类猪圆环病毒因子P1感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈相关分子和共刺激分子的影响

采用实时定量PCR技术对类猪圆环病毒因子P1感染猪不同时相猪肺泡巨噬细胞中外源性抗原加工递星相关分子SLA-DR、SLA-DM和CD74及共刺激分子CD40、CD80和CD86 mRNA的表达进行了检测.结果表明,病毒感染后3 d,上述分子的mRNA表达皆低于对照组相应分子的mRNA表达.其中,CD80 mRNA的表达...     

猪血源树突状细胞诱导培养与鉴定

摘要：【目的】规范DCs诱导培养和鉴定的方法,为研究相关病毒致病机制、制定相应的治疗与预防措施奠定技术平台。【方法】分离猪外周血单个核细胞（PBMCs）,贴壁细胞经一定浓度GM-CSF和IL-4诱导,不同时间观察形态变化,7天后收集所诱导的细胞,经光镜、流式细胞术及激光共聚焦显微镜鉴定其形态、表面标志物CD1a/SWC3a;利用双色流式细胞术检测DC MHC-II分子和CD80/86表达情况。【结果】试验结果显示,所诱导的细胞具有典型树突状形态;其表面CD1a/SWC3a双阳性率达到90.1%,MHC-II/CD80/86分子双阳性率达98.3%;激光共聚焦显微镜观察细胞呈集落状,细胞表面CD1a/SWC3a双阳性,表明已经成功诱导出猪血源DC,并获得诱导的标准程序,为研究以DC为靶细胞的猪病毒性疾病免疫致病机理奠定基础。     

山羊骨髓间充质干细胞生物学性能鉴定及诱导分化为心肌细胞的研究

研究了关中奶山羊骨髓间充质干细胞的分离、培养和生物学特性,并在体外诱导分化为心肌细胞表型。结果表明,山羊MSCs具有很好增殖能力;能够耐受反复冷冻和解冻;表达细胞表面标志CD44、CD105、CD166,弱表达CD34、CD106,而不表达CD14、CD45。该类细胞用5-氮胞苷诱导分化后,能够表达心肌α-actin,并呈PAS染色阳性。     

SB-431542对梅花鹿鹿茸软骨层细胞增殖的影响

通过研究转化生长因子β(transforming growth factor-β, TGF-β)的特异性小分子拮抗剂SB-431542对梅花鹿鹿茸软骨层细胞增殖的影响,探讨转化生长因子β在鹿茸快速生长中的调节机制。分离培养生长30天的梅花鹿鹿茸软骨层细胞,将传代培养第2代的细胞经不同浓度的SB-431542 (0,1,3,5,8,10μM)作用,培养48小时后用MTT法测其细胞增殖的变化,并用SPSS软件分析其差异性。结果显示,SB-431542处理组细胞增殖活性都低于对照组(P＜0.05),其中浓度为8μM和10μM的SB-431542处理组与对照组相比差异非常显著(P＜0.01),随着添加SB-431542浓度的升高,对细胞的生长速度抑制更加明显,试验表明,TGF-β对维持梅花鹿鹿茸软骨层细胞的快速增殖有重要作用。     

猪皮肤源树突状细胞的分离和鉴定

摘要：【目的】分离出不需要体外诱导树突状细胞（DC）,为研究病毒与猪DC的关系奠定基础。【方法】将刮下的猪皮肤表皮培养过夜,对所分离获得的细胞通过流式细胞术、吉姆萨染色与扫描电镜进行表型与形态鉴定。【结果】试验结果表明,通过细胞计数分离到的细胞能达到5×106个细胞,流式细胞术检测细胞CD1a/SWC3a的双阳性细胞率为82.3%;流式细胞术检测CD80/86分子,阳性细胞率为90.2%;通过吉姆萨染色和扫描电镜观察,细胞表面有大量的树突状突起,符合DC的形态特征。【结论】通过表型和形态学分析,说明已经成功分离猪皮肤源DC,为器官移植和猪病毒性疾病的免疫抑制机理研究奠定基础。     

食欲素A对绵羊卵巢颗粒细胞P-AMPK与P-ERK信号通路的影响

为研究食欲素A对绵羊卵巢能量代谢及生长发育的调节作用,在体外培养黄体化颗粒细胞,用浓度为0.05,0.10μg/m L的食欲素A刺激细胞后,分别于0,2,6,12,24 h提取细胞总蛋白,采用Western Blot法对P-AMPK及P-ERK的表达量进行检测。结果显示,食欲素A刺激细胞2 h,0.05,0.10μg/m L剂量组的P-AMPK表达量与对照组相比均极显著提高(P0.01),食欲素A刺激细胞6 h,0.05,0.10μg/m L剂量组P-AMPK的表达量均达到最高值(P0.01),且0.10μg/m L剂量组表达量明显高于0.05μg/m L剂量组;食欲素A刺激细胞2 h,0.05,0.10μg/m L剂量组的P-ERK表达量与对照组相比均极显著提高(P0.01),食欲素A刺激细胞24 h,0.10μg/m L剂量组的P-ERK表达量极显著高于平台期(6~12 h)(P0.01)并达到最高值。表明食欲素A通过P-AMPK和P-ERK途径参与黄体能量代谢及生长发育的调节,从而进一步参与生殖机能的调控。     

