羟基喜树碱对乳腺癌细胞MCF-7细胞信号转导相关基因的影响

目的:从全基因组角度探索羟基喜树碱对乳腺癌细胞MCF-7细胞信号转导相关基因的影响,寻找羟基喜树碱在乳腺癌治疗中潜在的新靶点.方法:HCPT诱导MCF-7细胞,MTT法检测HCPT对细胞增殖抑制.选择40 mg/mL的HCPT作为诱导剂量组,并设置阴性对照,进行基因组芯片杂交实验.结果:HCPT对MCF-7细胞的增殖抑制作用均呈浓度依赖性,即随着HCPT浓度的增高,MCF-7的增殖受到明显抑制.HCPT诱导后,共获得了表达下调基因46个,表达上调基因9个,其中insulin-like growth factor binding protein1(IGFBP1)是表达下调(-4.010 31)最大的信号转导基因,表达上调最大的信号转导相关基因是一广谱表达基因hemoglobin2(HBG2)(+3.804 527),它在癌症发生中的作用未知.Q-PCR实验结果与芯片结果具有良好的一致性.结论:HCPT诱导乳腺癌细胞增殖抑制,可能涉及多个基因.     

重组质粒pDsRed1-C1-PinX1的建立及其在乳腺癌MCF-7细胞中的表达

目的构建PinX1真核表达载体,观察PinX1基因对乳腺癌MCF-7细胞生长和增殖的影响。方法重组质粒转染MCF-7细胞并筛选稳定表达系;用Real-timePCR检测PinX1基因mRNA的表达;MTT法检测转染前后细胞生长变化;平板克隆形成试验检测PinX1对MCF-7集落形成能力的影响。结果构建了真核表达载体PDsRed1-C1-PinX1的稳定表达系;转染后乳腺癌MCF-7细胞生长明显减缓,集落形成能力降低。结论 PinX1基因可抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长和增殖。     

GOLPH3基因对宫颈癌细胞Hela迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨GOLPH3基因对宫颈癌细胞Hela迁移和侵袭能力的影响.方法 通过脂质体转染法将GOLPH3的表达质粒和靶向GOLPH3的siRNA转入Hela细胞内;通过荧光实时定量PCR检测GOLPH3基因的相对表达量,Transwell实验检测Hela细胞迁移和侵袭能力.结果 荧光实时定量PCR结果显示,与NC组(0.990±0.005)相比,siRNA组GOLPH3表达量(0.383±0.020)显著降低(P＜0.01),与pcDNA组(0.997±0.029)相比,GOLPH3组GOLPH3表达量(3.333±0.219)显著升高(P＜0.01).Transwell细胞迁移实验结果显示,NC、siRNA、pcDNA和GOLPH3组具有迁移能力的细胞数分别为(172.30±4.33)、(75.00±3.79)、(163.70±3.93)和(258.00±4.93).Transwell细胞侵袭实验结果显示,NC、siRNA、pcDNA和GOLPH3组具有侵袭能力的细胞数分别为(53.67±2.96)、(26.67±2.73)、(51.67±2.19)和(81.67±3.38).结论 上调GOLPH3基因表达可促进宫颈癌细胞迁移和侵袭能力;反之,抑制其表达可抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭能力.     

茶氨酸衍生物TClC脂质体对雌激素受体阳性的 乳腺癌细胞生长和迁移的抑制作用

为研发抗癌新药,使用茶氨酸衍生物茶氯香酰胺TClC制备纳米脂质体(TClC-L),研究TClC-L对雌激素受体阳性的人乳腺癌MCF-7细胞生长和迁移的抑制作用,并深入探究可能的作用机制。分别采用MTT和Transwell chamber实验方法探究各浓度TClC-L对MCF-7细胞的生长和迁移的抑制作用;使用流式细胞术(FCM)检测TClC-L对MCF-7细胞凋亡的影响;应用Western blotting检测MCF-7细胞生长和迁移有关蛋白和酶的表达。实验结果显示,TClC-L对MCF-7细胞生长和迁移有显著的抑制、对癌细胞的凋亡表现促进作用;TClC-L明显下调受体蛋白p-VEGFR~2、Met和ER-α、抗凋亡蛋白Bcl-2、Cyclin D1、Akt和NF-?B的表达,上调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3、p53和p21的表达。TClC-L作用的分子机制可能与抑制VEGFR/Met/ER-α-Akt/NF-?B信号传导通路有关。本研究显示了TClC-L有潜在的治疗雌激素受体阳性乳腺癌的作用。     

