ELISA检测鸡传染性囊病抗体方法的研究及应用Ⅲ．生产鸡群IBD抗体现状和免疫计划的改进

ＥＬＩＳＡ检测鸡传染性囊病抗体方法的研究及应用Ⅲ．生产鸡群ＩＢＤ抗体现状和免疫计划的改进张晨生，梁明珍（北京市兽医实验诊断所，１００１０１）傅先强，何桂华（北京市种禽公司）王世铎，周桂兰（北京市畜牧兽医总站）本文作者采用ＥＬＩＳＡ方法对北京１７群“京...     

ELISA检测鸡传染性囊病抗体方法的研究及应用Ⅱ．北京白鸡IBD抗体消长规律和保护滴度分析

ＥＬＩＳＡ检测鸡传染性囊病抗体方法的研究及应用Ⅱ．北京白鸡ＩＢＤ抗体消长规律和保护滴度分析张晨生，杨崴崴，侯学苏（北京市兽医实验诊断所，１００ｌ０ｌ）范书曦，张方亮（北京市农林科学院畜牧兽医研究所）材料和方法一、材料（一）病毒和疫苗：ＩＢＤＶ一ＢＪ８...     

鸡传染性法氏囊病血清抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立可检测鸡传染性法氏囊病血清抗体的间接ELISA检测方法,本研究经RT-PCR扩增IBDV VP2（1nt-708nt）基因片段,并应用pET28a载体进行原核表达,亲和层析纯化重组蛋白作为包被抗原,建立检测IBDV血清抗体的间接ELISA方法。应用所建方法和IDEXX试剂盒,对采自不同地区的156份鸡血清样品进行平行检测和比较。结果表明,RT-PCR扩增获得708bp的VP2基因片段;含重组表达质粒pET28a-VP2的大肠杆菌BL21经IPTG诱导后,表达了约27kDa的VP2重组蛋白,表达量约占菌体蛋白的30.1%;建立的间接ELISA检测方法与IDEXX试剂盒比较,其特异性、敏感性和符合率分别达到90.24%、95.65%和94.23%。由此可见,本研究所建立的间接ELISA方法敏感、特异,适用于IBDV血清抗体的检测。     

鸡传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的血清学方法,本试验以IBV为检测抗原,建立了一种检测IBV抗体的间接ELISA方法,并对各种检测条件进行了优化.研究结果显示,抗原的最佳包被浓度为19.2 μg/mL,最佳包被条件为37 ℃ 1 h后4 ℃过夜;血清的最佳稀释度为1:800,37 ℃孵育60 min;酶标二抗稀释度为1:7 000,37 ℃孵育60 min;底物显色为37 ℃避光作用10 min.经特异性、重复性、敏感性试验证明,该方法与鸡常见病原的阳性血清均无交叉反应,重复性较好及血清稀释至1:12 800时仍可检测到IBV抗体.结果表明,本试验所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性.     

检测鸡慢性呼吸道病抗体ELISA方法的建立

用败血支原体（ＭＧ）Ａ５９６９株制备ＥＬＩＳＡ抗原,与抗鸡ＩＧ单抗ＩＢ７酶结合物建立了检测鸡血清抗体水平的间接ＥＬＩＳＡ方法,交叉试验、阻断试验、重复性试验等表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高。确立了将鸡血清６４倍稀释监测ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）的回收方程ｙ＝１．３８３＋０．２２４ｘ,可用于定量测定,血凝抑制试验（ＨＩ）与ＥＬＩＳＡ比较试验表明,ＥＬＩＳＡ法比ＨＩ试验敏感性高４倍以上。     

应用鸡传染性囊病蛋黄抗体治疗鸭传染性囊病

传染性囊病在鸡群中常有发生,而在其它禽种则极少见到。1994年8月在我市兽医临诊上首次发现一起鸭传染性囊病病例,现将有关情况简述如下。 一、发病情况及临诊症状 本市海兴县丁村乡某养鸭户饲养的1000只鸭群中,于36日龄时突然     

鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体的间接ELISA检测方法,应用原核表达的IBDV VP2蛋白作为包被抗原,经方阵试验确定间接ELISA试验的最佳反应条件：包被抗原的浓度为8 μg/mL,标准阴、阳性血清的稀释度为1:400,封闭液选用10 %马血清,酶标抗体最佳稀释倍数为1:15000,最佳抗原稀释液为0.01 M PBS(PH 7.2);抗原最佳包被条件为4 ℃过夜,待检血清和酶标二抗反应条件为37 ℃ 60 min,底物作用时间为15 min。待检血清的OD450nm≥0.288判为阳性,反之判为阴性。特异性试验、敏感性试验和重复性试验结果显示,该方法的特异性好、敏感高、重复性好。用建立的间接ELISA方法与商品化IDEXX-ELISA试剂盒对临床血清样品进行检测,符合率为93.5 %。该方法的建立为检测IBDV抗体提供了一种安全、特异、敏感、方便经济的检测方法,为鸡传染性法氏囊病免疫监测和预防控制提供了科学的技术手段。     

