FAS和HSL mRNA在猪背最长肌的表达及其与肌内脂肪含量的关系

采用100头肥育期苏太猪,屠宰取背最长肌样品.测定各样品肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量,并根据IMF含量将样品分成高、中、低3个组,每组取肌内脂肪含量位于中间的20个个体为研究对象,共计60个个体,各组IMF百分含量(%)分别为(6.00±1.14)、(9.46±0.94)和(13.77±2.12).采用RT-PCR方法测定各样品中脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)和激素敏感脂酶(hormone-sensitivelipase,HSL)mRNA水平,并分析其与肌内脂肪含量之间的相关性,以揭示FAS和HSL的表达与肌内脂肪沉积的关系.结果表明,FAS或HSL基因表达水平与肌内脂肪含量之间并无显著的相关(P＞0.05),FAS与HSLmRNA的比值与肌内脂肪含量之间存在着显著的正相关(R=0.464,P＜0.01,P=60).不同组别之间,随着肌内脂肪含量的增加,FAS与HSL比值有升高的趋势.推测FAS和HSL在猪背最长肌肌内脂肪的沉积中发挥着作用.     

拖拉机驾驶员颈部疲劳的肌电评价

为了了解拖拉机驾驶员颈部疲劳状况,该文在模拟拖拉机倒车作业的基础上,对驾驶员颈部胸锁乳突肌的表面肌电信号进行了测试,选取积分肌电值、平均功率频率、小波分解系数等特征量对肌电信号进行时域、频域以及时频域分析。结果表明：拖拉机驾驶员颈部疲劳后胸锁乳突肌的积分肌电值、平均功率频率、小波分解系数都降低,疲劳前后各特征量存在显著性差异（P＜0.05）,这些特征量都可以有效评价拖拉机驾驶员的颈部疲劳。     

重组生长激素对猪背最长肌及半腱肌中肌肉生长相关基因表达的影响

16头长白×大约克F1代去势公猪,随机分成实验组和对照组,实验组每天注射重组猪生长激素rpGH,每头4mg/d),对照组注射等体积生理盐水,28 d后采样.用RT-PCR方法,以18S rRNA作内标,定量分析背最长肌和半腱肌中肌肉生长抑制素(myostatin)、生肌调节因子(myogenm)、肌源性决定因子(myoD)及钙激活蛋白酶3(calpain 3)、过氧化物增殖体激活物受体γ的共激活物-1(PGC-1)mRNA相对丰度.结果显示(1)实验组平均日增重提高26.1%(P＜0.05);(2)背最长肌和半腱肌myostatin和myogeninmRNA表达无明显变化;(3)半腱肌myoD mRNA丰度增加82%(P＜0.05),calpain3mRNA丰度增加93%(P<0.01);(4)背最长肌myoDmRNA丰度增加79%(P=0.14),calpain 3mRNA丰度增加23%(P=0.11),半腱肌中PGC-1 mRNA的表达有明显下调的趋势(P=0.16).重组猪生长激素能上调肌肉myoD和calpain3的表达,但对背最长肌和半腱肌的调节程度有差别,提示这些基因可能在生长激素(GH)调节骨骼肌生长的途径中起作用.     

猪肌内前体脂肪细胞的体外培养

本研究建立了猪肌内前体脂肪细胞的体外培养模型,以期为更深入研究猪肌内脂肪代谢提供新的实验方法。实验采集出生5d仔猪的背最长肌组织,Ⅱ型胶原酶消化2h后400目筛网过滤,然后1500r/min离心,沉淀用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基(完全培养基)重悬后差速贴壁2h,弃去原有培养基,加入新的含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基(完全培养基)进行培养。细胞经传代且完全融合48h后,在完全培养基中添加0.5mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX),1μmol/L地塞米松(DEX),10mg/L胰岛素(INS)进行诱导培养48h,再换以含10mg/L胰岛素的完全培养基培养48h,最后换完全培养基继续培养,直至90%的细胞出现脂滴。培养结果:细胞贴壁生长,呈短梭状或棱形,经诱导培养后细胞充脂率高。经形态学观察、生长曲线及油红O脂肪染色法鉴定,证明是肌内前体脂肪细胞。普通PCR及实时荧光定量PCR均检测到了脂联素基因的表达。本研究通过差速贴壁法成功培养了猪肌内前体脂肪细胞,并通过诱导培养重现了其分化、成熟的全过程。     