紫草素诱导乳腺癌细胞凋亡的研究

以MTT法测定紫草素对乳腺癌细胞株MCF-7等的生长抑制作用,并通过形态学分析、Hoechst荧光染色、流式细胞术及免疫印迹等观察紫草素诱导乳腺癌细胞凋亡的形态学、生化特征改变及凋亡的可能机制.结果表明:紫草素对乳腺癌细胞株有显著抑制生长作用,效应呈时间和剂量的依赖性,24h半数抑制浓度(IC50)均在10μmol·L-1以下.紫草素诱导MCF-7等乳腺癌细胞发生典型的细胞凋亡,细胞周期阻滞于S期,凋亡过程中产生了85ku大小的PARP裂解片段,此效应可被广谱caspase抑制剂抑制,表明紫草素可能经caspase途径诱导MCF-7细胞发生凋亡.     

黄芪解毒汤诱导乳腺癌细胞凋亡及对β-catenin、C-myc基因表达影响的研究

目的 探讨黄芪解毒汤体外干预人乳腺癌细胞MCF-7凋亡及对β-catenin、C-myc基因表达的影响,及该方抑制乳腺癌复发转移的可能机制。方法 培养MCF-7细胞并将其分为黄芪解毒汤组、阿霉素组及空白对照组。以黄芪解毒汤浓缩液、阿霉素液及细胞培养液分别干预各组MCF-7细胞24h后,以流式细胞仪检测其对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响,实时荧光定量PCR检测其对β-catenin, C-myc基因表达的影响。结果 与空白对照组比较,黄芪解毒汤组、阿霉素组可明显诱导MCF-7细胞的凋亡（P<0.01）;黄芪解毒汤组及阿霉素组β-catenin、C-myc表达量明显低于空白对照组（P<0.01）。结论 黄芪解毒可诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡,显著降低β-catenin、 C-myc基因表达,该结果为黄芪解毒汤在乳腺癌术后治疗中的应用提供实验依据。     

FBXO31对肺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨FBXO31基因对肺腺癌细胞系A549增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响.方法 通过脂质体转染法将FBXO31表达质粒及FBXO31 siRNA序列分别转染肺癌A549细胞,用Western blot、MTT、平板克隆、划痕和Transwell实验分别检测A549细胞中FBXO31蛋白表达、细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力.结果Western blot显示FBXO31表达质粒转染上调A549细胞中FBXO31蛋白表达,而转染siRNA下调FBXO31蛋白表达.FBXO31基因过表达增强A549细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力,而FBXO31基因沉默抑制细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力(P＜0.01).结论FBXO31基因可促进肺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力.     

4-氨基吡啶抑制耐顺铂肺癌细胞系A549/DDP侵袭转移

目的 探讨4-氨基吡啶(4-AP)对耐顺铂肺癌细胞系A549/DDP侵袭转移的影响及分子机制.方法 将不同浓度4-AP处理A549/DDP细胞48 h,Transwell和Boyden法观察肺癌细胞迁移侵袭能力,Western blot检测细胞侵袭转移相关的调控上皮-间质转化(EMT)蛋白.结果 5 mmol/L、7 mmol/L 4-AP组细胞迁移、侵袭数明显少于对照组(P＜0.01或0.05),其中7 rnmol/L组更显著.与对照组比较,4-AP组细胞上皮型钙粘附蛋白(E-cadherin)表达上调,神经型钙粘附蛋白(N-cadherin)和Snail表达下调.结论 4-AP可能通过调控EMT蛋白的表达抑制耐顺铂肺癌细胞A549/DDP侵袭转移.     

隐丹参酮对人胆管癌HCCC-9810细胞增殖、survivin基因及caspase-3蛋白表达的影响

目的 了解隐丹参酮对人胆管癌HCCC-9810细胞增殖及凋亡相关因子surv1vin、caspase-3表达的影响.方法 HCCC-9810细胞用不同浓度隐丹参酮处理24、48、72 h,分别用MTT法、RT-PCR、Western blot检测细胞生长及survivin mRNA、caspase-3蛋白表达.结果 隐丹参酮抑制HCCC-9810细胞增殖;随时间延长,HCCC-9810细胞中survivin mRNA表达逐渐降低,而caspase-3蛋白表达逐渐增高(P＜0.05).结论 隐丹参酮可通过下调survivin基因表达及上调caspase-3蛋白表达来诱导HCCC-9810细胞凋亡.     

