番茄子叶下胚轴植株再生技术的研究

番茄子叶下胚轴植株再生技术的研究孟祥栋张卫华马红刘文宝（山东农业大学园艺系）关键词：番茄;子叶;下胚轴;植株再生中图法分类号：Ｓ６４１．２ＳＴＵＤＹＯＮＴＥＣＨＮＩＱＵＥＯＦＰＬＡＮＴＲＥＧＥＮＥＲＡＴＩＯＮＦＲＯＭＴＯＭＡＴＯＣＯＴＹＬＥＤＯＮＡ...     

加工番茄子叶和下胚轴离体植株再生的研究

以加工番茄BO 2和BO 4无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,以M S为基本培养基,研究了不同浓度的ZT,6-BA与不同浓度的IAA组合对外植体芽诱导的影响。结果表明,在不同浓度的ZT和IAA组合中,对2个番茄品种的子叶和下胚轴外植体芽诱导均以M S+1.0 m g/L ZT+0.05 m g/L IAA培养基为最好,BO 2品种子叶和下胚轴的出芽率分别为32.7%和24.5%,BO 4品种的分别为37.3%和28.2%;在不同浓度的6-BA和IAA组合中,诱导BO 2外植体出芽率最高的培养基是M S+2.0 m g/L 6-BA+0.2 m g/L IAA,子叶和下胚轴的出芽率分别为27.3%和14.5%;诱导BO 4品种子叶和下胚轴出芽率最高的培养基分别为M S+1.0 m g/L 6-BA+0.2 m g/LIAA和M S+2.0 m g/L 6-BA+0.2 m g/L IAA,子叶和下胚轴的出芽率均为28.2%;在M S+0.1 m g/L IAA培养基上,加工番茄BO 2再生芽1周左右就能长出根,形成完整的小植株。     

菘蓝子叶和下胚轴组织培养再生植株的研究

以菘蓝子叶和下胚轴为外植体进行组织培养，筛选出植株再生的适宜的培养基为ＭＳ＋ＫＴ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ。对器官发生进行系统的细胞组织学观察发现：菘蓝下胚轴培养，细胞启动和不定芽的形成随下胚轴部位的不同而有所不同；不定芽发生的数量与其维管轴的发育有关，整个下胚轴分化不定芽的数量呈梯度变化。     

番茄下胚轴和子叶组织培养及植株再生的研究

以番茄幼苗的下胚轴和子叶为外植体,研究不同激素培养基对其愈伤组织、不定芽诱导及生根的影响。结果表明:以MS为基本培养基,添加NAA0.7mg·L-1,LA2711在6-BA0.7mg·L-1,Liger在6-BA1.0mg·L-1时对子叶和下培轴诱导愈伤效果最好;6-BA为2.0mg·L-1时,LA2711在IAA0.3mg·L-1,Liger在IAA0.1mg·L-1条件下分化率最高。     

番茄下胚轴转化获得转基因植株

通过根癌农杆菌介导转化番茄（Lycopersicon esculentum Mill.)下胚轴，将外源双价基因导入番茄，获得了一批卡那霉素抗性苗，经PCR则证明外源基因已经整合到番茄基因组中。研究表明番茄下胚轴是良好的遗传转化受体，具有操作简便，节省番茄材料和再生速度快的特点。烟草细胞看护培养能够提高外植体的转化效率和减少农杆菌对外植体的污染。     

番茄下胚轴愈伤组织高频率诱导与植株再生

以２份番茄栽培品种为供试材料，比较了不同基因型和不同激素配比对愈伤组织诱导和植株再生频率的影响。结果表明，不同基因型之间的培养反应值存在较大的差异，以下胚轴为外植体可以获得具较高分化力的愈伤组织。     

加工番茄下胚轴再生体系的建立

[目的]建立加工番茄模式品种M82的再生体系,为加工番茄M82的遗传转化奠定基础.[方法]研究不同灭菌剂对加工番茄表皮灭菌效果,及运用正交组合设计不同浓度的激素配比,研究不同浓度的激素对加工番茄愈伤组织诱导和不定芽诱导的影响.[结果]加工番茄种皮灭菌,以15;次氯酸钠(NaClO)+吐温-20 30 min对加工番茄M82种皮的灭菌效果最佳;愈伤组织诱导,以MS B5 +3 mg/L6-BA+0.25 mg/LNAA诱导出的愈伤组织平均直径最大;不定芽诱导,以MS B5+0.5 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA中诱导的愈伤组织平均出芽数最多.[结论]获得了加工番茄M82的再生体系,并得出细胞分裂素ZT对于加工番茄不定芽的诱导具有较好的效果.     

大白菜下胚轴原生质体再生植株

以大白菜成青２号为材料,从萌发５天的无菌苗下胚轴分离原生质体,然后以附加８．２％葡萄糖,０．４ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ,０．４ｍｇ／ＬＮＡＡ和０．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ的改良的ＫＭ８ｐ液体培养基进行浅层培养,培养１３天后,用含５．８％葡萄糖的ＫＭ８ｐ培养基以１：１进行稀释,４～６周后,再生细胞分裂并形成愈伤组织,直径约０．４～０．５ｍｍ的愈伤组织经ＭＳ培养基（附加２％蔗糖,０．８％的琼脂,１．５ｍｇ／Ｌ６－     

