农杆菌介导的茄子愈伤组织遗传转化研究

以茄子愈伤组织为材料,在优化愈伤组织成苗培养基的基础上,采用正交试验,进行农杆菌介导的茄子愈伤组织遗传转化研究.结果显示,在MS+6-BA(1 mg·L-1)+IAA(0.2 mg·L-1)+KT(1.5 mg·L-1)的培养基上茄子的愈伤组织诱导成苗率最高.结果表明,影响茄子愈伤组织转化的主要因素是预培养时间,其次是侵染时间,再次是共培养时间,并且预培养9 d.侵染20 min,共培养1 d时转化率最高.分子检测表明,11株阳性植株中有7株成功扩出bar基因序列,说明这7株为转基因植株,转基因植株占阳性植株的比率为63.6%.     

农杆菌介导的玉米自交系愈伤组织的转化

以农杆菌LBA4 4 0 4介导将外源基因导入玉米骨干自交系齐 319、掖 5 15、掖 5 0 2等胚性愈伤组织 ,并由筛选出的抗性愈伤组织再生出可育植株。农杆菌浓度、共培养时间和玉米的基因型显著影响农杆菌介导的玉米愈伤组织的转化率。农杆菌的浓度OD60 0 0 5～ 0 7,共培养时间 3～ 4天时转化率较高。在相同条件下不同基因型的玉米胚性愈伤组织的转化率为 3 3%～ 10 %。     

农杆菌介导的紫穗槐茎段愈伤组织遗传转化研究

采用农杆菌介导法对紫穗槐茎段诱导的愈伤组织进行遗传转化研究。确定了卡那霉素临界耐受浓度为40mg/L。菌液浓度与侵染时间的正交试验结果表明:侵染菌液OD600为0.8、侵染时间为30min时转化效率最高,达17.95%。GUS染色检测分析表明:含pBI121-GUS质粒DNA农杆菌侵染转化的愈伤组织其抗性不定芽和再生植株根和叶均呈蓝色。转化植株叶PCR检测结果表明外源GUS基因已整合到紫穗槐基因组中。以上结果表明建立了以茎段诱导愈伤组织为转化受体、农杆菌介导的紫穗槐高效遗传转化体系。为了验证其可重复性,又进行了pBI121-GFP基因的转化,T0代再生植株PCR检测整合率达85%,在488nm蓝光源激发下转化株的顶芽产生绿色荧光,说明转入的基因在35S启动子下过量表达。此遗传转化体系可应用于转基因育种。     

根癌农杆菌介导苹果愈伤组织遗传转化体系的优化

[目的]以'王林'苹果愈伤组织为转化研究的材料,在已经建立的遗传转化基础上,优化根癌农杆菌介导的'王林'愈伤组织的遗传转化系统.[方法]在遗传转化的过程中,通过对根癌农杆菌的侵染时间、共培养以及抗性的选择,优化遗传转化体系并且增加转化效率.[结果]选择生长20 d的愈伤组织,在根癌农杆菌OD600=0.8时侵染20 min,共培养3d、转入卡那霉素30 mg/L和头孢噻肟250 mg/L的培养基上进行筛选,可显著提高遗传转化效率.[结论]将McmiR 399d作为标记基因进行转化,优化苹果'王林'愈伤组织的遗传转化系统,从而得到过表达和沉默的McmiR399d'王林'愈伤组织.     

农杆菌介导玉米幼胚愈伤组织遗传转化体系的优化

以玉米骨干自交系‘郑58’的幼胚为材料,用农杆菌介导法对诱导培养出的胚性愈伤组织进行三价植物表达载体的遗传转化,同时对影响转化效率的主要因素进行研究.结果表明,当浸染液和共培养培养基中乙酰丁香酮(AS)的浓度为150mg·L-1时,抗性愈伤组织获得率显著提高17.39%;在菌液浓度D600为0.3、浸染时间为20min、共培养时间为60h、共培养温度为22℃、共培养培养基pH为5.4以及头孢霉素浓度为400mg·L-1的试验体系下,有利于提高玉米抗性愈伤组织的获得率,其获得率最高可达17.26%.     