牡丹种皮乙酸乙酯提取物抗癌活性研究

研究了牡丹种皮乙酸乙酯提取物对人源性乳腺癌细胞株(MCF-7)的增殖抑制率及细胞活性的影响。制备不同浓度梯度的牡丹种皮乙酸乙酯提物作用于MCF-7细胞,通过细胞形态学分析,AO/PI双染色,MTT法和线粒体膜电位法检测MCF-7细胞的生长活力,增殖抑制能力和线粒体膜电位变化。研究结果表明,当牡丹种皮乙酸乙酯提物质量浓度为5 mg/mL时,对MCF-7细胞的抑制效果最佳,细胞抑制率可达89.67%,并且在药物作用下,细胞活性和线粒体膜电位均明显下降。牡丹种皮乙酸乙酯提取物对乳腺癌细胞MCF-7的生长有抑制作用,能够降低细胞活性,促使MCF-7细胞线粒体膜电位降低,诱导细胞产生凋亡现象。     

Transfection of v-rasH DNA into MCF-7 human breast cancer cells bypasses dependence on estrogen for tumorigenicity

The natural history of estrogen-responsive breast cancers often involves a phenotypic change to an estrogen-unresponsive, more aggressive tumor. The human breast cancer cell line, MCF-7, which requires estradiol for tumor formation in vivo and shows growth stimulation in response to estradiol in vitro, is a model for hormone-responsive tumors. The v-rasH onc gene was transfected into MCF-7 cells. The cloned MCF-7ras transfectants, which expressed the v-rasH messenger RNA and v-rasH p21 protein (21,000 daltons), were characterized. In contrast to the parental cell line, MCF-7ras cells no longer responded to exogenous estrogen in culture and their growth was minimally inhibited by exogenous antiestrogens. When tested in the nude mouse, the MCF-7ras cells were fully tumorigenic in the absence of estrogen supplementation. Thus, cells acquiring an activated onc gene can bypass the hormonal regulatory signals that trigger the neoplastic growth of a human breast cancer cell line.     

miR-142-3p在MCF-7细胞中靶向调节AKT pathway活性机理

为探究miR-142-3p在MCF-7细胞中作用机理,采用RNA免疫共沉淀技术和双荧光素酶报告基因技术筛选及验证miR-142-3p作用靶基因;蛋白质免疫印迹技术验证靶基因及其介导的PI3K-AKT-mTOR信号通路蛋白表达量及通路活性;应用实时荧光定量PCR验证靶基因PTEN对miR-142-3p调节关系。结果表明,miR-142-3p靶向调节AKT和PTEN表达;miR-142-3p过表达组中PI3K-AKT-mTOR通路活性显著降低;miR-142-3p抑制组中PI3K-AKT-mTOR通路活性显著上升;抑制PTEN表达显著提高miR-142-3p表达量。因此miR-142-3p靶向调节AKT和PTEN表达继而抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路活性,PTEN与miR-142-3p存在调节关系。     

漆姑草石油醚提取物化学成分分析及抗肿瘤活性筛选

[目的]对漆姑草[Sagina japonica（Sw.）Ohwi]石油醚提取物的化学成分进行分析鉴定,并对其抗肿瘤活性进行研究。[方法]采用GC-MS联用技术分析漆姑草石油醚提取物的化学成分;选用3种人癌细胞株（人白血病K562细胞株、人宫颈癌Hela细胞株和人乳腺癌MCF-7细胞株）,采用MTT法和SRB法,对其抗肿瘤活性进行研究。[结果]从漆姑草石油醚提取物中分离鉴定出25种成分,其中脂肪酸含量最多,亚油酸含量达49.318%;漆姑草石油醚提取物对人白血病K562细胞株的生长具有微弱的抑制作用,对人宫颈癌Hela细胞株和人乳腺癌MCF-7细胞株均无抑制作用。[结论]该研究可为漆姑草资源在临床上的广泛应用奠定基础。     

Growth arrest and morphological change of human breast cancer cells by dibutyryl cyclic AMP and L-arginine