用鱼肌核酸指示水体污染的初步研究

选择了４种家鱼作指示生物，用紫外分光光度法测定其白肌中ＲＮＡ和ＤＮＡ的含量。结果表明：同种鱼，污染区的ＲＮＡ含量显著低于对照区，白鲢和鳊鱼白肌中ＲＮＡ／ＤＮＡ低于对照区；不同种的鱼，污染区鱼肌核酸比对照区下降的程度有鳊鱼〉白链〉鲫鱼和鲤鱼的趋势。鱼肌核酸下降同水体重金属污染有一定联系，ＲＮＡ是比ＲＮＡ／ＤＮＡ更适合的指标，鳊鱼和白链是比鲫鱼和鲤鱼更敏感的指示生物。     

成年鲁西牛肌内前脂肪细胞的分离培养

建立牛肌内前脂肪细胞体外培养方法，旨在更深入地研究组成肌肉内脂肪组织的肌内前脂肪细胞的增殖分化特性及其影响因素。选取来自成年育肥鲁西黄牛第6与第7肋骨间的肌肉内脂肪组织，利用Ⅰ型胶原酶消化法分离获得牛肌内前脂肪细胞。培养出的细胞成分均一，增殖旺盛，分化率高，经形态学动态变化观察、生长曲线、油红O脂肪染色提取法及对胰岛素和地塞米松反应的测定，证明是功能活跃的前脂肪细胞，并在体外重现了其增殖分化过程，同时经染色体核型分析证明体外培养的细胞倍性正常，可以用于后续研究。本试验成功分离得到了成年育肥牛肌内前脂肪细胞，这为下一步研究肌内脂肪的沉积机制，改善牛肉品质奠定了基础。     

肌原纤维蛋白浓度对风味物质吸附能力的影响

为探究肌原纤维蛋白浓度对风味物质的作用机制,本研究建立了肌原纤维蛋白和风味物质作用的复合体系,研究了不同浓度肌原纤维蛋白对17种典型风味化合物吸附能力的影响。结果表明,风味化合物的种类对肌原纤维蛋白的吸附能力有显著影响,一定浓度的蛋白对醛、酮、醇、酯的吸附作用强弱依次为:醛类酯类酮类醇类。蛋白浓度由2 mg·m L~(-1)增加至4 mg·m L~(-1)时,对所有风味化合物吸附作用显著增强;由4 mg·m L~(-1)增加至6 mg·m L~(-1)时,蛋白对2-甲基丁醛、戊醛、己醛、丁酸乙酯吸附作用明显增强,而当蛋白浓度由6 mg·m L~(-1)增加至8 mg·m L~(-1)时,肌原纤维蛋白对所有风味化合物的吸附作用都明显减弱。蛋白对风味化合物的吸附能力的增加可能是由于较高的蛋白质浓度改变了风味化合物在气、液两相间的分配系数;然而过高浓度的蛋白对风味物质吸附能力的削弱则是蛋白质之间相互作用增强或表面张力降低的结果。本研究结果为肉类风味感知研究过程中确定蛋白浓度、挥发性风味化合物种类等关键参数和改善蛋白类食品的风味提供了参考。     

白羽王鸽肌生成抑制因子基因的多态性与组织表达

肌生成抑制因子在抑制成肌细胞的增殖与分化中起着重要作用。本文采用PCR-SSCP与实时定量RT-PCR方法分析白羽王鸽肌生成抑制因子（MSTN基因）的多态性和在脑、肝脏、胸肌组织中的mRNA表达水平及其与体重的相关性。结果表明在白羽王鸽MSTN基因的外显子1和外显子3区域分别检测到一个多态位点,且均属于沉默突变;肝脏、肌肉和脑组织中MSTN基因的表达量依次为肝脏〉脑〉肌肉,且差异极显著。而对不同发育阶段的乳鸽研究发现,随着乳鸽日龄（1～25d）的增长,MSTN基因在各组织中的表达量无明显的线性变化规律。该结果为进一步确定MSTN基因的作用机理提供了新的实验依据。     

