核酸检测技术在水产动物病毒感染诊断中的应用

目前,应用于水产动物病毒感染诊断中的核酸检测技术主要包括核酸杂交、聚合酶链反应、聚舍酶链反应与分子杂交联用、聚合酶链反应与免疫学联用、限制性酶切技术、环介导的等温扩增、基因芯片及测序等技术。这些技术发展迅速,并在原有基础上根据实际的需求产生出很多相应的衍生技术。它们已被广泛应用在水产动物病毒感染诊断中并发挥着巨大的作用。核酸检测技术以其无法比拟的优点得到了快速的推广和应用,有着广阔的发展空间。     

环介导等温扩增在动物病原微生物检测中的应用研究进展

病原微生物是威胁畜禽健康的重要因素,严重影响畜牧业的发展,快速、精准的病原微生物检测方法对于保障畜禽健康具有重要意义。环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）是一种核酸等温扩增技术,具有灵敏度高、反应速度快、操作便捷等特点,原理是针对靶基因的6个区域设计2～3对引物,使用链置换DNA聚合酶即可实现高效扩增。文章对LAMP的反应机制、研究现状以及在动物病原微生物检测中的应用进展进行综述,并对其未来发展进行展望。     

单分子免疫阵列技术在传染病诊断中的应用

单分子免疫阵列(single molecule array,Simoa)技术,又称"数字ELISA",是近年来新开发的一种数字免疫分析方法,将单分子计数用于蛋白质生物标记物的检测.该方法可测量各种不同基质(血清、血浆、脑脊液、尿液、细胞提取物等)中的蛋白质,检测限可达飞摩尔(fg/mL)数量级,灵敏度较传统ELISA提...     

核酸杂交技术及其在分子病理学研究中的应用

核酸杂交技术最初是在1961年建立的。Hall等利用核酸能变性与复性的原理使核酸探针与靶序列在液相中杂交,然后通过平衡密度梯度离心分离到杂交体建立了核酸杂交技术。随后,于1962年Bautz等将糖苷化DNA吸附在硝化纤维素柱上,Bolton等将变性的单链DNA固定在琼脂中,建立     

LAMP技术及其在微生物检测中的应用

近年来,随着食品安全事件的频繁发生,食品安全问题受到了越来越多的重视。然而,在食品微生物检测过程中,传统的检测方法已经远远不能满足微生物快速、简易、高特异性的鉴定要求。随着分子生物学技术的发展,核酸扩增法已经被广泛应用于病原微生物的鉴定,LAMP法（即环一媒恒温核酸扩增方法）就是近几年发展起来的新技术之一。     

分子生物学技术在感染性疾病诊断中的应用进展

近年来，随着分子生物学技术的发展，利用分子生物学技术诊断感染性疾病的病原日益受到瞩目，发展迅速。现从核苷酸、蛋白质和抗体三个方面论述分子生物学运用于诊断感染性疾病的研究进展。     

分子免疫学诊断技术在兽医学中的应用

免疫学在兽医中侧重于免疫血清学诊断和免疫防治。在疾病的诊治中更是依靠免疫学诊断技术快速、准确地诊断出传染病病原和传播途径,对于传染病的预防控制尤为重要。免疫学检测即是根据抗原、抗体反应的原理,利用已知的抗原检测未知的抗体,或是利用已知的抗体检测未知的抗原。由于外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导生物机体的免疫应答,在生物体内产生生物T细胞的克隆扩增和效应增强,并分泌特异性的免疫球蛋白-抗体。由于抗原抗体结合具有特异性和专一性的特点,这种检测可以定性、定位、定量地检测某一特异的抗原或抗体。     

核酸技术在禽病诊断中的应用

近年来 ,随着分子生物学发展 ,禽病诊断水平有了很大提高。禽病的实验室诊断技术已从常规的病毒分离鉴定以及抗原、抗体的免疫学检测 ,进入到可对病原微生物的基因序列和结构直接进行测定的分子生物学水平。核酸技术是分子生物学技术的一部分 ,它包括聚合酶链反应 ,核酸探针及限制性内切酶酶切片段分析和核酸序列测定。核酸技术的核心是根据病原体的遗传物质ＲＮＡ或ＤＮＡ进行鉴别定性 ,其目的是检测病原体 ,同时鉴定血清型、亚型或基因型 ,核酸序列分析定性的水平是其他方法不可比拟的。核酸技术具有高灵敏性、高特异性等优点 ,目前该技术…     

CRISPR-Cas技术在病毒性传染病诊断中的应用

病毒性传染病尤其是新发和再发病毒性传染病一直是人类和动物健康的重大威胁,而开发准确、快速、便捷的诊断方法有利于病毒性传染病的有效防控。CRISPR-Cas系统是当前应用广泛的基因编辑技术。近年来,有些类型CRISPR-Cas系统已在传染性病原微生物的分子诊断方面展现出巨大潜力,其与核酸扩增、荧光标记等技术结合建立的检测方法准确、灵敏度高、操作简便,不需要很复杂的设备,适宜用于疫病的现场快速诊断。论文综述了CRISPR-Cas系统Ⅱ型CRISPR-Cas9、Ⅴ型CRISPR-Cas12和Ⅵ型CRISPR-Cas13技术的作用机制及其在病毒性传染病诊断中的应用,以期为病毒性传染病的诊断和防控提供参考。     

