实验感染肝片吸虫山羊的病理生理学.血液生理生化指标及抗体动态

给山羊分别实验感染肝片吸虫囊蚴 2 0 0、50 0个 /只 ,感染后每周颈静脉采血 1次 ,测定血液生理生化指标和抗体动态的变化。结果表明 ,山羊实验感染肝片吸虫后 ,血液中 RBC、Hb明显下降 ;WBC和嗜酸性粒细胞数显著增加 ;血清中谷 -草转氨酶 ( AST)从第 2周开始上升 ,第 8周和第 9周达到峰值 ;γ-谷氨酰转肽酶( GGT)于感染后第 7周和第 8周开始升高 ,第 1 0周和第 1 1周达高峰 ;以 ELISA检测抗体表明 ,2个试验组山羊感染后血清中 Ig G分别在第 9周和第 6周达峰值 ,随后均稍有下降 ,一直呈波动趋势 ,但在整个试验期内 ,一直高于对照组 ( P<0 .0 5或 P<0 .0 1 )。分析认为 ,山羊感染肝片吸虫后表现的贫血是正细胞正色素型 ,伴有低白蛋白性 ,肝脏损伤明显 ,体液免疫反应增强     

肝片吸虫感染对山羊机体自由基代谢影响的研究

实验选择9只健康、6－10月龄雄性白山羊，经粪便学检查和Dot-ELISA检测，确认无肝片吸虫感染，随机分成感染组（n=5)和对照组（n=4)，试验组每只1次口服接种150个肝片吸虫囊蚴，每周定时从颈静脉采集感染前（0周）和感染后15周血液1次分离血清。测定血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px)活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化物酶（CAT）活性、丙二醛（MDA）和一氧化氮含量的变化，结果表明肝片吸虫感染后血清中GSH－Px活性除第8周试验组显著高于对照组，其他各周无显著差异；在整个实验期间，试验组山羊血清中SOD活性在1－5周呈波动状，以后两组基本处于同一水平；试验组山羊血清CAT活性在感染后第3周显著低于对照组，第6－15周时，试验组始终高于对照组，但各周差异均不显著；试验组山羊血清中MDA含量在整个实验期间始终呈波动状，而在第8、9周试验组显著高于对照组，中周与对照组相比无显著差异；感染后试验组血清中NO开始下降，并且显著低于对照组，至第3－6周时试验组显著高于或低于对照组，第6－15周，试验组一直高于对照组，并在第7、10周时显著地高于对照组。提示山羊感染肝片吸虫后，机体发生多种功能的改变，机体的自由基产生与清除处于相互对抗之中，机体的自由基代谢参与了肝片吸虫病的发展过程。     

一氧化氮在山羊感染肝片吸虫过程中的作用

山羊人工感染肝片吸虫后,用硝酸还原酶法检测血清一氧化氮(NO)含量,感染组山羊(n=5)在羊感染后第1周明显低于对照组山羊(n=4),第2～6周或高或低呈波动趋势,自第6周后明显高于对照组,其中第7～8周达高峰(93.73±17.233μmol/L),第7周P＜0.01,第8、10周P＜0.05;用间接ELISA最早在感染后第2周就可检出IgG抗体,并从第4周起保持高水平,第8～9周达最高峰.血清中NO含量与IgG水平的相关系数r=0.511(P＜0.05,差异显著),而对照组的NO与IgG的相关系数r=0.25(差异不显著);感染山羊在整个试验期间嗜酸性粒细胞(EOS)明显升高,差异明显,其中第8周达峰值(P＜0.01).本试验结果表明NO、IgG和EOS在山羊感染肝片吸虫过程中的变化趋势基本一致,呈正相关,且与虫体在宿主体内的移行、发育密切关联,显示NO、IgG和EOS共同参与宿主抗肝片吸虫感染的作用.     

