抗生素对薰衣草愈伤组织诱导和生长的影响

研究了卡那霉素(Kanamycin)和头孢霉素(Cefotaxime)对法国孟士德薰衣草(Lavandula angustifolia,cv. Munstead)愈伤组织诱导和生长的影响.结果表明:在以卡那霉素为抗性选择标记时,叶盘的选择压力为10 mg/L,愈伤组织的选择压力为20 mg/L;在以头孢噻肟钠为抑菌剂用于薰衣草叶盘遗传转化实验时,其浓度为200 mg/L时即可有效抑制农杆菌的生长,同时又不会对薰衣草愈伤组织产生明显的伤害作用.     

卡那霉素对马齿苋愈伤组织诱导和生长的影响

[目的]确定马齿苋遗传转化时适宜的卡那霉素筛选浓度。[方法]在诱导愈伤组织培养基和愈伤组织增殖培养基中添加不同浓度的卡那霉素,通过统计愈伤组织诱导率和愈伤组织增长率来研究卡那霉素对马齿苋愈伤组织诱导和生长的影响。[结果]卡那霉素对愈伤组织诱导的影响很大,当卡那霉素浓度为20 mg/L时严重抑制了愈伤组织的诱导,而其愈伤组织在卡那霉素浓度为100 mg/L时仍能少量生长,但随着卡那霉素浓度的增大,增长速度变慢,褐化程度逐渐增加。[结论]在进行马齿苋的遗传转化时,愈伤组织诱导阶段可采用20 mg/L卡那霉素作为选择压,如果直接以愈伤组织为转化受体,则可采用80 mg/L作为选择压。     

苏丹草农杆菌介导法基因转化条件

以苏丹草幼穗诱导产生的胚性愈伤组织为材料,比较了抗生素羧苄青霉素、头孢霉素及筛选剂卡那霉素对愈伤组织生长、绿芽分化和绿苗生长的影响.结果表明:500 mg/L的羧苄青霉素对愈伤组织生长的影响与对照差异不明显,可提高愈伤组织绿苗分化率;500 mg/L的头孢霉素明显抑制愈伤组织的生长,对分化影响不大;愈伤组织生长期筛选剂卡那霉素浓度为75 mg/L时,愈伤组织的褐化率达到100%;愈伤组织分化期,卡那霉素浓度为10 mg/L时,绿芽能分化成幼苗,所有幼苗的心叶白化、生长速度与对照无差异.培养基中添加500 mg/L的羧苄青霉素、经农杆菌侵染和15 mg/L卡那霉素筛选获得再生植株,经PCR检测,初步证明NPTⅡ选择标记基因已整合到部分转化植株的基因组中.     

中华猕猴桃遗传转化受体系统的建立

以中华猕猴桃伏牛95-2的组培苗叶片为外植体,研究不同浓度生长调节剂对其愈伤组织、不定芽诱导和生根的影响及其对卡那霉素的敏感性,从而建立高效稳定的中华猕猴桃伏牛95-2的受体系统.结果表明,中华猕猴桃伏牛95-2的最佳愈伤组织及不定芽诱导培养基为MS+ 1.0 mg/L ZT+0.3 mg/L NAA,在此培养基条件下,其不定芽分化率、每个叶盘不定芽的分化数均较高,分别为87.50％、4.2个;最佳生根培养基为1/2MS +2.0 mg/L NAA,生根率达100.00％.当卡那霉素浓度大于10 mg/L时,能够明显抑制愈伤组织的生长,且随着浓度的增加,愈伤组织死亡率逐渐增大;当卡那霉素浓度为20 mg/L时,愈伤组织及不定芽的分化率均为0,因此20 mg/L卡那霉素浓度为中华猕猴桃伏牛95-2叶片遗传转化的最佳筛选浓度.     

两种抗生素对阿拉巴马花烛植株再生的影响

花烛（Anthurium andraeanum Lind）是世界第二大热带盆栽花卉,其转基因育种具有巨大的应用前景。以 花烛为材料,研究不同浓度卡那霉素和潮霉素对阿拉巴马花烛植株再生的影响,结果表明;卡那霉素和潮霉素均能 促使外植体严重褐变死亡,同时,二者对愈伤组织和芽的诱导具有明显抑制作用;当以叶片或叶柄为转化受体时,选 择压以100 mg/L 卡那霉素或20 mg/L 潮霉素为宜;当以愈伤组织为转化受体时,选择压以150 mg/L 卡那霉素或40 mg/L 潮霉素为宜;两种抗生素对生根亦具有抑制作用,选择压则以150 mg/L 卡那霉素或40 mg/L 潮霉素为宜。     

反义AcInv基因转化马铃薯方法的研究

马铃薯反义AcInv基因,采用农杆菌介导法,选用生产上推广的9个普通四倍体栽培种,对影响转化的各个因素进行了优化研究。结果表明:在愈伤组织诱导过程中,卡那霉素(Km)的适宜浓度为100 mg/L;生根过程中为50 mg/L。外植体的预培养为:茎段2 d,叶盘3 d效果较好;农杆菌浓度当OD600值为0.5时对茎段和叶盘的转化效果均较佳;茎段和叶盘侵染时间分别达8 min和10 min时转化率较高;外植体与农杆菌共培养时间分别为2 d和3 d时,茎段和叶盘的转化率较高;各个品种的外植体在卡那霉素抗性培养基上均能形成愈伤组织,但只有1号(“大西洋”)最后从愈伤组织上分化成苗,形成正常植株,植株再生率为11.2 %,PCR扩增检测表明大部分转基因植株为阳性。     

