白芨中性杂多糖的分离纯化与结构分析

以白芨(Bletilla striata (Thunb.) Reichb.f.)块茎为材料,经热水抽提,乙醇沉淀,Sevag法脱蛋白,阴离子交换纤维素柱(DE-52)层析和凝胶柱(Sephadex G-100)层析,分离纯化得一白芨中性多糖.经高效凝胶渗透色谱(GPC)和凝胶柱层析(Sephadex G-100)鉴定为均一组分.GPC法测得其重均分子量约为99.658 ku.薄层层析、红外吸收光谱(FT-IR)、13C核磁共振谱(13C-NMR)和1H核磁共振谱(1H-NMR)分析该多糖为一中性杂多糖,由β-1,4-甘露糖(β-1,4-Man),β-1,4-葡萄糖(β-1,4-Glu)和α-1,6-葡萄糖(α-1,6-Glu)残基组成,三者的的摩尔比约为6.8∶3.2∶1.5.     

可德兰多糖的分离纯化和化学结构分析

用酸碱法从产碱杆菌突变株C125的发酵液中提取Curdlan粗多糖样品CD-1,经Sevage法脱蛋白、纤维素柱层析脱色后,用Sephadex G-100凝胶层析柱分离纯化得多糖CD-2.紫外分光法及Sephadex G-200凝胶柱层析法检测CD-2为均一多糖,Sephadex G-200柱层析测得CD-2的分子量为65300Da,完全酸水解后纸层析检测CD-2的单糖组成中仅有葡萄糖,分析CD-2的红外光谱、核磁共振谱得知CD-2多糖的化学结构是以β-(1,3)糖苷键连接而成的无分枝的葡聚糖.     

灰树花多糖的分离、纯化与理化性质

灰树花子实体用热水提取，乙醇沉淀，透析冻干得灰树花多糖粗品，再经Sevag法脱蛋白，DEAE－Sephadex A-25柱层析纯化得到4种多糖分别为PGF－1，PGF－2，PGF－3和PGF－4。4种多糖经纸层析，Sephadex G-200柱层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。结果表明都为单一均匀组分：PGF－1经纸层及气相色谱分析证实它是一种葡萄糖；凝胶渗透色谱测定其分子量为11万。红外光谱揭示PGF－1含β－型糖苷键。     

黑曲霉D226乳糖酶分离纯化研究

为从黑曲霉D2-26发酵液中得到单一的乳糖酶组分,以便研究其酶学性质。试验通过采用过滤、超滤、硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25脱盐、DEAE-纤维素-32离子强度梯度层析、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-纤维素-32 pH梯度层析等方法从发酵液中分离纯化乳糖酶,纯化酶液经PAGE电泳鉴定得到单一蛋白条带。为此建立了一套简单易行的黑曲霉D2-26乳糖酶分离纯化方法。     

酶法水解螺旋藻蛋白研究

[目的]研究木瓜蛋白酶对螺旋藻蛋白的水解作用。[方法]采用正交试验设计分析温度、酶浓度、pH值、水解时间对水解度的影响,利用葡聚糖凝胶柱Sephadex G-25层析测定螺旋藻多肽分子量。[结果]木瓜蛋白酶水解螺旋藻蛋白的最适宜工艺参数为:温度55℃,酶与底物比0.4%,时间3 h,pH值6.0。[结论]当水解度为82.6%时,2个螺旋藻多肽洗脱峰的分子量分别为2 992和231 Da。     

新疆芜菁多糖降血糖作用的研究

[目的]检测新疆芜菁多糖的组分结构与对血糖的作用.[方法]采用常规的水提法从芜菁中提取粗多糖,并用Sevag法对其进行脱蛋白,再通过回流、透析等步骤把粗多糖纯化获得芜菁精制多糖.用芜菁精制多糖进行小白鼠血糖实验.对芜菁精制多糖进行DEAE-52离子交换柱层析纯化,对第一个洗脱组分BRPS1再进行Sephadex G-200凝胶柱层析纯度鉴定.此外,用红外光谱法分析BRPS1,并且对离子交换柱层析的7种洗脱组分分别进行了GC-MS分析.[结果]当芜菁精制多糖剂量为400 mg/kg体重时,3 d后的受试小鼠血糖值下降差异显著(P<0.05);6和9 d后的血糖值下降差异极显著(分别是P<0.01和P<0.001);通过DEAE-52离子交换柱层析共分离出7种组分.对第一个洗脱组分BRPSl的Sephadex G-200凝胶柱层析的结果表明,BRPS1是单一的多糖组分;其红外图谱结果表明BRPS1具有多糖的一般结构.对7种洗脱组分的GC-MS分析表明芜菁精制多糖含有6种单糖.[结论]芜菁多糖具有显著的降血糖效果;作为芜菁多糖主要成分的BRPS1为单纯的多糖,具有多糖的一般结构.     

