质组分,~(32)P 主要参入肌钙蛋白 I(Troponin1,29000Da);在质膜组分,~(32)P 主要参入磷脂酰肌醇-4-一磷酸(Ptd Ins4P),亦即 TAP 使磷脂酰肌醇(PtdIns)磷酸化。腺苷对此两种磷酸化都有抑制作用,尤以对 Ptd Ins 磷酸化的抑制最强烈。cAMP 对肌钙蛋白 I 的磷酸化有剌激作用,这与文献报道相符。作者认为,腺苷和 cAMP 对肌钙蛋白 I 磷酸化的拮抗作用与腺苷和肾上腺素对心肌调节的拮抗作用有明显的相关性。鉴于近年发现,肌醇磷脂转换在调节细胞活动中起重要作用,腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用可能有重要的生物学意义。     

当归对猪血小板膜磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

观察当归与肌醇脂质信号系统的关系,以探讨活血化瘀药的可能作用机理。其过程与结果如下:猪血小板膜与20μmol/Lγ—~(32)P—ATP及不同含量     

精胺对猪血小板膜中肌醇磷脂和蛋白质磷酸化的影响

用猪血小板膜与(r-~(32)P)ATP进行磷酸化反应,观察精胺对肌醇磷脂和蛋白质磷酸化的影响.结果表明:(1)对磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸的生成有明显促进作用;(2)对血小板中47KDa蛋白质磷酸化有强烈抑制作用(IC_(50)≈1.0mmol/L)。精胺的这些作用可能与其生理作用机理有关。     

精胺对猪血小板膜中磷酸肌醇和47K蛋白质磷酸化的影响

在Mg~(2+)和外源性磷脂酰肌醇—4—磷酸存在下,用猪血小板膜与〔γ—~(32)P〕ATP在30℃下保温3min,测     

Tyrphostin AG555对重组人肌醇磷脂3-激酶p110β催化亚基活性的影响

目的：研究tyrphostin AG555对重组人肌醇磷脂3-激酶（PI3-K）p110β催化亚基的影响。方法：利用基因工程的方法获得PI3-K p110β催化亚基;用磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸．[У-^32P]ATP与重组PI3-K p110У催化亚基一起保温的方法测定PI3-K的活性;用氯仿和甲酵抽提^32p标记的磷脂。并以硅胶扳薄层层析和放射自显影来进行分析。结果：AG555（2．5～20μmol／L）对重组人PI3-K p110β催化亚基有抑制作用。结论。tyrphostin AG555是一种重组人PI3-K p100β抑制剂。重组人PI3-K p110β催化亚基可作为一种较为简便的筛选有效的PI3-K抑制剂的反应物。     

几种外源物质对大田香蕉抗寒能力的调控效应

用多肽、肌醇、磷酸二氢钾不同浓度组合喷施大田香蕉植株3d后,剪取部分叶片用湿纱布包裹放入人工气候箱中模拟自然寒害胁迫,以探索该三种外源物质对大田香蕉抗寒能力的调控效应。结果表明,多肽、肌醇和磷酸二氢钾混合处理可提高香蕉叶片的比叶鲜重,降低低温胁迫下香蕉叶片的比面失重速率,减轻低温对香蕉叶片的伤害率,维持较高浓度的叶绿素含量。就单因子水平而言,0.5%多肽处理效果极显著优于0.4%和0.6%两水平;6.0μmol/L肌醇显著优于4.0μmol/L和5.0μmol/L两水平,0.25%和0.3%磷酸二氢钾显著优于0.5%水平,但该两者间无显著差异。多肽、肌醇和磷酸二氢钾混合处理中,以0.5%多肽+6.0μmol/L肌醇+0.25%磷酸二氢钾处理效果最佳。     

槲皮素单硫酸酯和5''''-氯-5''''-脱氧腺苷合用对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响

槲皮素(quercetin)是一种天然存在的具有多种药理作用的黄酮类化合物,广泛存在于植物界,化学名为3,5,7,3',4'-五羟基黄酮,已报道槲皮素及其衍生物具有多方面的心血管药理作用.腺苷及其类似物具有多种生物活性,包括舒张冠脉、减缓心率、抗血小板活性等作用.但两类药物合用对血小板的作用尚未见报道.本文用比浊法研究了槲皮素单硫酸酯和5'-氯-5'脱氧腺苷合用对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响.结果显示,槲皮素单硫酸酯和5'-氯-5'脱氧腺苷对凝血酶诱导的兔血小板聚集都有抑制作用;槲皮素单硫酸酯与5'-氯-5'脱氧腺苷联合用药,增强凝血酶诱导兔血小板聚集的抑制作用.结果提示,槲皮素单硫酸酯与5'-氯-5'脱氧腺苷在一定的浓度范围内具有协同抗血小板聚集的作用.     