抗生素对高粱愈伤组织诱导和生长的影响

用羧苄青霉素等抗生素进行抑菌试验,以羧苄青霉素和头孢霉素的抑菌效果较好.头孢霉素对高梁愈伤组织的毒性表现出比羧苄青霉素大.浓度低于500 mg/L羧苄青霉素对高梁愈伤组织的生长起促进作用;而分化率随着羧苄青霉素浓度的提高而下降.在农杆菌介导高梁遗传转化时,选用羧苄青霉素是合适的,浓度以250 mg/L为宜.高梁愈伤组织对潮霉素的反应比卡那霉素更敏感,高梁不同基因型愈伤组织对卡那霉素和潮霉素的反应在褐化(死亡)率上表现不同.在以潮霉素作为抗性筛选标记时,选择压以50～75 mg/L为宜.     

抗生素对细枝木麻黄愈伤组织再生及农杆菌生长的影响

以细枝木麻黄3个无性系水培苗作为材料,研究了硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate,Km)对细枝木麻黄愈伤组织诱导、增殖和芽分化的影响,以及头孢霉素(cefotaxime,Cef)、羧苄青霉素(carbenicillin,Cab)和氨苄青霉素(ampicillin,Amp)对农杆菌的抑制效果。结果表明,Km对细枝木麻黄愈伤组织诱导适宜的选择压力是20mg/L,Km选择性筛选愈伤组织增殖的适宜质量浓度为40mg/L,愈伤组织芽分化的选择压力是40～50mg/L。在抗生素抑菌效果方面,Cef质量浓度为200mg/L、Cab300mg/L和Amp500mg/L能完全抑制农杆菌的生长。综合比较,对细枝木麻黄遗传转化研究最理想的抑菌剂是Cef,使用质量浓度低且能有效抑制根癌农杆菌的生长。     

金鱼草基因转化中卡那霉素筛选压力的确定

在以抗生素为筛选标记的基因转化中,确定适宜的筛选压力是提高基因转化率的前提。本研究以卡那霉素为筛选标记,在10、20、30、50和100mg／L的筛选压力下,根据金鱼草下胚轴外植体的生长表现、愈伤组织和芽的分化率确定适宜的筛选浓度。结果表明,适宜卡那霉素的筛选浓度为50mg／L。以此浓度为筛选压力进行遗传转化所获得的部分再生苗经Southernblot鉴定,均为转化株。     

洋葱胚性愈伤组织的诱导及胚状体萌发的研究

以洋葱雄性不育系种子（10-8F）为材料,研究Picloram浓度对愈伤组织诱导及BA和2,4-D浓度配比对胚性愈伤组织诱导的影响,同时为探明胚状体发生的条件,研究了GA。和ABA对胚状体发生的影响。研究结果表明,洋葱愈伤组织在Picloram浓度为1mg／L时出愈率最高,达到72．3％;MS培养基中添加2mg／L BA和0．25mg／L2,4-D时促进胚性愈伤组织的诱导,诱导率（56．7％）显著高于其它处理;ABA浓度为0．5mg／L时胚状体萌发率（70．73％）最高且生长情况最好,但GA。对洋葱胚状体的萌发起抑制作用。     

水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究

以MS培养基为基本培养基,采用液体培养的方式,通过调节2,4-D,6-BA及蔗糖浓度,对粳稻南农4007愈伤组织的增殖进行了初步研究。结果表明：2,4-D浓度在0.0～4.0mg/L时对水稻愈伤组织的增殖和生长有一定的影响,6-BA浓度在0.2～3.2mg/L、蔗糖浓度在10～50g/L时对愈伤组织增殖生长差异不显著,但当2,4-D为2.0mg/L、6-BA为0.8mg/L,蔗糖为20g/L时,其愈伤组织不论从生长状态,还是增殖速度上都较好且褐化程度相对较轻。适合粳稻南农4007愈伤组织液体增殖培养的基本配方为MS＋NAA0.5mg/L＋2,4-D2.0mg/L＋水解络蛋白1g/L＋蔗糖20g/L＋6-BA0.8mg/L。     

荻幼穗愈伤组织诱导及无性系的建立

以获幼穗为外植体诱导出愈伤组织,并建立了体细胞无性系,获得了大量试管苗。幼穗愈伤组织诱导率与发育时期及转管培养降低紫色分泌物浓度有密切关系。BA和2,4-D配合使用有利于胚性愈伤组织的形成,在2,4-D 2mg/L+BA(或KT)0.1mg/L的培养基上。从愈伤组织表面产生浅黄色、质地致密的胚性愈伤组织。愈伤组织转入无激素培养基上培养,也有利于胚性愈伤组织的形成。为了形成大量试管苗,进行了愈伤组织的继代培养和试管苗的增殖研究,再生能力通过无性系得到保持。     