没食子酸对海鳗肌原纤维蛋白氧化及凝胶特性的影响

为研究没食子酸(GA)对海鳗肌原纤维蛋白(MP)氧化抑制作用和凝胶特性的影响,采用羟自由基氧化体系及不同质量分数GA对海鳗MP进行处理,考察不同浓度GA对海鳗MP氧化抑制作用,采用扫描电镜技术结合凝胶特性分析GA对MP的交联作用。结果表明,氧化使海鳗MP羰基含量、表面疏水性显著上升(P<0.05),总巯基含量、凝胶持水性显著降低(P<0.05)。不同浓度GA对MP氧化均有抑制作用,质量分数分别为0.10%、0.15%的GA抑制效果最佳,且凝胶持水性显著增强(P<0.05)。圆二色谱结果表明,质量分数分别为0.10%、0.15%的GA可使MP的α-螺旋、β-折叠含量有所增加。扫描电镜结果显示,添加质量分数为0.15%的GA后形成的MP凝胶结构更加致密、光滑。综上,质量分数为0.15%的GA能有效抑制海鳗MP氧化,并改善MP凝胶持水性和微观结构。本研究为GA在水产品加工及贮藏过程中的应用提供了理论依据和数据支撑。     

鸡肉在成熟过程中肌原纤维蛋白的降解机制研究

为了探讨肉在成熟过程中肌原纤维蛋白的降解机制,五只肉鸡分别宰杀后,迅速取出胸肉约3 g为0 d样品,其余肉样剪碎后随机分成六组,一组作为对照,另5组分别用30 mmol/L EGTA、20 mmol/L CaCl2、酶复合抑制剂、100μmol/L细胞凋亡酶3抑制剂（DEVD-CHO）、20 mmol/L CaCl2和酶复合抑制剂处理,在4℃成熟1、3、7 d后取样。通过SDS-PAGE和蛋白质印迹分析测定了骨骼肌中和肉嫩度高度相关的拌肌球蛋白（titin）、伴肌动蛋白（nebulin）、肌间线蛋白（desmin）、肌钙蛋白T（troponin-T）的降解变化。结果显示蛋白水解酶复合抑制剂和DEVD-CHO抑制了蛋白的降解,单独的钙离子加速蛋白降解。这表明肉的成熟是内源酶的作用,钙离子很可能通过激活钙激活酶发挥作用,另外细胞凋亡酶3也很可能参与了肉的成熟。     

肌抑素Myostatin突变体Pro区域的克隆、表达和活性

为了检测肌抑素Myostatin突变体的Pro区域生化活性，设计引物从肌抑素突变的双肌牛皮尔蒙特(Piedmontese)的基因组中扩增得到肌抑素突变体的Pro区域，并分别将其亚克隆到pMD18-T载体上。利用基因重组技术，构建原核表达质粒。pET30a( )／Myostatin-Pro(简称pEMPro)，在大肠杆菌(Eschetichia coli)中分泌表达肌抑素突变体Pro区域，采用亲和层析法纯化表达产物，并将其共孵育于体外培养的绵羊的骨骼肌细胞。证实肌抑素的突变体Pro区蛋白具有促进肌肉细胞增殖的功能。     

限制性酶解改性鲢鱼肌原纤维蛋白功能性质的研究

为了提高肌原纤维蛋白的功能,采用不同酶(胰蛋白酶、中性蛋白酶及复合酶)对鲢鱼肌原纤维蛋白进行限制性酶解改性,在酶解过程中,通过对水解度、蛋白分子量大小、肌原纤维形态学变化及功能性质进行测定与观察,探究其功能性质随改性程度的动态变化规律。结果表明,随着酶解的进行,鲢鱼肌原纤维长度逐渐变短,蛋白的溶解性逐渐增加,酶解80 min时,肌原纤维主要以1~3个肌节形式存在,3组蛋白质的溶解性分别达到61.2%、36.9%和58.4%;3组酶解蛋白的乳化性和起泡性随反应时间的增加均呈先增后减的趋势,其中复合蛋白酶酶解40 min时乳化活性及起泡性最大,分别达到65.5m2·g-1和110%,胰蛋白酶改性20min时蛋白乳化稳定性最好,可达46.6 min,远大于未酶解蛋白的14.7 min。分子量分布及SDS-PAGE图谱显示,蛋白平均分子量均为20~30 k Da,水解度均低于5%。综上,酶的选择对溶解性的改善至关重要,而乳化性及起泡性的改善不仅需要对酶进行筛选,还需对水解度进行严格限制,保持酶解后蛋白具有较大的分子量,避免酶解过度。本研究结果为蛋白质乳化性和起泡性的改性研究提供了参考。     

