口蹄疫(续)

①乳鼠中和试验１用已知血清鉴定未知病毒法将病畜水泡皮或肌肉、脏器等组织以生理盐水或磷酸盐缓冲液制成１．５～１：１０的悬液，于４℃冰箱浸毒过夜，３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，上清液为被检病毒液。用ＦＭＤＶ和Ｏ、Ａ、Ｃ、ＡｓｉａⅠ型标准毒株制备豚鼠抗血清，以１：５稀释，与等量被检病毒液混合，３７℃孵育１ｈ。后分别接种３～４日龄乳鼠，颈背皮下注射０．２ｍｌ／只。每组接种４只，同时设健康乳鼠、生理盐水和血清对照组。每窝鼠以１只母鼠哺乳。接种后观察７ｄ，每天记录２次。结果判定：先检查对照组，健康鼠…     

活菌制剂对肉仔鸡盲肠微生物数量的影响

1材料与方法 1.1试验材料 1.1.1微生态制剂的制备SPF成年鸡200只,无菌取其盲肠内容物按1:10制成悬液,取样检其沙门氏杆菌、溶血性大肠杆菌、球菌阴性者为合格.将制成的悬液接种在液体培养基上(接种所用的液体培养基121℃灭菌15 min,冷却后再接种),置恒温32℃摇床培养48 h.将培养液离心(5 000g)20 min,单独收集菌体细胞用腐植酸(游离腐植酸含量为31%,含N量4%)吸附并混合,即为本实验所用的活菌制剂产品,该活菌数为5×108CFU/g,将该产品保存于4℃以下备用.     

犬瘟热鉴别诊治(四)

(接上期) 3.3.3 血清学检查 中和实验、荧光抗体法、琼脂扩散试验和酶标抗体法都可用于诊断本病. 血清中和实验:将被检血清稀释后加入病毒,25℃作用2h后,与制备好的犬肾或绿猴肾细胞悬液混合接种于微量培养板,5%CO2条件下,35℃～36℃培养3d,染色检查CPE.     

微生态制剂对肉仔鸡血液激素水平的影响

1材料与方法 1.1试验材料 1.1.1微生态制剂的制备 SPF成年鸡200只,无菌取其盲肠内容物,制成1:10悬液,取样检其沙门氏杆菌、溶血性大肠杆菌、球菌阴性者为合格.将制成的悬液接种在液体培养基上(接种所用的液体培养基121℃灭菌15 min,冷却后再接种),置恒温(32℃)摇床培养48 h.将培养液离心(5 000 g)20 nin,单独收集菌体细胞,用腐植酸(游离腐植酸含量为31%,含N量4%)吸附并混合,即为本实验所用的活菌制剂产品,该活菌数为5×108 CFU/g,4℃保存备用.     

H9亚型禽流感病毒油乳苗免疫SPF鸡后HI抗体效价与保护关系

以H9亚型低致病性禽流感病毒（AIV）的LG1株第20代种毒接种10日龄SPF鸡胚，收获尿囊液，经浓缩制成常规灭活疫苗。用浓缩疫苗及其不同稀释度的疫苗对12日龄的SPF鸡颈部皮下注射0.2ml/只.SPF动物隔离罩内饲养21d后采集血清,随即用此病毒的第8代进行攻毒.结果表明,该浓缩疫苗及其1:1稀释后的疫苗对12日龄SPF鸡具有较好的免疫原性,平均HI滴度均达到9.4log2.并且各免疫鸡只血清中HI抗体大于7log2,但稀释至1/4的疫苗免疫后平均HI滴度只有5.log2.在人工攻毒后3d和7d,对照组有7/10和1/10分离到病毒,但3个试验组免疫后均未分离到病毒.     

猪乙型脑炎病毒转瓶培养工艺的研究

为了确定猪乙型脑炎病毒转瓶中培养的关键技术参数,对猪乙型脑炎病毒(SA14-14-2株)转瓶培养工艺进行研究,试验以Vero细胞、3 L转瓶培养病毒,通过对接种时间、接毒量、吸附时间、吸附温度、维持液pH值、维持培养温度、培养时间、维持液血清浓度和转瓶机转速9个条件的优化,将繁殖的病毒液冻融一次,采用病毒蚀斑数测定方法测定繁殖病毒效价。结果表明:用3 L转瓶进行培养,将Vero细胞培养至72～96 h进行病毒接种,接种量为1 200万pfu/mL的毒液3 mL,病毒吸附温度为37℃,吸附时间为60 min,吸附后用pH值为7.8、含2%胎牛血清的维持液继续培养,35℃、12 r/h旋转培养至96 h后收获毒液,冻融一次,可获得较高的效价(不低于1×10~7 pfu/mL)。说明上述条件可应用于猪Ⅰ型脑炎病毒的转移培养。     