重金属铬对体外培养猪精子活力及蛋白磷酸化水平的影响

为探究铬元素在猪精子体外获能培养过程中,对猪精子活力、蛋白磷酸化信号通路的影响,研究采取八头杜洛克猪新鲜精液,分别在体外获能培养液中添加不同浓度的6价铬离子(0、0.1、0.5、1、2、10、100μmol/mL)以及双丁酰环腺苷酸(dbcAMP)、异丁基黄嘌呤(IBMX)、PKA抑制剂(H-89)等cAMP-PKAs信号通路调节因子进行调控培养2h。利用精子活力计算机检测(CASA)、蛋白质免疫印迹(WB)技术,分析测定猪精子体外铬暴露获能培养过程中精子活力、蛋白磷酸化水平,并用相应试剂盒检测细胞中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)活性、腺苷-3′,5′-环化一磷酸(cAMP)及ATP水平。结果表明:铬离子对猪精子活力、蛋白磷酸化水平有抑制作用,且随铬离子浓度增加抑制作用增强。当铬浓度达到2μmol/mL时精子活力MOT(58.4%)显著低于获能培养组(73.6%)(P0.05);10μmol/mL铬处理明显抑制蛋白磷酸化水平,且细胞内GAPDH活性、cAMP及ATP水平显著降低(P0.05)。而10μmol/mL铬处理中分别添加葡萄糖(5.0μmol/mL)及dbcAMP(1.0 mmol/L)和IBMX(0.1 mmol/L),能缓解铬对蛋白酪氨酸磷酸化(PTP)、蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸化(P-PKAs)及GAPDH活性的抑制作用。结果提示铬可能是通过干扰糖代谢及cAMP/PKA信号通路影响猪精子活力及蛋白磷酸化水平。本研究首次探究了体外培养过程中铬离子对家畜精子活力的影响,并初步探究了其作用机理,为进一步研究铬离子引起繁殖毒性的分子机制及家畜繁育提供一定的理论基础。     

重组人磷脂酰肌醇3-激酶p110β催化亚基的原核表达

目的：表达人磷脂酰肌醇3－激酶p110β催化亚基。方法：将构建有人磷脂酰肌醇3－激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)p110β催化亚基cDNA的重组质粒，转化大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG进行诱导表达。用磷脂酰肌醇－4、5－二磷酸、[γ-^32P]ATP与重组PI 3－K p110β催化亚基一起保温的方法测定PI 3－K的活性；^32P标记的磷脂用氯仿和甲醇抽提、板薄层层析和放射自显影来分析。结果：SDS－PAGE显示表达出－110kD的新蛋白质分子，重组蛋白占菌体总蛋白的比例为15％，大多数重组蛋白以可溶性形成存在。wortmannin是PI3－K特异的抑制剂，wortmannin对重组PI 3－K p110β亚基有抑制作用，这种抑制作用呈剂量依赖关系（2.5-20nmol/L)。结论：重组蛋白是有活性的人PI3－Kp110β催化亚基。     

山楂生物膜磷脂组成的研究

本文用硅胶薄板进行单向层析,从山楂的不同组织和细胞器中分离出了7种膜磷脂:磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰已醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰丝氨酸(PS)磷脂酸(PA)和溶血磷脂酰胆碱(LPL).除定性分析外,对山楂不同组织和器官中膜磷脂的含量进行了测定比较。     

宁夏大枣中环磷酸腺苷的提取与定量检测

对宁夏3个品种大枣中的环磷酸腺苷进行了提取与定量检测分析。采用甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液超声提取大枣中的环磷酸腺苷。选用高效液相色谱-紫外检测器、Agilent-ZORBAX SB-C18色谱柱,以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相进行等度洗脱,在254 nm波长处对环磷酸腺苷进行定量检测。结果表明,环磷酸腺苷在浓度为1.0～100 mg/L范围内,与响应值呈线性关系,获得标准曲线方程,相关系数为0.999 9;环磷酸腺苷的平均回收率在82%～92%,RSD值在0.5%～2.4%。对采集的宁夏大枣样品进行检测,均得到理想的检测结果,表明本方法能高效和准确地检测红枣中的环磷酸腺苷。     

水杨酸浓度对膜荚黄芪生物量、总黄酮和多糖积累的影响

以长白山膜荚黄芪幼苗为试材,探讨不同浓度水杨酸对黄芪幼苗的生物量、总黄酮、多糖积累和自由基清除率的影响。结果表明,100μmol/L水杨酸对植株生物量基本无影响,而200、400μmol/L水杨酸对植株形成激素胁迫,抑制植株的生长和生物量的积累;总黄酮含量和自由基清除率随水杨酸浓度增加而提高,在400μmol/L水杨酸处理培养7d时达到最大值,分别为85.13μg/g和40.8%;多糖的积累有1个波峰,在200μmol/L水杨酸处理下达到峰值,为8.12 mg/g。     

白菜RAPD反应条件的优化

以芜菁、大白菜及其杂交 1代为试材 ,系统分析了 Mg Cl2 浓度、d NTP浓度、随机引物浓度、模板 DNA用量、Taq DNA聚合酶浓度以及不同来源扩增缓冲液对 RAPD反应的影响 ,建立了一套稳定的 RAPD反应体系。该体系反应体积为 2 0μL,Mg Cl2 浓度为 1 .5mmol/L ,d NTP浓度为 2 0 0μmol/L ,随机引物浓度为 0 .4μmol/L ,模板 DNA为 2 0 ng,TaqDNA聚合酶为 6.67μmol/( L· min)。在 8种热循环条件下 ,该体系具有稳定的重现性 ,其扩增程序为 :94℃ /1′→ 36℃ /2 0″→ 72℃ /1 0″预扩增 2循环 ;94℃ /1 0″→ 36℃ /1 5″→ 72℃ /70″扩增38循环 ;72℃ /4′延伸效果最好     

VE对犬卵母细胞体外成熟的影响

在基础培养液中分别添加浓度为0,50,100,200μmol/L的VE,研究不同浓度VE对成熟情况的影响。结果表明,体外培养48h后VE浓度为50μmol/L组GV期的比率显著高于100和200μmol/L组(P<0.05);100μmol/L组GVBD期的比率显著低于其它组(P<0.05);达到MI-MII期的比率各组之间差异不显著(P>0.05),但100μmol/L组MI-MII期的比率相对较高。体外培养72h后,VE浓度为200μmol/L组的GV期的比率显著高于对照组和100μmol/L组(P<0.05),与50μmol/L组之间差异不显著(P>0.05);达到GVBD和MI-MII期的比率各组之间均差异不显著(P>0.05)。因此,VE对犬卵母细胞的核成熟没有明显促进作用。