羟自由基氧化对牦牛肉肌原纤维蛋白生化特性的影响

为探究羟自由基(·OH)氧化处理对宰后牦牛肉成熟过程中肌原纤维蛋白氧化特性的影响,以经不同浓度(0、0.5、1、5、10、20 mmol·L^-1)羟自由基氧化体系氧化不同时间(0、0.5、1、12、24、48 h)的牦牛肉为研究对象,以未经处理的牦牛肉为空白对照,测定不同浓度不同氧化时间下肉样肌原纤维蛋白的羰基含量、巯基含量、二硫键含量、表面疏水性、Ca/K-ATPase活性等指标的变化规律。结果表明,随着H₂O₂浓度的增加及氧化时间的延长,不同处理组间牦牛肉肌原纤维蛋白均表现出不同程度的氧化水平,其中羰基含量、二硫键含量和Ca-ATPase活性均呈显著增加趋势(P<0.01),而表面疏水性呈先上升后下降的趋势,巯基含量和K-ATPase活性则显著降低(P<0.01)。H₂O₂浓度增加至20 mmol·L^-1时,与空白对照组相比,羟自由基处理组羰基含量升高46.03%,而巯基含量下降79.79%。综上,羟自由基促使宰后牦牛肉成熟过程中肌原纤维蛋白发生了显著氧化,增加了蛋白的氧化程度。本研究结果为牦牛肉生产加工过程中蛋白氧化控制提供了一定的参考。     

明胶涂膜保持猪背最长肌冷藏期间新鲜度

与传统的包装材料相比,冷鲜肉的明胶涂膜处理具有众多优势,这也决定其具有广阔的发展前景。为研究明胶涂膜处理对生鲜肉冷藏期间氧化稳定性和新鲜度的影响。该文以猪背最长肌为材料,研究其经过不同浓度(0%、10%、20%)明胶涂膜处理后冷藏期间的加压失水率、脂肪氧化、蛋白质氧化、血红素铁、挥发性盐基氮以及肉色的变化情况。结果表明:猪背最长肌在4℃条件下冷藏第3、5和7 d时,明胶涂膜处理组的硫代巴比妥酸反应值、蛋白质羰基、血红素铁质量分数、挥发性盐基氮值、红度值以及高铁肌红蛋白质量分数分别与对照组比较,结果均存在显著性差异(P0.05)。此外,在冷藏时间相同的条件下,10%与20%明胶涂膜处理组之间均差异不显著(P0.05)。试验证实,明胶涂膜处理有益于提高冷藏期间肉品的氧化稳定性,维系理想的肉品色泽及延长其货架期。     

添加剂对秘鲁鱿鱼肌原纤维蛋白热诱导凝胶特性的影响

为探讨添加剂及其添加量对秘鲁鱿鱼肌原纤维蛋白热诱导凝胶特性的影响,以秘鲁鱿鱼为原料,在单因素试验基础上选择4种添加剂(壳聚糖、转谷氨酰胺酶、卡拉胶、海藻酸钠),通过响应面法建立肌原纤维蛋白凝胶硬度和添加剂用量之间的响应模型。结果表明,4种添加剂的最适添加量分别为:壳聚糖0.40%、转谷氨酰胺酶0.50%、卡拉胶0.90%、海藻酸钠0.25%,在此条件下秘鲁鱿鱼肌原纤维蛋白热诱导凝胶硬度达最大值859.85 g,保水性为96.34%。此复合添加剂能显著改善秘鲁鱿鱼肌原纤维蛋白的凝胶特性。研究结果为生产高品质的秘鲁鱿鱼凝胶制品提供了理论依据。     