微生态制剂对肉仔鸡小肠结构的影响

1材料与方法1.1试验材料与方法1.1.1微生态制剂的制备。购进SPF成年鸡200只,无菌取其盲肠内容物,以1∶10作成悬液,取样检其沙门氏杆菌、溶血性大肠杆菌、球菌呈阴性者为合格。将制成的悬液接种在液体培养基上(接种用的液体培养基121℃灭菌15min,冷却后再接种),置恒温32℃摇床培养48h。将培养液离心(5000g)20min,单独收集菌体细胞用腐植酸(游离腐植酸含量为31%,含N量4%)吸附并混合,即是本实验所用的活菌制剂产品,该活菌数为5×108CFU/g,将该产品保存,可在4℃以下备用。1.1.2试验鸡只。1日龄AA肉鸡200只,平均分成4组,每组50只,同组雏鸡放…     

鹅细小病毒HG5/82株的分离鉴定及生物学特性的研究

本研究通过对1982年黑龙江某鹅场发生的鹅细小病毒病疑似病例的肝病变组织病毒分离,进行回顾性研究.将肝脏加PBS研磨后,-70℃/37℃反复冻融三次,除菌过滤后接种12日龄鹅胚.发现病毒对鹅胚的致死时间为5～6 d,胚体体表有轻微出血点.鹅胚尿囊液经磷钨酸染色,可见具有典型特征的细小病毒粒子.将该病毒尿囊液在12日龄鹅胚中连续传16代,随着传代次数的增加,胚体多集中在3～4 d死亡.病毒传至第三代时死亡胚体头、颈、背部出现较为严重的出血点,体表有水肿.第五代病毒尿囊液(命名为HG5/82)对12日龄鹅胚的ELD50为10-5.92/0.1 mL.将20只12日龄雏鹅分为三个试验组和一个阴性对照组,各组分别接种鹅胚尿囊液104.92ELDso、103.92ELD50、102.92ELD50及生理盐水,发现雏鹅接种HG5/82后4 d出现轻微腹泻,随后恢复正常.用套式PCR检测雏鹅肛拭子病毒的体外排放情况.发现三个试验组在接种病毒后1～20 d用套式PCR均可检测到病毒.对照组及试验组接种后20～56d没有检测到病毒.将套式PCR产物进行序列测定并于参考毒株进行比较,表明该序列具有GPV相应区域的共同分子特征,与GPV参考毒株B的相应序列同源性达93.6%.本研究结果表明,该分离毒株为典型的鹅细小病毒(Goose Parvovirus,GPV),对雏鹅的致病力较弱.     

重组伪狂犬病病毒(rPRV-GP5)对绵羊的安全和效力试验

为了验证表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的重组伪狂犬病病毒(rPRV-GP5)的安全性和免疫原性,将10只5～6月龄健康绵羊分成三组,安检组(3只)肌注108.0PFU/只、效检组(4只)肌注106.0 PFU/只,3只作为不接种对照组.接种后14 d,效检组与对照组每只臀部肌注伪狂犬病病毒"双城系"猪源强毒S株103 LD50,结果效检组全部保护,对照组全部死亡,安检组未见异常.结果表明,重组病毒完全符合伪狂大病活疫苗制造及检验规程中对疫苗的安全和效力检验标准.     

不同类型消毒剂对口蹄疫病毒杀灭效果的试验

1口蹄疫乳鼠组织毒的制备及稀释 取本实验室保存新复壮的O型口蹄疫强毒（OPMF_14l，LD_50=10^-8.0），研磨制成1：10的病毒悬液，加双抗置4℃浸毒24h，3000r／min离心10min，取上清液，用PBS做1：500倍稀释，备用。     

双峰驼猝死症一例的病因调查

20 0 1年 3月初 ,动物园一头成年雄性双峰驼在采食中突然倒地 ,四肢划动 ,口吐白沫 ,不断呻吟 ,历时约 10分钟即停止心跳死亡。经病理剖检和实验室检验等 ,诊断为魏氏梭菌所致。1　尸体剖检尸体膘情良好 ,尸僵完全。心包积液 ,呈淡黄色 ,心外膜、心内膜有出血斑、点。肺瘀血水肿 ,气管内充满泡沫 ,小肠肠腔充满血水和血块 ,脑及脑膜充血 ,其它无明显肉眼可见变化。2　实验室检验2 .1　细菌培养无菌取肝、脾、肾及心血接种普通琼脂斜面、普通肉汤 ,置 3 7℃培养 7天 ,未发现长菌。2 .2　毒物试验取胃内容物汁液灌服小白鼠 3只 ,连喂 4天仍健活 ,说明本病例非毒物中毒死亡。2 .3　毒素试验取回肠内容物加灭菌生理盐水 2倍稀释 ,加双抗后 2 50 0r/min离心 10min ,取上清液尾静脉注射 16～ 18克小白鼠 4只 ,0 2ml/只 ,对照组 3只 ,注后 3小时内试验组全部死亡 ,证明肠内容物存在肠毒素。对照组 72小时健活。2 .4　病原分离取一回肠内容物接种于兔全血琼脂培养基装入罐内 ,另在装有碱液的大试管内加入焦性没食子酸 ,立即放入罐内 ,封罐 ,置 3 7℃培养 48小...     