实验感染肝片吸虫山羊和大鼠血清花生四烯酸代谢物的变化研究

实验一选择9只健康、6-10月龄雄性白山羊，经粪便学检查和Dot-ELISA检测，确认无肝片吸虫感染，随机分成感染组（n=5)和对照组（n=4)，试验组每只一次口服接种150个肝片吸虫囊蚴，每周定时从颈静脉采集感染前（0周）和感染后23周山羊血液一次，分离血浆，实验二将60只大鼠随机分成感染组（n=30)和对照组（n=30)，感染组大鼠一次口服25个囊蚴，对照组不感染，于感染前（0周）和感染后（1，3，5，7，9周）采集血样，分别测定试验组和对照组羊和鼠花生四烯酸代谢物6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）和血栓素B2（TXB2）的变化。结果表明肝片吸虫感染后，山羊血浆中TXB2水平变化，在1-3周与对照组相比无显著差异，从第5周开始到实验结束，试验组血浆中TXB2水平均显著或极显著地高于对照组，大鼠血栓素水平在感染后前5周逐步下降，以后急剧上升，至实验结束时显著高于对照组；而整个实验期间，两种动物血浆中6-keto-PGF1α水平变化不显著，提示肝片吸虫感染后，机体发生多种功能的改变，花生四烯酸代谢物参与了肝片吸虫病的发展过程。     

实验感染肝片吸虫山羊的病理生理学——Ⅲ.细胞因子水平的变化

试验选择6只健康白山羊（经粪便学检查和Dot-ELISA检测，确认无肝片吸虫感染）随机分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组，其中Ⅰ、Ⅱ组山羊每只分别1次口服接种200、500个肝片吸虫囊蚴，Ⅲ组作为不感染对照组，每周颈静脉采血1次，连续11周，检测肝片吸虫感染后山羊血清中IL-2、TNF-α水平的变化和外周血淋巴细胞分泌IL-2的能力。结果表明，山羊试验感染肝片吸虫后，Ⅰ组山羊血清IL-2水平在感染后有所下降，而Ⅱ组山羊血清IL-2水平在感染后有所升高；感染不同剂量肝片吸虫的山羊血清TNF-α水平和淋巴细胞IL-2分泌水平均有不同程度的升高，在感染后第1周淋巴细胞就有反应，并且对非特异性刺激原和特异性刺激原的应答都有显著升高。这一结果提示，TNF-α可能参与肝片吸虫对肝的损伤过程，肝片吸虫感染剂量对宿主的IL-2含量影响较大，同时IL-2在宿主防御免疫中有重要作用。     

一氧化氮（NO）在山羊感染肝片吸虫过程中作用

8～12月龄雄性山羊(n=5)人工感染肝片吸虫后,每周定时颈静脉采血1次,用硝酸还原酶法检测血清中一氧化氮(NO)的动态变化,并观察了NO与IgG抗体、嗜酸性粒细胞(EOS)之间的相关性.结果,山羊在感染后第1周,NO含量明显低于对照组,第2～6周或高或低呈波动趋势,自第6周后明显高于对照组,其中第7～8周达高峰,即(93.73±17.233)μmol/L,第7周与对照组相比P<0.01,第8、10周P<0.05;IgG抗体用间接ELISA最早在感染后第2周就可检出,并从第4周起保持高水平,第8～9周达到最高峰,血清中NO含量与IgG水平的相关系数为r＝0.511(P<0.05),而对照组的NO与IgG相关系数为r＝0.25(P>0.05);感染山羊在整个试验期间的EOS明显升高,其中第8周达峰值(P<0.01).本试验结果表明,NO、IgG和EOS在山羊感染肝片吸虫过程中的变化趋势基本一致并呈正相关,且与虫体在宿主体内的移行、发育密切关联,显示NO、IgG和EOS共同参与宿主抗肝片吸虫感染的作用.     

