细胞松弛素B对猪卵母细胞去核的影响

适宜的细胞松弛素B(CB)浓度可提高卵母细胞的成功去核率。将有明显第一极体排出的卵母细胞放入含有3.5×10-3、5×10-3、6.5×10-3、7.5×10-3mg.ml-1CB的NCSU37成熟培养液中孵育30min,采用盲吸法去核,将去核后的卵母细胞置入含5×10-3g.ml-1的Hoechst33342培养液中染色15min,用荧光显微镜检验去核率。结果表明:CB处理组去核率显著高于对照组(P<0.05)。不同浓度梯度处理组中,CB浓度过低(3.5×10-3mg.ml-1)或过高(7.5×10-3mg.ml-1)都使去核成功率(54.44%,51.46%)下降,溃破率(28.21%,34.11%)增高,与5×10-3、6.5×10-3mg.ml-1组的去核成功率(75.83%,73.83%)、溃破率(9.86%,11.62%)差异显著(P<0.05),且5×10-3mg.ml-1组的去核成功率高于6.5×10-3mg.ml-1组,差异不显著(P>0.05)。证明5×10-3mg.ml-1浓度的CB有利于第一极体和核质的吸出,同时可降低细胞膜撕裂,胞质破溃流出,获得较高的去核效率。     

细胞松弛素B诱导虾夷扇贝多倍体的受精卵染色体分离状况

报道了采用细胞松弛素B (CB)处理虾夷扇贝 (Patinopectenyessoensis)受精卵抑制第一极体 (PB1 )释放的处理组与对照组的细胞染色体分离状况。结果表明 ,对照组中的受精卵具有 1 9条四分体染色体 ,经过减数分裂Ⅰ期和减数分裂Ⅱ期 ,放出PB1和PB2 ,受精卵的发育具有不同步性。处理组受精卵在第二次减数分裂中出现了特殊的分离类型 ,即“三级分离”、“联合二级分离”和“独立二级分离”。初步分析了细胞松弛素B抑制第一极体放出的机理     

CCB、蔗糖及成熟时间对山羊卵母细胞去核效果的影响

分离培养山羊卵母细胞,采用盲吸法去核,研究不同成熟培养时间(18,22和26 h)不同细胞松弛素B(CCB)浓度(5,7.5,10,15 mg/L)和不同蔗糖浓度(20,25,30 g/L)对卵母细胞去核效果的影响。结果表明,山羊卵母细胞最佳去核条件为:卵母细胞体外成熟时间为22 h,去核时操作液中CCB质量浓度为7.5 mg/L,蔗糖质量浓度为20 g/L。     

外源褪黑素对牛卵母细胞体外成熟的影响

 【目的】探索外源褪黑素（melatonin,MT）处理对牛卵母细胞体外成熟的影响从而优化牛体外胚胎生产体系。【方法】在牛卵母细胞成熟过程中添加不同浓度的MT,观察并统计其体外受精后胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数。应用放射免疫分析法检测血清、卵泡液和成熟培养液内MT与孕酮（P）、雌激素（E2)、促卵泡素（FSH）、促黄体生成素（LH）水平的变化并检测卵母细胞的活力和活性氧（ROS）的浓度。【结果】存在于牛卵泡液中的MT浓度与血清中的相近,添加10-11 mol•L-1 MT组的P浓度（2.01±0.33）ng•mL-1显著高于对照组（（0.87±0.10）ng•mL-1,P＜0.05）。与对照组（（67.32±7.30）%）相比,10-9 mol•L-1 MT组卵裂率显著提高（（77.81±7.06）%,P＜0.05）,并能提高囊胚率且囊胚细胞数（（29.61±9.55）%,（90.30±28.74）个）,显著高于对照组（（19.64±9.22）%,（75.07±25.98）个,P＜0.05）;同时,10-9 mol•L-1 MT组卵母细胞的活力高于对照组,并能降低卵母细胞内的ROS含量但没有显著差异（P＞0.05）。【结论】牛卵泡液中存在MT,适当浓度的外源MT能促进牛卵母细胞体外成熟。     