分子生物学技术在病毒性传染病中的临床应用

分子生物学方法目前是病毒检测和定性的一部分。PCR 技术可以检测传统病毒学方法检测不到的病毒,为病毒学进一步研究提供了技术平台。分子方法不仅能检测到抗生素抗性基因,而且还能进行病毒株基因分型,为公众提供健康信息。通过对抗病毒治疗应答的监控可检测到病毒抑制和病毒量,大大提高病毒的治疗水平。随着多重 PCR、实时定量荧光 PCR 出现和自动化效率的提高,分子检测方法价格将不断降低,分子方法发挥的作用将进步增加。这篇文章将重点叙述分子生物学方法在临床病毒学检测中的应用情况,通过一些例子阐明这些方法如何改变实验室诊断,达到防治病毒性传染病的目的。     

密切关注禽类新发传染病——记中国畜牧兽医学会禽病学分会禽类新发传染病高层论坛

2009年7月31日～8月2日,中国畜牧兽医学会禽病学分会禽类新发传染病高层论坛在青海省西宁市召开,这是继2008年9月25～29日在江苏扬州召开的禽病学分会第十四次学术研讨会后的又一次全国禽病工作者的盛会.此次论坛由中国畜牧兽医学会禽病学分会主办,青海省畜牧兽医学会承办,吸引了全国各地从事禽病教研、防控及生产领域的专家、学者、企业家及技术人员150多人参会.     

Infectious Diseases of Wildlife: Detection,Diagnosis and Management

Tropical Animal Health and Production -     

荧光定量PCR技术及其在动物传染病定量检测中的应用

荧光定量PCR是近年发展起来的一 种新的实时定量检测特定核酸技术,它是核 酸探针技术、荧光共振能量传递技术和PCR 技术的有机结合,而荧光探针是荧光定量 PCR的核心。目前报道的荧光探针主要有 TaqMan、Amplisensor、分子信标、Lightcycler 以及在这4种探针基础上发展起来的其他荧 光探针。各种荧光探针在定量PCR中的作 用是识别和报告特定核酸。这些荧光探针与 相应的靶分子杂交时经历一个自发荧光形成 或消失的构象变化,只有与完全互补的靶核 酸杂交时才会出现这种变化,当靶核酸存在 碱基错配或缺失时,荧光探针就不会与之杂 交,也不会出现荧光的变化。在检测时根据 这种荧光变化来确定检测中特定核酸的存在 和量的多少。荧光探针用于定量PCR不但 提高了PCR的检测灵敏度,还能在同一封闭 管中对模板进行准确定量检测,特别适合特 定核酸扩增的实时监测。荧光定量PCR用 于动物传染病的诊断,不但能定量检测病原 体感染的强弱和在机体内的分布,还具有灵 敏、快速、省力的特点。     

PCR在畜禽疫病诊断上的应用及研究进展

PCR技术是一门非常实用的分子生物学新技术。其特点在于敏感性强、特异性高。它在兽医临床诊断中尤其适用于那些培养困难和抗原性复杂的细菌的检测鉴定 ;诊断在基因上具有同源相似性的多重病毒感染 ;并应用于研究支原体 ,螺旋体等其它致病微生物引起的疾病。PCR技术敏感性极高 ,因此在实际操作中容易出现假阳性现象 ,同时存在产物不易纯化 ,操作步骤繁琐、耗时较多等缺陷 ,针对这些问题 ,最近出现了固相 PCR、PCR-EL ISA液相杂交技术、实时 Taq Man-PCR技术、PCR基因芯片、DNA芯片 ,这些 PCR技术新的进展有效的克服了 PCR技术的不足。随着研究的深入 ,未来PCR技术将会作为实验室常规的检测技术广泛应用于诊断病原、肿瘤细胞监测、基因表达、遗传病检测     

反转录─套式PCR方法检测鸡传染性法氏囊病病毒

采用蛋白酶 Ｋ 消化,酚、氯仿抽提的方法提取法氏囊匀浆和细胞培养液中的鸡传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ）基因组 Ｒ Ｎ Ａ,用特异的寡核苷酸引物对其 Ｖ Ｐ２ 高变区进行反转录套式 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增。应用该方法从一个法氏囊匀浆中即可特异地检出 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ,得到的扩增产物可用于分子流行病学的进一步分析,而从感染材料的处理到扩增结果的电泳检测,在两个工作日之内可轻松完成。本实验为法氏囊病病毒的诊断和分子流行病学的分析提供了一种快速、简便、可靠的手段。     

猪群中7种高发传染病多重PCR诊断方法的建立

[目的]建立猪瘟、蓝耳病(又称猪繁殖与呼吸综合征)、圆环病毒2型感染、猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病、猪多杀性巴氏杆菌感染和猪支原体感染7种猪病的多重PCR诊断方法.[方法]根据GenBank发表的核苷酸序列设计了分别针对猪瘟、蓝耳病、圆环病毒2型感染、猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病、猪多杀性巴氏杆菌感染和猪支原体感染的2套多重PCR特异性引物,优化多重PCR反应条件后进行敏感性与特异性评价.[结果]建立的2套多重PCR诊断方法对其他常见猪病痛原的基因组无特异性扩增,检测病原基因组最低浓度可达到pg级.[结论]该研究建立的2套多重PCR诊断方法可以用于猪群中上述7种猪病痛原的单一感染或混合感染的鉴别诊断.