The growth in vitro of human breast cancer cells, line MCF-7, was inhibited by a daily supplement of L-arginine (1 milligram per milliliter). Arginine acted synergistically with dibutyryl adenosine 3',5'-monophosphate (cyclic AMP) (10(-6) molar) to enhance the growth inhibitory effect: the cell replication ceased completely within 2 days after treatment. The growth arrest accompanied a change in cell morphology and was preceded by increases in the cellular concentration of cyclic AMP, adenylate cyclase, and type II cyclic AMP-dependent protein kinase activities as well as a decrease of estrogen binding activity. The results suggest that growth of human breast cancer cells is subject to cyclic AMP-mediated regulation and that arginine may play a specific role in this process.     

乳腺肿瘤基质金属蛋白酶-13的表达及其临床意义

目的探讨乳腺肿瘤中基质金属蛋白酶（MMP）-13的表达及其与其他生物学指标和临床预后的关系。方法采用组织芯片及免疫组织化学SP法检测183例乳腺癌组织和30例乳腺良性疾病组织中MMP-13、ER、PR、HER2、MMP-2、MMP9、表皮生长因子受体（EGFR）、基质金属蛋白酶组织抑制因子TIMP-1、TIMP-2的表达并分析相互关系,同时分析MMP-13与肿瘤临床病理分期、淋巴结转移状态、组织学分级、肿瘤大小、年龄、月经状态、病理类型、雌孕激素受体状态以及临床预后等的关系。结果MMP-13的表达与TIMP-1、TIMP-2均呈负相关,与HER2的表达呈正相关,而与ER、PR、MMP-2、MMP-9、EGFR的表达水平不相关。MMP-13的表达与淋巴结转移和高组织学分级相关（均P〈0．01）。MMP-13低表达组10年生存率与高表达组10年生存率差异有统计学意义（98．4％vs68．3％,P〈0．01）。结论MMP-13蛋白与浸润性乳腺癌的侵袭和转移相关,可作为判断预后不良的指标。     

Estrogen-induced factors of breast cancer cells partially replace estrogen to promote tumor growth

The hormone 17 beta-estradiol acts through its receptor system to induce MCF-7 human breast cancer cells to form tumors in athymic mice. In vitro studies have identified the production of estrogen-induced growth factors from MCF-7 cells that may have a role in growth control. These induced growth factors were sufficient to stimulate MCF-7 tumor growth in ovariectomized athymic mice, thus partially replacing estradiol. Growth factors may act as estrogen-induced "second messengers" in estrogen-responsive growth of human breast cancer.     

Human breast cancer: androgen action mediated by estrogen receptor

Growth of the human breast cancer cell line MCF-7 is enhanced by androgens, but only at pharmacological concentrations. Although physiological concentrations of androgens translocate the androgen receptor into the nucleus, no mitogenic effects are observed. By contrast, pharmacological androgens translocate not only the androgen receptor but also the estrogen receptor, and at these high doses significantly increase both DNA and estrogen-dependent protein synthesis. We therefore propose that androgens stimulate MCF-7 cell growth not through the androgen receptor but rather through the estrogen receptor.     

肝癌组织中PTEN和TIMP-3的表达及其临床意义

目的探讨抑癌基因PTEN和TIMP-3在肝细胞性肝癌（HCC）组织中的表达及其临床意义。方法收集30例HCC、癌旁组织和10例正常肝组织,用qRT-PCR、Western blot、免疫组化SP法检测PTEN、TIMP-3mRNA和蛋白表达,分析PTEN和TIMP-3表达与HCC临床病理特征的关系。结果癌组织中PTEN和TIMP-3mRNA和蛋白表达均明显低于癌旁组织、正常肝组织（P〈0.01）,且在癌旁组织中的表达亦明显低于正常肝组织（P〈0.01）。PTEN和TIMP-3蛋白表达在肝外转移、分化差、血清AFP≥400μg/L和Ⅲ～Ⅳ期肝癌组织中的表达明显低于无肝外转移、分化好、血清AFP〈400μg/L和Ⅰ～Ⅱ期肝癌（P〈0.01或0.05）者;两者在是否伴有肝硬化和不同肿瘤大小肝癌组织中的表达均无统计学意义（P〉0.05）。结论 HCC癌组织中PTEN和TIMP-3表达下调,表达水平有助于判断HCC侵袭转移能力、临床分期和肝外转移。