面向从江香猪选育的肌内脂肪活体超声无损测定

为探索从江香猪肌内脂肪含量的超声活体预测方法,该文选取110头从江香猪育肥猪开展活体测定,以超声图像为研究对象,利用Matlab R2015b软件提取灰度-梯度共生矩阵(gray gradient cooccurrence matrix,GGCM)及4个角度灰度共生矩阵(gray level cooccurrence matrix,GLCM)图像纹理特征参数。通过逐步回归分析法构建肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量预测模型,再将此模型应用于另外42头从江香猪,验证模型准确性。逐步回归分析结果表明,背膘厚、灰度平均和梯度熵3个参数指标达到显著水平(P0.05),回归预测模型决定系数R2=0.369。线性回归及相关分析得出,估测值与实测值间RMSE为0.686,皮尔逊积矩相关系数(pearson correlation coefficients)和斯皮尔曼相关系数(spearman correlation coefficients)分别为0.592和0.640(P0.001)。该研究所构建的拟合回归模型可应用于从江香猪肌内脂肪活体预测,为后期高肌内脂肪含量从江香猪的选育提供更为便捷有效的手段。     

猪前体脂肪细胞与肌卫星细胞体外联合培养

利用差速贴壁法分别纯化前体脂肪细胞与肌卫星细胞,按1∶10的浓度比接种混合培养。以单独两类细胞培养作对照,采用油红O染色和Desmin免疫组化染色鉴定,通过形态学观察和MTT比色绘制生长曲线研究细胞生长规律。结果表明,Desmin免疫组化染色观察肌细胞阳性率达97%以上,油红O染色计数诱导分化细胞比率大于60%;形态学观察发现,联合培养细胞接触汇合前形态呈梭形,接触后不规则重叠交织生长;充脂细胞呈现较晚,且数量稀少;HE染色可见多核细胞融合成肌管样结构;测定2～9d细胞生长曲线显示,联合细胞组增殖比率大于对照组,经历2～3d潜伏期、3～7d指数生长期后,并未与对照组同步进入平台期,而呈持续缓慢上升趋势。实验初步实现了体外猪前体脂肪细胞与肌卫星细胞的直接联合培养,并显示其与对照组生长特性存在差异。     

microRNA-148a通过锚定ROCK1促进肌原细胞分化

microRNA(miR)是一类长度约18~22nt的进化保守的小RNA,可以通过结合到许多基因的3’UTR调控基因的转录后表达。研究表明,许多miR是骨骼肌发育的关键调节子。最近,中国农业科学院和华中     

超高压处理保持猪背最长肌冷藏期间肉色稳定性

与传统的处理方法相比,冷鲜肉的超高压处理有许多优点,应用前景广阔。为了研究超高压处理对生鲜肉冷藏期间肉色稳定性的影响,该文以猪背最长肌为材料,探究其超高压处理后冷藏期间肉品色泽和高铁肌红蛋白还原酶活性之间的关系。结果表明:温度4℃、压力150~200 MPa、保压时间10 min有助于提高猪背最长肌冷藏期间的肉色红度和高铁肌红蛋白还原酶活性(125.0~201.5 nmol/(min·g))。试验证实,适当的压力处理能够激活高铁肌红蛋白还原酶活性,使肌红蛋白保持还原状态,从而有益于维系冷藏期间肉品色泽的稳定性。     

静电场辅助冻结-解冻对牛肉肌原纤维蛋白二级结构的影响

为探究低压静电场(LVEF)辅助冻结-解冻肉品的可操作性和工艺条件,本试验研究了静电场中不同距离冻结-解冻对牛肉肌原纤维蛋白(MP)二级结构稳定性的影响,采用衰减全反射傅里叶变换红外光谱(ATR-FTIR)技术及自动去卷积、曲线拟合等计算分析方法,检测分析了新鲜牛肉组、自然冻结-解冻组、静电场中不同距离(15、30、45、60 cm)辅助冻结-解冻牛肉MP的红外光谱图变化及二级结构变性程度。结果表明,LVEF30F处理组牛肉的MP二级结构与新鲜牛肉最接近,其MP中α-螺旋含量为41.87%,显著高于自然冻结组(P0.05)。自然冻结组牛肉MP的无规则卷曲含量为26.87%,LVEF30F组蛋白结构的相对含量为12.82%,显著低于自然冻结组(P0.05),静电场辅助冻结组牛肉MP的稳定性优于自然冻结解冻,其中距离静电场发生板30 cm处的场强效果最好。本研究为开发新型冻结解冻技术及装备提供了一定的理论依据。