鸡新城疫琼脂扩散试验方法的研究

用新城疫病毒(NDV)La Sota株接种的鸡胚含毒尿囊液,经灭活、透析和浓缩后,研制出琼脂扩散(AGP)抗原。应用AGP和HI试验同步检测不同免疫状态的鸡血清样品977份。试验表明,HI抗体效价≥16的被检血清,AGP阳性率为98.5％(268/272);HI抗体效价=8的,AGP阳性率为79.3％(142/179);HI抗体效价≤4的526份血清,AGP试验均为阴性。抗原经2次冻融,或在4℃和-3℃保存10个月以上,其效价未见降低。AGP抗原可用于ND的免疫监测和流行病学调查。     

微生态制剂对肉仔鸡免疫器官及抗病力的影响

微生态制剂在肉鸡生长时期具有重要作用,为研究其作用机理,特进行如下研究。1　材料与方法1.1　试验材料与方法微生态制剂的制备:取SPF成年鸡200只,无菌取其盲肠内容物按1∶10作成悬液。取样,检其沙门氏杆菌、溶血性大肠杆菌、球菌为阴性者为合格。将制成的悬液接种在液体培养基上(接种所用的液体培养基于121℃灭菌15min,冷却后再接种),置恒温32℃摇床培养48h。将培养液离心(5000g)20min,单独收集菌体细胞用腐植酸(游离腐植酸含量为31%,含N量4%)吸附并混合,即是试验所用的微生态制剂产品(含活菌5×108CFU/g)。将该产品保存在4℃条件…     

鸡病毒性关节炎病毒的分离和鉴定

1988年秋,长春市某鸡场发生了与鸡病毒性关节炎相似的鸡病。经临床观察和病理解剖学检查,基本和文献报道相似。用U·Conn·S1133鸡病毒性关节病毒株制备的琼脂扩散试验抗原检查了患病鸡群的125只份的血清,67份阳性,检出率为54%。同时用鸡白痢和鸡霉形体平板凝集抗原检查此125份血清,均是阴性结果;在患病鸡体内没分离出致病菌。无菌采取典型病死鸡的关节渗出液、病腱、病腱鞘以及鞘内容物,按常规方法制成1∶5的接种液,接种于7日龄鸡胚的卵黄囊内,0.2毫升/胚。接种后9—11天内死亡。无菌收集尿囊液,再经7日龄鸡胚传代,均在7—9天内规律性死亡。用此病毒回归鸡体,复制本病,4/4典型发病,1/4死亡,其临床症状、剖检变化均和自然发病鸡相同。耐过鸡16天后采血,琼扩试验检查阳性。将此病毒在60℃下水浴加热4小时后,再接种7日龄鸡胚4/4发病死亡。经电子显微镜下观察,可见到典型的呼肠孤病毒粒子。据此确定所分离到的病毒为鸡病毒性关节炎病毒——禽呼肠孤病毒。     

鸡轮状病毒的分离鉴定及特性研究

用胰蛋白酶处理发病鸡的粪便和肠内容物，接种Marcl45细胞．盲传数代后．从山东不同地区发生流行性腹泻的鸡群中分离到1株病毒，并对分离病毒的生物学特性和理化特性进行了部分研究。结果表明病毒粒子呈轮状、大小为70～80nm；其病毒基因组的电泳图谱为5：1：3：2；病毒的TCID50为10^-4-19／0．1mL，能被轮状病毒阳性血清所中和；病毒对氯仿、乙醚有抵抗力；对pH3．0处理60min稳定；50℃ 30min能使其感染力下降10^2；1mol／L MgCl2不能增强其对50℃ 60min的抵抗力。接种2周龄SPF鸡．24h后陆续发病，表现为持续性水样腹泻；剖检可见病鸡脱水、小肠内有大量的液体和气泡、肠黏膜变薄；组织学变化表现为肠绒毛坏死、脱落．绒毛平均长度减少而隐窝深度增加，固有层中淋巴细胞浸润。其临床症状及病理组织学变化与自然发病相同。因此确定发生在山东鸡流行性腹泻的病原为A群轮状病毒，该研究为轮状病毒感染的防制提供了理论依据。     