NAA、2,4-D对崇明水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)愈伤组织的诱导及再生的不同影响

目前水仙组织培养过程中愈伤组织的诱导是一大难题.本文以带鳞片的鳞茎盘为外植体,研究了2,4-D、NAA 2种类型的生长素对水仙组织培养中愈伤组织诱导的影响.结果表明,高浓度的2,4-D (3.0～4.0 mg/L)结合6-BA能诱导无色瘤状愈伤组织,中等浓度的2,4-D (0.5 mg/L)有利于芽点的诱导和瘤状愈伤组织的增殖,而较低浓度的2,4-D (0.1 mg/L)有利于诱导出小鳞茎,也能促使瘤状愈伤组织再生成苗.而NAA结合6-BA不能诱导愈伤组织的形成.高浓度的NAA不仅诱导未分化的分生组织细胞分裂,也能促进分化的细胞进行分裂,从而使形成白色凸起状结构.另外,培养基中这2种激素互换可以使组织培养过程中形成的愈伤组织或白色突起发生相互转换.这些结果说明,水仙组织培养过程中愈伤组织的诱导和不同形态的器官发生与培养基中生长素种类和浓度关系密切.     

不同激素对杂交魔芋愈伤诱导及植株再生的影响

以杂交魔芋球茎为外植体,以添加不同种类和浓度的生长素及细胞分裂素的MS为培养基,研究不同浓度激素配比对魔芋愈伤组织诱导形成、增殖、分化以及植株再生等的影响。结果表明:6-BA浓度在3.0 mg/L时,对魔芋愈伤组织的诱导率最高,达到90%;6-BA与NAA配合使用时,有利于提高愈伤组织分化率,6-BA浓度在0.5~1.0 mg/L、NAA浓度在0.1~0.5 mg/L时,成苗率均较高,其中6-BA浓度在1.0 mg/L、NAA浓度在0.1 mg/L时,愈伤分化率最高,达到84.4%,成苗率达到253%;NAA浓度在0.2~0.5 mg/L时,生根率最高,达到247%。综合以上不同浓度及激素配比的作用效果,认为适合杂交魔芋麻杆球茎植株再生的最适愈伤诱导培养基是MS+6-BA 3.0 mg/L;最适愈伤分化及芽分化培养基是MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L;最适生根培养基是1/2 MS+NAA 0.2~0.5 mg/L。     

头孢类抗生素对农杆菌介导非洲菊基因转化的影响

研究了头孢曲松钠、头孢哌酮钠、头孢唑林钠、头孢拉定4种头孢霉素类抗生素对农杆菌LBA4404的抑制作用和对非洲菊愈伤组织的诱导及丛生芽形成的影响,结果表明:4种头孢类抗生素在作为抑菌剂用于非洲菊遗传转化试验时,头孢曲松钠的抑菌效果最好,浓度以200 mg/L为宜,同时该抗生素在低浓度下能提高愈伤组织诱导率和丛生芽诱导率,在高浓度下则抑制愈伤组织和芽的形成,有类似植物激素的活性。     

萝卜组织和器官的离体培养

本试验以萝卜品种"鲁萝卜一号"为试材,对其不定芽和愈伤组织的诱导、增殖和分化进行了探讨。结果表明:带下胚轴的茎端为不定芽诱导适宜外植体;MS+3mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA为不定芽继代增殖的适宜培养基,但在该种培养基上继代5次后,需适当提高6-BA浓度,才能保持较高的增殖水平;以子叶为外植体,培养基为MS+3mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA时,有利于愈伤组织的诱导;在此培养基中添加5mg/L AgNO3有利于愈伤组织继代与保存;愈伤组织转接在培养基MS+6mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+5mg/L AgNO3上,获得了再分化芽。     

陕西卫矛组织培养再生体系的建立

为建立陕西卫矛高效再生体系,以幼茎为外植体诱导愈伤组织,在成功继代愈伤组织的基础上,进行愈伤组织再分化培养研究。采用正交设计方法,考察了6-BA、NAA及Ca2+3个因素对陕西卫矛愈伤组织再分化率的影响。结果表明:再分化培养基中添加3mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA+5mmol/L Ca2+,能明显提高陕西卫矛愈伤组织的再分化率。     

高羊茅成熟种子组织培养的影响因素研究:Ⅱ.不同因素对胚性愈伤组织继代发生的影响

以从4个草坪型高羊茅品种成熟种子直接诱导获得的初始愈伤组织为起始材料，研究3种因素对胚性愈伤组织继代发生的影响。结果表明，继代培养基中添加BAP和硫酸铜以及提高蔗糖浓度均能促进胚性愈伤组织形成，提高胚性愈伤组织频率，其适宜浓度分别为：BAP0．1～0．2mg/L，硫酸铜2．5mg/L，蔗糖60g／L。这3种因素中，又以添加BAP的效果最好，添加硫酸铜次之。4个供试品种间胚性愈伤组织发生能力存在明显差异。