农杆菌介导海岛棉胚性愈伤组织遗传转化影响因素分析

以3个栽培海岛棉品种新海30、新海24、新海16诱导而来的胚性愈伤组织为受体材料,分析了3种农杆菌菌株EHA105、LBA4404、GV3101和3种已构建质粒pCAMBIA1301、pCAMBIA1304、pBI121对已建立的农杆菌介导海岛棉外源基因转化体系的影响。研究结果表明,菌种和质粒对转化率有极其显著的影响,而两者之间的互作关系也比较显著。最终得到农杆菌介导转化海岛棉胚性愈伤组织的最佳菌种和质粒是GV3101和pBI121。     

农杆菌介导小麦愈伤组织转化的研究

利用衡水地区小麦推广品种, 取小麦种子的成熟胚进行愈伤组织培养, 用携带有小麦耐盐相关基因的根癌农杆菌 EHA 105侵染, 经筛选后, 获得新生的转基因愈伤组织, 旨在为进一步获得转基因小麦植株奠定基础.     

孟士德薰衣草愈伤组织诱导和植株再生

取孟士德薰衣草叶片、茎段、芽为外植体,设置6组不同激素水平进行组织培养试验,结果显示：以MS＋BA2．0mg·L^-1（单位下同）＋NAA0．1或MS＋BA2．0＋IBA0．15为培养基诱导愈伤组织效果好;茎段的愈伤诱导率高达92．5％;芽的萌动早、愈伤诱导率达80％;叶的诱导效果最差,愈伤诱导率为35％,且极易褐变死亡。愈伤组织在MS＋BA1．0＋IBA0．1培养基上继续培养．形成大量的丛生芽。单个芽在1／2MS＋NAA0．2培养基上进行生根培养,生根率达98％。试验表明芽适合作快速繁殖材料,茎段适合先形成愈伤组织再诱导植株再生。     

薰衣草离体培养技术研究

以薰衣草(Lavandula angustifolia)带芽茎段或顶芽为外植体,探讨不同激素种类与水平等对其愈伤诱导、不定芽增殖与不定根形成的影响,并筛选了薰衣草试管苗过渡移栽的适宜基质。结果表明薰衣草离体培养适宜的培养基分别为,不定芽启动培养基,MS+BA 1.0～2.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L;继代增殖培养基,MS+BA 1.0～2.0 mg/L+IBA 0.25 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L;生根培养基,White+IBA0.4 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂6.5 g/L或White+NAA 0.8 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂6.5 g/L。以等体积的泥炭与珍珠岩混合后作为基质驯苗,幼苗成活率可达96.9%。     

薰衣草离体培养研究

[目的]对薰衣草的离体培养进行研究,为薰衣草新品种新薰二号优良种苗的快速推广种植奠定基础。[方法]以薰衣草茎尖或带腋芽的茎段为外植体,研究不同激素种类与浓度对初代培养、不定芽增殖和不定根形成的影响,并通过试管苗移栽筛选适宜的练苗基质。[结果]初代培养采用MS+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA有利于植株生长;增殖培养采用MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA有利于芽的发生;生根阶段采用1/2MS+0.5 mg/L NAA有利于生根培养;以蛭石作为练苗基质幼苗成活率可达95%以上。[结论]采用组培法进行薰衣草优良种苗的扩繁,能有效加快新品种的推广。     

薰衣草茎段再生体系的建立

以薰衣草带芽茎段为外植体,探讨不同激素种类与水平等因素对其愈伤诱导、不定芽分化、增殖与不定根形成的影响,并筛选了薰衣草试管苗过渡移栽的适宜基质等。试验结果表明:不定芽启动培养以MS+BA1.0~2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L为宜;继代增殖以MS+BA1.0~2.0mg/L+IBA0.25mg/L+GA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L为宜;不定根分化以White+IBA0.4mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L或White+NAA0.8mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5 g/L为宜。     

薰衣草精气与精油化学成分的比较

对薰衣草精气与精油化学成分进行比较.结果表明,薰衣草精油共鉴定出39种化合物,其主要成分为芳樟醇(37.03％)、乙酸芳樟酯(22.34％)、乙酸薰衣草酯(14.55％)、α-松油醇(4.03％)、乙酸香叶酯(2.05％).薰衣草精气共鉴定出13种化合物,其主要成分为对异丙基甲苯(23.17％)、柠檬烯(20.76％)、1-甲基-4-(1-甲基乙烯基)苯(17.58％).薰衣革精气和精油在化学成分和相对含量上有很大不同,不能以精油的成分作为精气医用诊疗或保健养生的依据.     

