单抗阻断ELISA检测流行性出血病病毒特异性抗体

应用流行性出血病(EHD)群特异性单克隆抗体(1G9/C9)建立了检测EHD病毒血清抗体的高度敏感和特异的阻断ELISA(B-ELISA),该法能检出所有6种参与试验的EHD血清型高免参考血清中存在的阻断抗体,而不受19种南非和8种澳大利亚蓝舌病病毒(BTV)血清型参考抗血清的影响。与间接ELISA(I-ELISA)相比,EHD B-ELISA检测EHD特异性敏感性更高。同时用BTV和EHD B-ELISA检测试验血清和田间血清的BTV和EHD血清抗体滴度。结果表明:只有B-ELISA对相应的血清群特异性抗体敏感,即便是继发和混和感染另一种病毒亦如此。     

口蹄疫病毒3ABC抗体检测结果分析

口蹄疫(FMD)是一种高度接触性传染病,对国际贸易具有深远的影响,世界动物卫生组织(OIE)和联合国粮农组织(FAO)将口蹄疫列为A类烈性传染病之首.控制和消灭FMD策略包括疫苗免疫和屠宰可疑畜群.可疑畜群就是被FMDV感染动物和带毒动物.只有将感染动物和隐性带毒动物与疫苗免疫动物加以区分才能为FMD的控制和消灭提供科学的依据.3ABC-I-ELISA方法不但可以检测隐性感染动物而且可以区分感染动物和免疫动物.     

O型口蹄疫病毒固相阻断ELISA抗体检测方法研究

以VP1蛋白为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度,最终确定固相阻断ELISA最适反应条件以及判定阈值,建立O型口蹄疫病毒衣壳蛋白抗体的固相阻断ELISA检测方法,并对该检测方法进行考核。试验结果表明,最佳抗原包被浓度为0.062 5μg/m L;兔抗血清最佳工作浓度为16 000倍稀释,酶标二抗为8 000倍稀释;抑制率大于20%为阳性,抑制率小于20%为阴性;该方法与常见病原体无交叉反应,特异性和敏感性好,可以检测O型口蹄疫病毒VP1抗体,评价口蹄疫疫苗的免疫效果。     

不同ELISA试剂盒检测感染猪口蹄疫病毒3ABC抗体效果比较

为更准确研究口蹄疫病毒(FMDV)感染猪非结构蛋白抗体变化规律,选取3种不同的试剂盒,分别检测接种O型口蹄疫病毒猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体。试验数据表明,人工感染O型口蹄疫病毒猪最早在感染后第5天检测到非结构蛋白抗体,至第7天3ABC抗体全部转为阳性;3种试剂盒检测最早3ABC抗体与症状对应关系有差异,每两种商业试剂盒呈现不同程度的相关性。其中A试剂盒显示出最大的灵敏度,而B试剂盒显示最高的特异性,C试剂盒的敏感性依可疑样品的处理方式而变化,因此对3种试剂盒进行比较,发现A试剂盒更稳定,更适合于猪FMDV非结构蛋白抗体检测。     

口蹄疫液相阻断ELISA抗体检测方法的操作注意事项

正液相阻断ELISA用于检测家畜血清中的口蹄疫(FMD)抗体,具有灵敏性高、特异性强、稳定性好等特点。但因耗时较长,操作步骤繁多,操作中稍有不慎就会导致实验结果发生偏差或试验失败,因此必须谨慎操作。1样品或试剂的保存和使用全血样品采集后应尽快分离血清避免溶血,3500~4000 rpm离心5~10 min,血清0~4℃条件下可保存5 d,如采用-15~-20℃冷冻保存则更好。冷冻保存血清样品需在4~8℃条件下解冻,再平衡至室温,稀释前需充分混匀。口蹄疫O型病毒抗原-20℃保存,其余试剂盒     

国内外口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA检测方法和1种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体阻断ELISA检测方法,在检测牛血清时的敏感性和特异性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的有效试剂盒。采用国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA试剂盒和1种阻断ELISA试剂盒,对150份牛血清样品进行ELISA检测。同时对150份样品进行非结构蛋白抗体酶联免疫电转移印迹试验(EITB),以评估4种ELISA检测结果。结果 4种试剂盒的敏感性均达到100%,特异性分别为100%、95%、73%、99%。结论:国内生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒可以用于牛口蹄疫血清学筛选性试验。     

两种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对常用的兰州兽医研究所和北京世纪元亨生产的两种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体的ELISA检测方法,在检测猪血清抗体时的敏感性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的最佳试剂盒。采用上述两种阻断ELISA试剂盒对170份猪血清样品进行ELISA检测。结果表明,两种试剂盒的阳性检出率相差不大,阳性检出率分别为5. 29%和5. 88%。本试验表明:兰州兽医研究所和北京世纪元亨生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒检测结果差异不大,均可应用于口蹄疫血清学筛选性试验。     

液相阻断ELISA口蹄疫抗体检测原理及技巧

<正>口蹄疫是一种严重威胁（如猪、牛、羊等）偶蹄目动物健康的一类传染性动物疫病,给猪牛羊等养殖场/户带来巨大的经济损失。县级兽医实验室口蹄疫抗体检测是我国基层动物防疫部门防控口蹄疫的重要方法,准确检测出当地猪牛等动物的口蹄疫抗体水平,对预防和控制当地口蹄疫疫病具有重要的指导作用和参考意义。     