鹅源新城疫病毒云南流行毒株的鉴定理化试验

用分离病毒KM2007株的尿囊液经氯仿,乙醚,甲醛处理后的病毒液接种9日龄鸡胚,并设对照组;病毒液密封于封闭的小试管中,分别置于100℃1min、2min;56℃5mi n、10min、30min、45min和60min,并迅速冷却,按常规处理接种9日龄鸡胚。结果经氯仿,乙醚,甲醛处理过的病毒液接种的鸡胚全部健活,对照组全部死亡,说明分离病毒对氯仿,乙醚,甲醛敏感。病毒热稳定性试验结果显示：100℃1min,2min;56℃45mi n和60min,鸡胚全部存活,血凝价消失;其他组别的鸡胚部分死亡,血凝价下降,说明病毒对热敏感。     

伪狂犬病病毒弱毒株LY株的分离鉴定

从辽阳某猪场的10日龄仔猪中分离到1株病毒,经纯化后测得其毒价为107.29TCID50/mL.细胞中和试验表明,该病毒能被猪伪狂犬病病毒标准阳性血清所中和.电镜下可见到典型的疱疹病毒粒子,具有囊膜及外周纤突.所分离的病毒对氯仿、胰蛋白酶、乙醚敏感,在pH5.0～9.0下稳定,56℃ 30 min可以灭活.应用特异性引物,通过PCR能扩增出伪狂犬病病毒1 240 bp的gD基因.分离病毒对3日龄乳鼠有一定的致病力,但对家兔、3～5日龄仔猪及妊娠母猪都有很高的安全性.用不同剂量的病毒培养液肌肉注射于3～5日龄仔猪,14 d后用105.7TCID50伪狂犬病病毒强毒攻击,所有试验仔猪均可得到有效保护.用分离毒免疫母猪,其后代可获高滴度的母源抗体,15日龄的仔猪能抵抗105.7TCID50强毒的攻击.试验的结果初步说明,所分离的病毒为伪狂犬病病毒(命名为PRV LY株),并可能是一株弱毒株,而且具有很好的免疫保护作用.     

肾型IBV感染对青年蛋鸡血清和肾脏线粒体自由基代谢的影响

以海塞克斯蛋鸡为试验对象,通过检测蛋鸡血清和肾脏线粒体自由基代谢的变化,研究肾型IBV感染对青年蛋鸡血清和肾脏线粒体自由基代谢的影响。挑选31日龄海塞克斯蛋鸡200羽,随机分成4组,每组50羽。病毒组按鸡胚半数致死量的测定结果（10-5/0.2mL）人工滴鼻攻毒。病毒1组、病毒2组、病毒3组分别接种滴度为10-4/0.2mL、10-5/0.2mL、10-6/0.2mL病毒尿囊液,对照组接种灭菌生理盐水,每羽均为0.2mL,试验期31d。于试验第17、24、31天,每组随机选取试验鸡10羽,分离血清和肾脏线粒体,检测自由基代谢变化。结果显示,肾型IBV感染可导致青年蛋鸡肾脏肿大、血清及肾脏线粒体中T-AOC、SOD活性下降和XOD活性、MDA含量升高,并且随着接种病毒尿囊液滴度剂量的升高这种变化趋势更加明显。结果表明,肾型IBV感染可导致青年蛋鸡血清及肾线粒体的自由基生成增多及抗氧化功能的下降。     

牛体外受精胚胎冷冻与解冻孵化试验报告

用添加 5 %犊牛血清 (FCS)的HEPES缓冲TCM 199,用共培养法获得牛体外受精胚胎。冷冻保护液组成为 :18%FCS、72 %PBS、10 %( 1.4mol)甘油、0 .1g/ml蔗糖。冷冻程序为 :①从 -7℃开始冷冻 10分钟 ,第二分钟植冰 ;② 0 .5℃ /分缓慢冷冻 3 2分钟至-2 3℃ ;③最后以 -2 3℃冷冻 10分钟后投入液氮。冷冻保存 6h～5d的胚胎解冻存活率为 90 .0 %;用 2 0 %FCS +80 %HamF1 0 孵化2 4、48h存活率分别为 77.8%、5 1.9%     

海南省1株甲属虫媒病毒的分离鉴定及其血清抗体调查

1995 年,从海南省捕获的蚊虫标本中,分离到1 株病毒,编号为HYM1。该病毒以脑内感染的方式感染2～3 日龄乳鼠及3 周龄小鼠,感染后2～4 d 规律致死。在Vero-E6 细胞组织培养中可增殖,并可产生明显的病变。经理化和生物学鉴定,该病毒对酸、乙醚均敏感,抵抗5-氟脱氧尿苷和胰酶,属RNA 病毒。血清学鉴定表明,该病毒与马雅罗病毒(MAY)抗原性关系密切。从当地人血清中检到了HYM1 病毒抗体,其阳性率为3.99% 。