AM真菌对桔梗和薰衣草生长和生理的影响

于盆栽条件下试验了不同丛枝菌根(arbuscular mycorrhizal,AM)真菌摩西球囊霉(Glomus mosseae)、根内球囊霉(Glomus intraradices)和混合菌种(Glomus mosseae+Glomus intraradices)对桔梗(Platycodon grandi florum)薰衣草(Lavandula angusti folia)生长和部分生理指标的影响.结果表明,接种AM真菌60 d后,桔梗和薰衣草以接种混合菌种处理的侵染率最高,分别为38％和30％;供试AM真菌促进桔梗和薰衣草生长,接种混合菌种的桔梗和薰衣草地上鲜重分别比对照显著提高了61％和74％(P＜0.05);接种处理的植株比对照花期提前、花量增大;接种处理还提高根系活力,其中,以混合菌种效果最佳,接种混合菌种的桔梗植株比对照提高153％;接种AM真菌提高了两种植物叶绿素总含量、可溶性蛋白和可溶性糖含量.结论认为G.mosseae与G.intraradices组成的混合菌剂在桔梗和薰衣草生产栽培中具有较大应用潜力.     

薰衣草精油的提取及理化性质分析

[目的]提取新疆伊犁地区主栽薰衣草品种精油,并分析其理化性质。[方法]采用水蒸气蒸馏法从伊犁地区主栽薰衣草7426-2花穗中提取精油,按照IS03515：2002薰衣草精油标准方法测定精油的物理指标和主要组分。[结果]分析表明,该薰衣草精油为微黄色液体,具有天然的薰衣草花香,其物理指标符合标准要求。采用GC—MS法共鉴定出41种组分,其中芳樟醇含量略低于标准,其他特征组分均符合标准要求。[结论]试验可为促进新疆薰衣草研究与开发利用提供科学依据。     

香蜂花、牛至和熏衣草冬季扦插育苗技术研究

以香蜂花、牛至和熏衣草为材料,研究了香草种类、植物生长调节剂、扦插基质和插条节段对香草植物扦插成苗的影响。结果表明,在冬季扦插香草植物,种类是影响其扦插生根成苗的主要因素,3种香草植物都易扦插成苗,其中牛至扦插成苗效果最好。蛭石、珍珠岩及二者混合的基质均利于3种香草植物插条生根成苗,其中以蛭石基质更有利于插条不定根生长。茎段和梢段都可用于该3种香草植物冬季的扦插育苗,但梢段插条的生根质量好于茎段。植物生长调节剂对3种香草植物扦插生根的促进作用不明显。生产中冬季可直接将香蜂花的插条用清水浸泡2 h后进行扦插育苗。     

薰衣草种子萌发及幼苗生长对干旱胁迫的响应

[目的]研究干旱胁迫对薰衣草种子萌发和幼苗生长的影响,探讨薰衣草的抗旱机理,为其种植栽培提供理论依据。[方法]以不同浓度的聚乙二醇(PEG-6000)模拟干旱胁迫对薰衣草种子及幼苗进行处理,测定种子萌发率、萌发指数、发芽势、活力指数以及幼苗的主根长、苗高、鲜重、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)、可溶性糖(WSC)含量等指标,采用SPSS 20.0软件进行数据统计分析。[结果]随干旱胁迫强度的增加,薰衣草种子的萌发率、萌发指数、发芽势、活力指数均呈现下降趋势,轻度干旱(PEG-6000质量分数为2.5%~10.0%时)胁迫下,上述指标的变化差异不显著(P0.05);中度干旱胁迫下(PEG-6000质量分数为15.0%~20.0%),种子发芽率显著降低(P0.05);而当PEG-6000质量分数达到25.0%(重度干旱胁迫)时,种子几乎不能萌发;随干旱强度的增加,薰衣草幼苗的苗高、鲜重显著降低,主根长表现为先增加后降低。SOD、POD、CAT这3种抗氧化酶活性均呈现出先升高后降低的变化趋势;WSC含量随PEG-6000质量分数的增加而呈明显的上升趋势;MDA含量呈现出持续上升的趋势。[结论]干旱胁迫对薰衣草种子萌发和幼苗生长均有明显的抑制作用,但同时薰衣草种子及幼苗也能够通过其自身的生理生化变化来主动适应外界的干旱环境。     

农杆菌介导Ds转座因子的黄瓜遗传转化

以黄瓜品种"中农15"子叶外植体为试料,绿色荧光蛋白GFP基因为报告基因,利用农杆菌介导的遗传转化法将构建的激活表达标签pDsBar导入黄瓜,获得转基因黄瓜群体,对转化群体进行GFP基因活性及分子检测。结果表明,GFP已经整合到黄瓜基因组中;以Bar基因设计引物进行PCR检测表明,阳性率为72.3%;通过Southern杂交分析,发现26.0%为1个插入位点,51.0%为2个插入位点,T-DNA在基因组中的平均拷贝数为2.2个。