Closantel缓释剂对实验感染肝片吸虫山羊机体自由基影响的研究

选用5只实验感染肝片吸虫山羊研究Closantel缓释剂对机体抗氧化功能的影响，实验用山羊每只一次性口服肝片吸虫囊蚴150个，感染后第15周随机将山羊分成对照组（n=2）和驱虫组（n=3），驱虫组每羊口服两颗Closantel缓释剂，每周定时采集颈静脉血液，检测血清抗氧化酶的变化，观察服用Closantel缓释剂对其的影响。结果表明投药后山羊血清中GSH－Px、CAT均有不同程度的升高，SOD变化不显著，而脂质过氧化产物MDA含量则下降，提示Closantel的缓释剂型对实验感染肝片吸虫山羊机体的抗氧化产生了影响，对机体有一定保护作用。     

实验感染肝片吸虫山羊血液T、B淋巴细胞比例及激素水平变化

为了深入了解动物感染肝片吸虫后免疫细胞和内分泌活动的变化，将6只健康山羊均分为感染Ⅰ、Ⅱ组及对照组。Ⅰ、Ⅱ组分别一次性口服感染肝片吸虫囊蚴200、500个／只，试验期17周，每周定时采血，测定血浆T、B淋巴细胞比例、皮质醇、胰岛素、甲状腺激素（T3、T4）等。结果表明，Ⅰ、Ⅱ组山羊T淋巴细胞（％）分别从感染后4、6周开始低于或显著低于对照组，直至17周；而淋巴细胞（％）变化与之相反。Ⅰ、Ⅱ组山羊血浆皮质醇变化较大，总体水平高于对照组；T3、T4水平从第4周开始逐渐低于对照组，且在极低的水平上变动；Ⅰ、Ⅱ组胰岛素水平与对照组相近。揭示山羊急性感染肝片吸虫后，内分泌活动紊乱，体内细胞免疫反应抑制，而体液免疫反应增加，表现出山羊对肝片吸虫感染的耐受力和抵抗力较弱的特点。     

应用肝片吸虫ES抗原检测实验感染山羊IgG的动态水平

用肝片吸虫排泄分泌抗原（ＥＳＡg）的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测人工感染肝 吸虫的山羊血清中特异性ＩgＧ抗体动态变化。ＥＳＡg用量为１３．８ug/孔，抗体稀释１ ０００倍，二抗１：２０００稀释（３．５ug/孔），ＨＲＰ标记的葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ＊）工作浓度为１：４０。检测结果表明，２组实验山羊（第１组每只羊口服２００ 个 囊蚴，第２组每只羊口服５００个囊蚴）在感染后第３周血清中的持异ＩgＧ即开始升高最     

应用肝片吸虫ES抗原检测实验感染山羊IgG的动态水平

用肝片吸虫排泄分泌抗原 ( ESA g)的酶联免疫吸附试验 ( ELISA)检测人工感染肝片吸虫的山羊血清中特异性 Ig G抗体动态变化。ESAg用量为 13.8μg/孔 ,抗体稀释 10 0 0倍 ,二抗 1∶ 2 0 0 0稀释 ( 3.5μg/孔 ) ,HRP标记的葡萄球菌 A蛋白 ( SPA* )工作浓度为 1∶ 4 0。检测结果表明 ,2组实验山羊 (第 1组每只羊口服2 0 0个囊蚴 ,第 2组每只羊口服 50 0个囊蚴 )在感染后第 3周血清中的特异 Ig G即开始升高 ,呈现动态变化趋势 ;第 2组于第 6周 ( 42 d) Ig G水平升到高峰 ,随后稍有下降 ,第 1组于第 9周 ( 6 3d) Ig G水平升到最高峰 ,随后又稍有下降 ,一直呈波动趋势 ;在试验的 3～ 17周期间 ,总体上虽第 2组抗体水平比第 1组高 ,统计分析无显著差异 ( P >0 .0 5) ,但均比对照组保持较高的水平 ,有显著差异 ( P <0 .0 5或 P <0 .0 1) ,表明山羊在肝片吸虫入侵后 ,很快产生了高水平的体液免疫 ,而 Ig G的波动可能与虫体的移行有关 ,与虫卵数量则无关。