生防木霉菌耐三唑类杀菌剂菌株的选育

应用含药培养基诱导和紫外线诱变相结合的方法,对优良生防木霉菌株T2-16进行了抗三唑类杀菌剂的遗传改良,获得了具有较好耐药性突变体13株。通过测定突变株对水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani）、稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）和稻曲病菌（Ustilaginoidea virens）的拮抗性,获得1株拮抗活性高、对三唑类杀菌剂耐性好的突变体TUV-13,其对腈菌唑抗性提高10倍,对三唑酮抗性提高51倍,且耐药性可以稳定遗传。     

紫外光诱导木霉产生对速克灵抗药性菌株的研究

为了使杀菌剂中生物农药能和化学农药混配使用,采用紫外线诱变处理与药物培养基驯化培养相结合的方法,分离筛选出对化学杀菌剂腐霉利(商品名称速克灵)有显著抗性的突变型木霉菌株UT-4。经菌和药的协同作用研究发现,抗药性木霉菌剂UT-4(浓度为108cfu/g)与50%腐霉利WP配比为8∶2条件下,协同抑菌率达84.3%,明显高于木霉菌和腐霉利单用的抑菌率。     

白僵菌菌株的紫外线诱变选育

从自然罹病的桃小食心虫和蛴螬僵尸上分离到产孢量较高的球孢白僵菌菌株46-1和卵孢白僵菌菌株4号,经紫外线照射处理,获得2个球孢白僵菌菌株23号和53号、1个卵孢白僵菌菌株45号,它们的产孢量和毒力稳定高于亲本,而且生产性状和田间防治应用效果良好。     

木霉耐盐突变菌株的紫外诱变选育

为了获得高效耐盐木霉突变菌株,以盐碱土中分离的一株深绿木霉T-YM作为原始菌株进行紫外诱变处理,并筛选了突变菌株的最佳诱变条件,利用NaCl溶液模拟盐胁迫条件测定了突变菌株耐盐指标生长速率、产孢量和菌丝生长量。结果表明,与对照(野生型菌株)相比,当诱变时间为3 min时能够显著提高深绿木霉T-YM突变菌株菌落生长速度和产孢量,分别增加17.69%和28.82%;诱变时间为0.5 min和5 min时能够显著提高突变菌株菌丝生长量,分别增加42.22%和46.67%。利用10 mg·mL^-1 NaCl溶液模拟盐胁迫条件时,与对照相比突变菌株菌落生长速度、产孢量和菌丝干重整体高于野生型菌株,尤其当诱变时间为3 min时,不同浓度盐胁迫下其产孢量平均增加51.18%,诱变时间为0.5 min时其菌丝干重平均增加23.65%;NaCl胁迫(10 mg·mL^-1)下,诱变处理0.5 min获得的正突变菌株经传代接种培养后其耐盐性较为稳定。因此,紫外诱变可作为一种选育高效耐盐木霉突变菌株的有效方法。     

六种杀菌剂对绿色木霉的毒力测定

６种杀菌剂对绿色木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ Ｐｅｓｅｘ Ｇｒａｙ）的毒力测定结果表明，绿色木霉对多菌灵，甲基托布津和力克菌较敏感，Ｅｃ５０分别是１．６９７ｍｇ．ｋｇ＾－１、５．５６６ｍｇ．ｋｇ＾－１和８．５７１ｍｇ．ｋｇ＾－１，对代森锰锌、消菌灵和粉锈宁硫敏感性较差，Ｅｃ５０分别是７７．３７ｍｇ．ｋｇ＾－１、８６．７７ｍｇ．ｋｇ＾－１和１６２．５ｍｇ．ｋｇ＾－１。可供协调生物防治和     

深绿木霉T2菌株对百合疫霉拮抗作用及机制

本文采用对峙培养、抗生物质测定、对扣培养、圆盘滤膜法、酶活性测定等方法,研究了深绿木霉对百合疫霉病菌的拮抗作用及机制。结果表明,深绿木霉T2菌株具有较强的营养竞争与重寄生作用;并发现其有抗生物质和溶菌酶类产生,对峙培养60 h时,深绿木霉生长速率是百合疫霉的3.68倍,能够与其竞争营养,抑制了百合疫霉的生长与扩展,深绿木霉寄生在百合疫霉菌丝上生长,导致百合疫霉菌丝降解;其代谢产物能够抑制百合疫霉的生长,48 h时难挥发性和易挥发性代谢产物对百合疫霉的抑菌率分别为85.07%和79.10%;深绿木霉T2菌株的发酵液有较高的β 1,3 葡聚糖酶活性,并在第5天达到峰值,为18.54U;深绿木霉发酵液对百合疫霉菌丝有降解作用。     