细胞松驰素B诱导虾夷扇贝多倍体的受精卵染色体分离状况

报道了采用细胞松驰素B（CB）处理虾夷扇贝（Patinopecten yessoensis）受精卵抑制第一极体（PBI）释放的处理组与对照组的细胞染色体分离状况。结果表明，对照组中的受精卵具有19条四分体染色体，经过减数分裂Ⅰ期和减数分裂Ⅱ期，放出PB1和PB2，受精卵的发育具有不同步性。处理组受精卵在第二次减数分裂中出现了特殊的分离类型，即“三级分离”、“联合二级分离”和“独立二级分离”。初步分析了细胞松驰素B抑制第一极体放出的机理。     

铜对牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育的影响

研究了氯化铜对牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育潜力的影响。培养液中铜的浓度以原子吸收光谱法测定。培养液中铜的浓度为0(对照组)、0.46和0.68 mg·L-1。结果表明,试验组在卵母细胞成熟和受精卵发育至2细胞率与对照组差异不显著(P>0.05),但试验组较对照组显著提高了桑椹胚和囊胚的发育率(P<0.05)。在卵母细胞体外成熟培养的0~22 h、受精卵培养的0~48 h、48~96 h、96~144 h和144~192 h,0.46 mg·L-1试验组培养液中铜浓度分别下降了4.3%、8.7%、26.0%、28.3%和30.4%,0.68 mg·L-1试验组培养液中铜浓度分别下降了2.9%、7.4%、23.5%、25.0%和27.9%。培养液中铜对牛早期胚胎培养至桑椹胚和囊胚有重要的作用,早期胚胎发育48 h后对培养液中微量元素铜的需求明显增加。     

牛卵母细胞体外成熟及体外受精的研究

本研究分析了卵巢不同性周期阶段（卵泡期、黄体期）、外源激素（ＦＳＨ、ＬＨ、雌激素）和不同卵泡液浓度（１０％,２０％,３０％）对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明,卵巢的不同性周期阶段对卵母细胞体外成熟的影响不大（６３９％和５８７％）;成熟培养基中添加ＦＳＨ（１０ｍｇ／Ｌ）,ＬＨ（５ｍｇ／Ｌ）和同时添加ＬＨ、雌二醇（１ｍｇ／Ｌ）,可以促进卵母细胞的体外成熟,成熟率分别为６３０％,６４０％,６９１％;卵泡液（１０％,２０％,３０％）代替血清,其成熟率分别为５０７％,５７６％,５１９％,２０％ｂＦＦ效果最好。本研究对精子的两种处理方法进行了比较,发现在相同精子密度条件下（１×１０６～２×１０６个／ｍＬ）,Ｐｅｒｃｏｌ液处理精子的受精率（４７１％）显著低于上浮法处理精子的受精率（５７１％）（Ｐ＜００５）。     

牛卵泡卵母细胞体外成熟的研究

研究了ＦＣＳ,１７β－Ｅ２,ＦＳＨ,ＬＨ对牛卵泡卵母细胞成熟的作用及培养时间对卵母细胞核和细胞质成熟的影响。结果表明,添加体积分数为１０％～１５％的ＦＣＳ,１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２,２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ和１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ有利于提高卵母细胞核成熟,放出第一极体。而成熟培养２０,２４ｈ的卵母细胞成熟率显著高于培养１６ｈ（Ｐ＜０．０５）,核成熟后培养３～４ｈ有利于卵母细胞质成熟,对其后的受精、卵裂及胚胎的进一步发育有重大影响。且ＴＣＭ１９９＋质量分数１０％～１５％的ＦＣＳ＋１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２＋１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ＋２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ是卵母细胞成熟的理想培养系统。     

牛卵母细胞体外成熟技术研究进展

牛卵母细胞体外成熟是一项重要的繁殖生物技术,但是由于卵母细胞没有经历体内促黄体激素（LH）峰启动前的生长过程及生物事件干扰了胞质成熟,导致体外发育能力低于体内成熟的卵母细胞。卵母细胞成熟过程复杂,涉及细胞核、细胞质及分子成熟。牛卵母细胞体外成熟受多种因素影响,其中包括卵母细胞来源、颗粒细胞与卵母细胞间相互作用及体外培养环境等。迄今为止,为了提高牛卵母细胞的体外发育能力,许多学者模拟卵母细胞体内环境发展了一些新的体外成熟技术,诸如体外延迟自发恢复减数分裂成熟、外源卵母细胞分泌因子促进卵母细胞体外成熟及模拟生理条件下卵母细胞成熟等方法。本文综述了牛卵母细胞成熟过程、影响卵母细胞体外成熟因素及近年来提高牛卵母细胞体外成熟的新方法。     

黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及早期胚胎发育的影响因素

从屠宰场收集黄牛卵巢,取皮质深层卵母细胞进行体外成熟、体外受精和早期胚胎体外培养,分析影响其效果的因素。结果表明,在成熟培养液中添加促卵泡素(FSH)(10 IU/mL)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)(20 IU/mL)和17β-雌二醇(17β-E2)(1μg/mL)对卵母细胞受精后早期胚胎发育能力有极显著的促进作用。等量牛卵泡液(BFF)与初生犊牛血清(NCS)效果差异不显著,以添加15?F为最宜。颗粒细胞与输卵管上皮细胞均能显著提高卵母细胞体外成熟受精后早期胚胎的发育率,颗粒细胞 输卵管上皮细胞对克服胚胎阻滞现象效果最显著。     

重组牛生长激素对山羊卵泡卵母细胞体外成熟的影响

将３０７枚Ａ、Ｂ级卵丘－卵母细胞复合体（ＣＯＣ）分别培养于：改良ＴＣＭ１９９＋ＦＳＨ（１０μｇ／ｍｌ）＋ＬＨ（２０μｇ／ｍｌ）＋２０％ＮＣＳ（Ａ液）、Ａ液＋重组牛生长激素（ｒｂＧＨ）１５ｎｇ／ｍｌ、改良ＴＣＭ１９９＋ｈＣＧ（２０μｇ／ｍｌ）＋ｒｂＧＨ＋２０％ＮＣＳ三种培养基中，获得５３１％、６７９％和６３５％的成熟率。结果表明，ｒｂＧＨ对山羊卵泡卵母细胞的体外成熟是有益的。     

山羊卵泡卵母细胞体外成熟的研究

研究了ＦＣＳ,１７β－Ｅ２,ＦＳＨ,ＬＨ对山羊卵泡卵母细胞成熟的作用,及培养时间对卵母细胞核和细胞质成熟的影响。结果表明,添加体积分数为１０％～１５％的ＦＣＳ,１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２,２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ和１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ有利于提高卵母细胞核成熟,并放出第一极体。而成熟培养２０,２４ｈ的卵母细胞成熟率显著高于培养１６ｈ（Ｐ＜０．０５）,核成熟后培养３～４ｈ有利于卵母细胞质成熟,对其后的受精、卵裂及胚胎的进一步发育有重大影响。且ＴＣＭ１９９＋质量分数为１０％～１５％的ＦＣＳ＋１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２＋１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ＋２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ是卵母细胞成熟的理想培养系统。     

Ghrelin和GHS-R1a mRNA在牛卵母细胞体外成熟过程中的表达

【目的】探讨Ghrelin和GHS-R1a mRNA在牛卵母细胞体外成熟过程中的表达及二者表达与FSH之间的关系。【方法】 利用实时定量RT-PCR技术检测体外成熟进程中牛卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA水平表达变化,观察不同浓度FSH对Ghrelin和GHS-R1a mRNA表达的作用以及FSH与FSH受体抑制剂的组合对Ghrelin和GHS-R1a基因表达的影响。【结果】 实时定量RT-PCR结果揭示牛卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA的相对表达量随着成熟过程的延长而呈现一定变化规律,即Ghrelin和GHS-R1a mRNA在卵母细胞体外成熟过程中从8 h开始显著下降并持续此低表达水平到24 h;不同浓度FSH 显著抑制卵母细胞Ghrelin及GHS-R1a mRNA的表达,而FSH 受体抑制剂明显减弱FSH的抑制作用而促进二者表达。【结论】Ghrelin和GHS-R1a mRNA在卵母细胞体外成熟过程中的表达可能随着培养液中FSH升高而降低。