口蹄疫病毒特异性抗体间接ELISA检测方法的建立

以Chap10-VP1融合蛋白为包被抗原。建立了检测口蹄疫病毒特异性抗的间接ELISA方法。抗原包被浓度为50μg／L时。血清最佳稀释度为1：400，病毒与阳性血清的反应可被Chap10-VP1蛋白阻断，检测的灵敏度为1：1600。     

口蹄疫病毒3ABC非结构蛋白抗体检测结果分析

随机选取猪、牛、羊场不同日龄动物血清,利用间接ELISA方法（3ABC-Ⅰ-ELISA）检测接种口蹄疫病毒疫苗的健康猪、牛、羊体内非结构蛋白3ABC抗体存在情况.结果发现临床健康动物也会产生3ABC非结构蛋白抗体,且动物日龄越大,产生抗体的比例越高.这可能与日龄越大的动物在生长过程中感染口蹄疫的概率越大有关,或与多次疫苗免疫后导致产生非结构蛋白抗体有关.因此,口蹄疫3ABC非结构蛋白抗体检测适用于对口蹄疫疫情的初筛,且对日龄较小或免疫口蹄疫疫苗次数较少的动物比较适用.     

牛O型口蹄疫病毒3ABC抗体检测结果分析

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的烈性、高度传染性疾病,临床上以口腔黏膜、舌面、鼻镜、乳房和蹄部出现水疱性损伤为主要特征,继而发生溃疡,易感动物种类较多,包括猪、牛、羊等主要家畜及其他偶蹄动物.为了将感染动物与疫苗免疫动物加以区分,为口蹄疫的控制和消灭提供科学依据,试验采用3ABC-ELISA方法[1]对黔西南州某县的散养和养殖场牛群进行抗体检测.     

口蹄疫病毒抗体检测

口蹄疫是一种急性、高度接触性、烈性的传染病,是由口蹄疫病毒引起的,常常发生在偶蹄动物,偶尔也见于人和其它动物。世界动物卫生组织已经将该病列为法定申报传染病,我国将其列为一类动物疫病。我国主要通过实施强制免疫来预防控制该病,疫苗免疫之后所产生的抗体水平是评价免疫效果的重要手段,也可以根据免疫后的效果来制定合理免疫程序。本实验室主要通过口蹄疫液相阻断和3ABC非结构蛋白抗体检测试剂盒来进行抗体检测。     

口蹄疫O型液相阻断ELISA免疫抗体检测方法的应用

应用液相阻断ELISA试验方法检测上海光明荷斯坦牧业有限公司牧场牛群经口蹄疫O型灭活疫苗免疫的奶牛血清样品2412份。经检测,2412份样品中规模奶牛场牛群免疫抗体滴度≤1∶64样品42份,抗体滴度≥1∶128样品2370份,抗体保护率为98%。     

固相竞争ELISA和液相阻断ELISA在口蹄疫抗体检测中的比较

为对比固相竞争ELISA和液相阻断ELISA在口蹄疫抗体检测中的应用,选择猪血清345份、牛血清110份、羊血清159份,共614份血清样品同时进行O型和A型抗体检测,对比两种检测方法的符合率和对不同畜种的检出率。结果：两种检测方法在O型抗体检测中的符合率为95.3%,在A型抗体检测中的符合率为96.1%,对不同畜种的检出率无明显差异。结论：在大规模检测免疫抗体时,推荐采样固相竞争ELISA检测方法。     

口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测两种实验方法结果对比

本次实验共检测猪样品39份,通过4℃静置过夜的液相阻断ELISA实验方法的检测结果是口蹄疫O型抗体合格率是89.74%,通过37℃温育90 min的液相阻断ELISA实验方法的检测结果是口蹄疫O型抗体合格率是79.48%,合格率相差10.26%。通过4℃静置过夜的液相阻断ELISA实验方法比通过37℃温育90 min的液相阻断ELISA实验方法检测结果更为精确。     

流行性出血病病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒的研制

为研制流行性出血病病毒(epidemic hemorrhagic disease virus,EHDV)ELISA抗体检测试剂盒,用饱和硫酸铵浓缩EHDV灭活病毒作为包被抗原,以EHDV鼠源单克隆抗体作为阻断抗体,商品化的IgG-HRP羊抗鼠二抗作为检测抗体,通过优化检测试剂中各组分含量和反应程序,建立了一种EHDV阻...     

固相阻断ELISA法检测口蹄疫病毒O型抗体的不确定度评定

目的：以口蹄疫病毒O型抗体(固相阻断ELISA法)检测的不确定度评定为例,以两种方法评定检测的不确定度。方法：分别使用“影响因素分析法”和“对照样品法”对检测口蹄疫病毒O型抗体的不确定度进行评定。结果：“影响因素分析法”的合成不确定度为0.1297,扩展不确定度为0.2593;“对照样品法”的合成不确定度为0.1040,扩展不确定度为0.2080。结论：对新方法进行不确定度评定时,“影响因素分析法”更适用,可帮助检测员更了解试验过程及注意事项,而“对照样品法”直接评估该试验过程的合成不确定度,减少大量计算过程,快速得出结论。     

首次利用液相阻断ELISA检测口蹄疫O型抗体的试验报告

利用液相阻断ELISA方法检测郭勒木德镇拖拉海村和阿拉尔村的健康牛、羊O型口蹄疫免疫抗体牛45头份、羊45只份,检出牛血清样品阳性(合格)34份,阳性(合格)率75.6%;检出羊血清样品阳性(合格)42份,阳性(合格)率93.3%。