复方免疫增强剂中三种多糖的分离纯化初步研究

采用超声辅助提取法提取复方免疫增强剂中的多糖,以Sevag法除蛋白后分级醇沉得粗多糖PS1、PS2和PS3。粗多糖PS1、PS2和PS3上离子交换柱层析分离纯化,以0-2.0MnaC l溶液进行梯度洗脱得PS1A、PS2A和PS3A多糖组分,再经过Sephadex G-200凝胶柱层析分离得到三个主要多糖组分PS1A-Ⅰ、PS2A-Ⅱ和PS3A-Ⅲ。利用凝胶层析、纸层析及紫外分光光度法进行纯度鉴定,结果表明PS1A-Ⅰ、PS2A-Ⅱ和PS3A-Ⅲ为均一多糖。     

山药蛋白酶解液的分离纯化

以山药(Dioscorea opposite Thumb.)为原料,选取碱性蛋白酶酶解山药蛋白粗提物制备山药蛋白酶解液。分别采用纤维素DE-52阴离子交换层析和Sephadex G-50凝胶层析,对酶解制备的山药蛋白酶解液进行分离纯化。结果表明:经过纤维素DE-52阴离子交换层析,得到4个吸收峰,收集每个峰组分,其单位质量的还原能力分别为峰2(P2)>峰1(P1)>峰3(P3)>峰4(P4)。采用Sephadex G-50凝胶分别用蒸馏水和Tris-HCl缓冲液对P1和P2组分继续分离纯化,均能得到2个吸收峰(组分)。     

小麦高低分子量谷蛋白亚基分离纯化方法的研究

以普通小麦为试材,提取麦谷蛋白,分别利用两种不同型号的葡聚糖凝胶Sephadex G-50和Sephadex G-100对高低分子量麦谷蛋白进行层析分离纯化,并采用SDS-PAGE的方法检测分离效果,利用紫外分光光度计法测定各层析峰蛋白含量,计算蛋白回收率。结果表明,Sephadex G-50的蛋白回收率较高,且对低分子量谷蛋白亚基的纯化有一定效果,但不能实现高分子量谷蛋白亚基的有效分离纯化。Sephadex G-100能有效实现小麦高低分子量谷蛋白亚基的分离纯化,但与Sephadex G-50相比,蛋白回收率低。∶:     

霍山石斛多糖不同组分理化性质及免疫活性的比较研究

[目的]对比研究霍山石斛多糖不同组分的理化性质及对巨噬细胞的免疫调节作用。[方法]采用DEAE阴离子交换层析和Sephadex G-100凝胶色谱层析分离多糖,通过HPGPC、GC、GC-MS和ELISA分析多糖的理化性质和免疫活性,采用主成分分析比较多糖的免疫活性,并结合多元线性回归分析方法,定量分析多糖的构效关系。[结果]霍山石斛多糖包含DHPW-1、DHPW-2、DHPW-3、DHPW-4、DHPW-5、DHPW-6和DHPW-7 7种分子量和均一度各不相同的组分,它们是由葡萄糖、半乳糖和甘露糖以不同的摩尔比按1,4-D-Glcp、1,6-D-Glcp、T-D-Galp、1,4,6-D-Glcp和1,3,6-D-Manp的连接方式所组成,均能不同程度地促进巨噬细胞分泌NO、TNF-α和IL-1β,增强吞噬中性红的能力。[结论]霍山石斛多糖不同组分的理化性质和刺激巨噬细胞的免疫调节活性各不相同,不同连接方式的糖苷键含量和多糖的分子量对它们的免疫活性具有重要影响,其中DHPW-2与DHPW-4免疫调节活性较好,DHPW-7的活性最差。