应用PPA—ELISA检测鸡传染性法氏囊病卵黄抗体

鸡传染性法氏囊病(IBD)是一种高度接触性传染病,已成为影响养鸡业的重要疫病之一。目前,防治本病的主要手段是运用疫苗接种,对于疫苗免疫后抗体水平的监测,国内外普遍采用血清进行琼脂扩散试验。为避免采血应激对鸡生产性能的影响,我们试图运用卵黄替代血清,应用PPA—ELISA检测鸡     

鸡传染性支气管炎间接ELISA方法的研究——Ⅰ.检测鸡传染性支气管炎病毒抗体的 ELISA 方法的建立

用蔗糖密度梯度离心法提纯的 IBV,经 SDS-PAGE分检,含有7种蛋白多肽,其分子量分别为130k、110k、87k、82k、61k、31k、29k 道尔顿.用提纯的 IBV 作抗原建立了 ZLISA 试验。试验的最佳工作条件:抗原包被浓度为10μg/ml,被检血清为1:50,酶结合物1:2500.经尿断试验、交叉试验及重复性试验证明,所建立的ELISA 试验具备强的特异性和好的重复性.用 ELISA 检测鸡血清中的 IBV 抗体,并同血清中和试验、琼脂凝胶沉淀试验相比较,证明灵敏度可达血清中和试验的2.3倍,琼脂凝胶沉淀试验的188倍,达到了国际上和国内学者建立的同类方法的灵敏度水平.     

鸡传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用

建立了一种检测鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)抗体终点滴度(end-point titer, ET)的间接ELISA方法,以应用于监测鸡免疫疫苗或者感染野毒后的抗体。以大肠杆菌表达的IBV核衣壳(N)蛋白作为包被抗原,以SPF鸡血清和感染IBV的SPF鸡血清分别作为阴性血清和阳性血清对照,优化确定出ELISA的各项技术参数。对66份SPF鸡血清进行测试,确定了阴、阳性S/P临界值为0.385。特异性试验表明包被抗原与其他常见病原的阳性血清均不发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10.00%。选取了50份临床血清样品,通过阳性-阴性阈值(positive negative threshold, PNT)基线确定ET值,建立了固定血清稀释倍数(1∶500)处S/P值与ET的线性回归方程,相关系数(R²)为0.959 3(P<0.000 1)。通过检测2个商品鸡群在1～49日龄不同时间点采集的461份血清样本,比较了建立的IBVN-ELISA方法与IDEXX公司提供的商品化试剂盒。本研究建立的I...     

应用PPA—ELISA检测鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的研究

应用PPA-ELISA检测了北京市某种鸡场三个父母代鸡群种卵卵黄传染性法氏囊病的抗体水平,结果表明。卵黄抗体效价与血清抗体效价基本相同,证实了运用卵黄替代血清进行鸡传染性法氏囊病抗体水平的监测是一种省力。省时有效,实用的抗体监测手段;同时,利用几种不同方法进行卵黄抗体的提取,结果聚乙二醇和氯仿处理获得的卵黄抗体提取液用于检测效果最好。     

鸡传染性支气管炎间接ELISA方法的研究——Ⅱ.应用 ELISA 检测鸡传染性支气管炎病毒抗体

应用 ELISA、SN 和 AGP 试验对人工感染鸡传染性支气管炎病毒(IBV)抗体消长规律的比较测定表明,ELISA 比 SN、AGP 敏感。应用 ELISA 对 SPF 鸡群和普通鸡群检测,并与 SN、AGP 试验比较,取得了满意的结果.在 ELISA 中,观察到二种不同血清型 IBV 的毒株之间存在着较为明显的交叉反应,证明 ELISA 试验具有较强的群特异性。     

应用进口鸡传染性支气管炎ELISA试剂盒检测鸡传染性支气管炎抗体

鸡传染性支气管炎(IB)是由传染性支气管炎病毒引起鸡的一种急性高度接触性的呼吸道传染病,是严重危害我国乃至世界养鸡业的重要疾病之一。已有多种血清学方法可用于IB抗体检测,我国目前常用的方法有琼脂扩散试验(AGP)、血清中和试验(SN)、间接血凝试验(IHA)等。国内很多学者先后建立了ELISA方法检测IB抗体均取得理想结果,但仅限于实验室检测,在基层推广应用还有一定困难。     

应用间接ELISA检测鸡痘病毒抗体方法的建立

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法。应用该方法检测鸡痘阳性血清，其灵敏度为琼脂扩散试验的400～800倍，而且还具有特异性强、操作简便、快速等特点。     

应用间接ELISA检测鸡痘病毒抗体方法的建立

应用鸡胚成纤维细胞(CEF)扩增鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)并提纯后作为抗原建立了具有较高特异性和灵敏性的间接ELISA方法.通过方阵滴定法来确定抗原最佳包被浓度为2.7μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,其阳性临界值为OD≥0.113.将400份FPV免疫实验鸡血清用本方法进行检测,其阳性检出率为81.25%(325/400).此外,将该方法与琼脂扩散试验进行比较检测血清样品,结果显示本方法的灵敏度比琼脂扩散试验灵敏400～800倍,而且还有特异性强,操作简便、快速等优点.