香菇菌糠对绿色木霉防治黄瓜枯萎病的增效作用

试验以栽培香菇剩余的菌糠为原料,采用室内抑菌试验和盆栽试验相结合的方法探讨了香菇菌糠对绿色木霉防治黄瓜枯萎病的增效作用。菌糠提取液对绿色木霉菌丝生长和孢子萌发表现促进作用,促进率分别为18.20%和9.82%;对黄瓜枯萎病菌菌丝生长和孢子萌发表现抑制作用,抑制率分别为11.85%和87.78%。香菇菌糠与木霉混合使用对黄瓜枯萎病的防效达70.26%,黄瓜的地上部分鲜重和根重分别增加了65.06%和58.10%。与单用木霉相比,加入香菇菌糠后绿色木霉在土体土、根际土和根系中定殖数量分别提高了251.39%、208.21%和104.76%,黄瓜枯萎病菌数量分别减少了56.98%、77.72%和76.83%。     

绿色木霉TR-8菌株对尖镰孢的拮抗机制

对绿色木霉TR-8菌株抑制尖镰孢的拮抗机制进行了研究。平板对峙培养结果表明，绿色木霉生长快于尖镰孢FO-G1，接触后FO-G1生长停止，TR-8继续生长，覆盖FO-G1的菌落并大量产孢，但不形成抑菌圈。观察了TR-8对FO-G1的重寄生现象，TR-8菌丝首先向FO-G1趋性生长，然后紧贴FO-G1菌丝平行生长或穿入菌丝生长，最后FO-G1菌丝瓦解。在扫描电镜下可以看到FO-G1菌丝原生质凝结，菌丝上有孔洞出现。发酵7d，TR-8发酵液中β-1，3-葡聚糖酶的活性为20．15U／ml，几丁质酶的活性为11．67U。发酵原液对FO-G1菌丝生长和孢子萌发均无抑制作用，但TR-8的挥发性分泌物对病菌孢子萌发具有一定的抑制作用。含有TR-8分泌物的培养基对病菌孢子萌发有很强的抑制作用，抑制率高达75．06％。     

绿色木霉发酵配方与防治油菜菌核病的研究

以绿色木霉Tv36为农抗产生菌,比较了多种液体培养基对Tv36产生抗生代谢物能力差异。根据几种较优配方的组分与用量,经正交试验得到产抗生代谢物的最优配方OTF。Tv36用OTF发酵并过滤后,对抗生代谢物进行了防治油菜菌核病的生物测定和田间试验。结果表明,Tv360－OTF发酵滤液对核盘菌菌丝生长有明显的抑制效果;Tv36－OTF滤液10、20、50倍3种不同的稀释倍数在油菜离体叶试验中均有明显的抑制病斑扩展的效果;Tv36－OTF农抗液剂20、50倍对油菜核病的田间防治效果分别达80．5％、68．6％,与菌核净防效相当。     

不同土壤湿度条件下绿色木霉对尖孢镰刀菌数量的影响

采用平板菌落计数法研究在不同土壤湿度条件下绿色木霉在土壤中的定殖动态及对尖孢镰刀菌数量的影响。结果显示：在3个土壤湿度条件下, 接种木霉后前4周均能显著降低镰刀菌的数量; 与对照2(CK-H06)相比, 处理(B2-H06)中木霉的孢子含量没有显著性变化。第1、2周, 对照1(CK-B2)与处理(B2-H06)的镰刀菌含量与土壤湿度呈显著性正相关; 在第5周, 处理(B2-H06)的镰刀菌和木霉菌含量与土壤湿度呈显著性负相关。     

绿色木霉菌固体发酵培养基优化组合正交筛选

以测定绿色木霉菌产孢量和分生孢子萌发率为指标,分析比较了5种单一固体培养基和7种一般组合固体培养基的发酵结果,初筛出单一培养基玉米碎粒、稻壳和麸皮以及一般组合培养基玉米碎粒+麸皮+稻壳+脲为基本培养基。在此基础上选取玉米碎粒、麸皮、稻壳、脲为4个组分因子进行不同配比的正交试验,筛选出6号为最佳组合配方,其分生孢子量最高为9.90×10¹⁰个/g,比初筛出的最佳基本培养基麸皮+脲(3.37×10¹⁰个/g)提高约3倍,孢子萌发率为95.01%。     