番茄子叶离体培养与再生成株

取番茄不同苗龄的无菌苗子叶进行培养，发现以１４天苗龄的子叶培养不定芽再生频率最高。在ＭＳ培养基上添加不同浓度的吲哚乙酸（ＩＡＡ）和玉米麦（Ｚｔ），对子叶愈伤组织的形成影响不大，但对不定芽的分化有较大影响，其中以ＭＳ＋Ｚｔ１ｍｇ．Ｌ＾－＾１ＩＡＡ１ｍｇ．Ｌ＾－＾１效果最好。在同样的培养基上继代培养，待芽长至１－２ｃｍ长时转到生根培养基上即可在短期内长出根系，成为再生植株。     

不结球白菜子叶离体培养再生植株

用矮脚黄的子叶建立了不结球白菜高频率再生体系。在ＭＳ＋６－ＢＡ１０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．３ｍｇ／Ｌ培养基上，外植体分化率达７０％，每一外植体可产生９．６个不定芽。研究了各种因素对子时离体再生植株的影响，发现１１～１５ｄ苗龄的子叶分化效果最佳。ＭＳ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ对根的诱导最好。     

马铃薯外植体再生植株的研究

以马铃薯(Solanum tuberosum L.)6个栽培品种的叶圆片和幼茎切段作外植体,以 MS 为基本培养基,添加不同配比的激素制成4种诱导和分化培养基,研究这些外植体的再生植株分化率。结果表明,来自上述外植体的愈伤组织,苗的分化率平均分别为60.1%和88.7%.如果选择适当的基因型和激素配比,可使叶圆片和幼茎切段愈伤组织的成菡率分别高达162.3%和143.8%。     

秘鲁番茄茎段原生质体再生成株的研究

采用秘鲁番茄茎段原生质体进行液体浅层培养,从试用的多种培养基中筛选出了１种适宜的原生质体培养基、２种增殖培养基、２种分化培养基,在此基础上,建立了秘鲁番塬生质体再生成株体系。最短再生周期只需４２￣４５ｄ。整个实验共获得１００多个再生植株,其中一部分定植到土壤中,均能正常生长、开花和结籽,经性状观察及染色体数目分析,均为正常的二倍体植株。     

荞麦愈伤组织的高频率诱导和植株再生研究

研究了高频率诱导荞麦愈伤组织和再生植株的组培技术。在附加０．５ｍｇ／Ｌ ２．４－Ｄ和ＫＴ的ＭＳ４培养基上,胚轴和子叶外植体愈伤组织的诱导率高达８１．３％￣９１．２％,胚轴不定芽的诱导率为３４．５％￣４１．２％。将胚轴在附加０．５ｍｇ／Ｌ ２．４－Ｄ的ＭＳ２上预培养１５ｄ左右再转到ＭＳ４上,不定芽诱导率可达５３．３％。不定芽也可从培养于ＭＳ５（附加０．５ｍｇ／Ｌ ＫＴ）中的外植体上直接产生,当不定芽转到附加０．５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ的ＭＳ７培养基上可诱导生根。本研究为进一步开展荞麦细胞工程和基因工程研究提供了较成熟的组培技术。     

外植体处理及接种方式对大白菜植株再生的影响

影响组织培养植株再生的因素很多 ,主要分为三类 :①植物因素 :包括植物的基因型、外植体及供体植株的生理生化状态等 ;②培养基因素 :包括培养基种类、成分以及培养方法等 ;③环境因素 ;包括培养所需的光、温、湿度和气体成分等因子。以往的试验多集中在寻找适于植株再生的激素浓度和基因型上 ,对植物的培养方法和外植体对植株再生的影响研究较少。用苹果等为材料的研究表明植株再生同子叶部位有关〔1 ,2〕,Ｓｈａｒｍａ等认为子叶在芥菜植株再生中的作用相当于类生长素物质〔3〕。本试验在前期工作基础上着重研究了外植体、接种方式和外植…     

苹果与八棱海棠的试管苗外植体植株再生

苹果品种（新乔纳金、嘎拉）及八棱海堂的试管苗外植体（叶片、叶柄、节间茎段）,在附加ＢＡ与ＮＡＡ的ＭＳ培养基上,均能分化不定芽。基中在ＢＡ４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ浓度组合的ＭＳ培养基上,嘎拉与枚棱海棠叶片的再生频率达到１００％。八棱海棠叶片再生苗在附加ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的１／２ＭＳ培养基上生根效果最好。     

实美橙子叶培养和植株再生

以实美橙子叶为外植体,在含2.4-D 1.0mgL~(-1),6-BA 0.5mgL~(-1)的MT 培养基上诱导愈伤组织,并将其在相同的培养基上继代增殖。在附加IBA 0.5～1.0mgL~(-1),6-BA 1.5～3.0mgL~(-1)的MT 分化培养基上培养近1月后,愈伤组织分化产生大量不定芽,长至2.0cm高时,在含NAA 0.5L~(-1),KT 0.05~mgL~(-1)的MT 生根培养基中诱导成完整的再生小植株。     

河套蜜瓜再生芽高效诱导和再生植株的研究

取河套蜜瓜（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｍｅｌｏＬ．ｃｖ Ｈｅｔａｏ）在ＭＳ增减基上生长至５ｄ的幼嫩子叶,在ＭＳ＋６－ＢＡ０．９）,ＩＡＡ１．０的增减基中直接诱导生芽,待再生芽长至０．４ｃｍ～０．６ｃｍ时,切下转入芽伸长拳头基中（ＭＳ＋６－ＢＡ０．９）,待芽伸长至０．８ｃｍ～１．２ｃｍ时,再转入生根诱导（ＭＳ＋ＩＡＡ２）中,待植株长至８ｃｍ～９ｃｍ时,转入沙质土壤中炼苗。整个过程约需６５ｄ～７５ｄ,单个外值体