绿色木霉几丁质酶基因Tvchi cDNA的克隆、原核表达与活性分析

 利用RT PCR方法从绿木霉ZBS 6中扩增了几丁质酶基因Tvchi,序列分析表明Tvchi 开放阅读框为1 293 bp,编码430个氨基酸残基,Blast 分析表明,与多种木霉18家族内切几丁质酶具有较高的同源性。将该基因克隆到原核表达载体pET 28a上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS PAGE和Western印迹分析表明成功的获得了47 kD 的融合蛋白。该融合蛋白经Ni NTA柱亲和纯化,获得了纯度较高的融合蛋白Tvchi。Tvchi最适酶活温度为37℃,最适酶活pH值为6.8。表达产物对小麦全蚀病、赤霉病、纹枯病病原菌显示出较好的抑菌活性。本研究结果将为进一步研究木霉几丁质酶的应用提供了基础。     

哈茨木霉重组株L-15与野生株LTR-2贮存稳定性及生防活性研究

为比较哈茨木霉重组株L-15与野生株LTR-2在贮存稳定性及生防活性方面的差异,采用平板菌落计数法检测木霉可湿性粉剂中分生孢子的存活率,测定菌株的生物学特性,并在温室条件下评价制剂对番茄立枯病的防治效果。结果表明,分生孢子存活率达80.0%时,在5℃和室温(2℃～36℃)下,L-15可湿性粉剂的货架期分别为24个月和9个月,显著高于LTR-2可湿性粉剂的12个月和6个月。L-15的潮霉素抗性在贮存后稳定遗传,其β-1, 4-葡聚糖酶水解活性、几丁质酶水解活性及平板拮抗活性较LTR-2明显提高。5℃贮存60月后,L-15可湿性粉剂10×和100×稀释处理对番茄立枯病的温室防治效果分别达89.27%和86.52%,与LTR-2处理间存在极显著性差异(P0.01)。重组株L-15的货架期和生防活性较野生株LTR-2明显提高,在生物防治领域具有潜在应用价值。     

哈茨木霉LTR-2双价基因重组菌株的构建及其防治效果

本文利用限制性内切酶介导法转化哈茨木霉LTR-2,获得具有双价基因(glu14、chi42)的重组生防菌株.试验得到的木霉转化子具有遗传稳定性,于无药PDA平板上连续转接6次后,在Hyg 200 μg/mL的PDA平板上仍可继续生长.PCR扩增及Southern杂交证实目的基因已随机插入木霉基因组DNA上,本试验转化子均为单拷贝插入.转化子的β-1,4-葡聚糖酶和几丁质酶水解活性较出发菌株LTR-2显著提高(P＜0.01),其中转化子L-15的两种水解酶活性均最高.转化子在温室条件下对番茄晚疫病、茄子猝倒病和黄瓜灰霉病均有较好的防治作用,但不同处理间存在显著性差异(P＜0.01),其中转化子L-15最高,对3种病害的防治效果分别达到了91.5％、94.9％和83.8％,较出发菌株LTR-2处理分别提高了53.5％、55.9％和33.5％.结果表明,利用REMI技术,将β-1,4-葡聚糖酶基因glu14和几丁质酶基因chi42重组到木霉染色体DNA上,是获得高效重组菌株的有效手段.     

通过染色体整合β-1,4-葡聚糖酶基因glu14提高绿色木霉对小麦纹枯病的防治效果

 绿色木霉LTR-2是生物防治菌株。利用来自巨大芽胞杆菌Ap25的β-1,4-葡聚糖酶基因glu14构建木霉表达载体pSilent/glu14,利用限制性内切酶介导法(REMI)转化绿色木霉LTR-2。PCR扩增及Southern杂交证实目的基因已插入木霉转化子的染色体DNA上。转化子的β-1,4-葡聚糖酶水解活性,对小麦纹枯病菌的平板抑制作用及温室防治效果较原始菌株LTR-2明显提高(P<0.01),其中转化子L-10的效果最好,平板抑制率比LTR-2提高了27.0%,温室防治效果比LTR-2提高了26.7%。本试验表明,利用REMI技术,将β-1,4-葡聚糖酶基因重组到木霉染色体DNA上,是获得高效木霉工程菌株的有效手段。