肌肽对肉鸡肌纤维发育的影响

选用1日龄AA肉鸡400只,随机分成4组。1~4组饮水中肌肽的添加量分别为0、20、40、60mg/L,每周末测定各组肉鸡的胸肌和腿肌肌纤维直径,观察肌肽对肉鸡肌纤维直径发育的影响。结果表明：1周龄肌肽试验组胸肌和腿肌肌纤维直径均大于对照组,但差异不显著（P>0.05）。2周龄,中、高剂量组的胸肌肌纤维直径分别显著或极显著地大于对照组（P<0.05,P<0.01）;高剂量组的腿肌肌纤维直径极显著大于对照组（P<0.01）。3周龄,高剂量组的胸肌肌纤维直径极显著大于低剂量组和对照组（P<0.01）,高剂量组的腿肌肌纤维直径显著大于对照组（P<0.05）。4周龄,低剂量组的胸肌和腿肌肌纤维直径均显著小于对照组（P <0.05）。5周龄,中剂量组的胸肌肌纤维直径显著小于对照组（P<0.05）,低、中剂量组的腿肌肌纤维直径分别极显著或显著地小于对照组（P<0.01,P<0.05）。6周龄,肌肽试验组肌纤维直径均小于对照组,但差异不显著（P>0.05）。因此,1~3周龄肌肽各剂量组肌纤维直径的发育速度快于对照组,而4~6周龄肌纤维直径的发育速度低于对照组,1~3周龄肌肽处理存在明显的剂量效应。     

普洱茶多糖的提取及降血糖的研究

本试验从云南大叶种晒青毛茶经潮水渥堆做成的普洱茶中,提取茶叶多糖,通过分离、纯化得到纯品茶多糖（TPS）,配制成不同浓度的茶多糖溶液,以研究测定其对小鼠降血糖效果的差异;在动物活体试验中共设四组：正常对照组、糖尿病（DM）模型对照组、糖尿病80mg/kg/d剂量注射组、糖尿病160mg/kg/d剂量注射组,正常对照组和模型对照组注入同等体积的蒸馏水。采用腹腔注射。糖尿病试验小鼠选择经四氧嘧啶诱发造模后合格的小鼠,观 测其体重与血糖的变化情况,为期一周。其试验结果表明： 1.普洱茶多糖具有促进糖尿病小鼠体重恢复的作用,但无显著性差异。 2.普洱茶多糖能有效的降低糖尿病小鼠的血糖值,高剂量的普洱茶多糖（160mg/kg）比低剂量的普洱茶多糖（80mg/kg）降血糖效果要好,在统计上降血糖幅度差异性显著（P<0.05）,并且呈现一定剂量－反应关系。     

福建黄兔免疫功能低下模型的建立

为了探索一种简便易行、具有良好应用性并适用于中医药领域免疫功能低下的动物模型,以及为福建黄兔提供一种新型实验动物的实验依据。实验采用氢化可的松为细胞免疫抑制剂,6个实验组,其中1个对照组,5个剂量组（分别每天20、25、30、35、40 mg/kg）,采用流式细胞检测法测CD4、CD8细胞含量,并通过摘取脾脏的方式计算脾脏指数。实验结果显示：B、C剂量组（分别每天25、30 mg/kg）的福建黄兔在注射药物前后CD4、CD8细胞含量呈现明显的下降趋势,证实上述2个剂量组是福建黄兔免疫功能低下模型造模的较好剂量;同时,A~E剂量组的黄兔脾脏相较于对照组均呈现不同程度的缩小,脾脏指数降低,B、C、D组与对照组差异显著,反映其免疫功能受损,其中尤以C剂量组(30 mg/kg)下降最为明显。由此可见,C剂量组是本实验中免疫功能低下动物模型造模的最适宜剂量。     

快速检验玉米种子纯度的方法

本文主要是对目前发展较为成熟和有较大发展前景的快速测定玉米种子纯度的方法,进行比较和评价。苗期标记性状在种子纯度检验上的优越性被深入研究;蛋白质电泳法因表达稳定、容易操作被广泛应用;SSR分子标记测定法随着分子标记技术的发展被不断完善;计算机智能识别技术测定种子纯度具有快速性和准确性,也具有非常大的应用潜力。未来玉米种子纯度鉴定的方法会向着更加直接、快速、准确的方向发展,以适应现代种子市场发展的要求。     

仔猪感染猪等孢球虫后T细胞亚群的动态变化

为了研究仔猪感染猪等孢球虫后T细胞亚群的变化规律,应用纯种猪等孢球虫孢子化卵囊人工感染9头6日龄仔猪,分别检测了感染前1d和感染后1、3、6、9、11d(DPI)外周血中CD3 、CD4 、CD8 T细胞。结果显示,DPI3,CD3 、CD4 T细胞增加,之后下降,但差异均不显著(p>0.05);CD8 T细胞在DPI6增加,DPI 9达峰值(P<0.05)。CD4 /CD8 值在DPI 6下降,DPI 11达到最低点。表明DPI 3感染仔猪的免疫功能有所增强,而DPI 8后仔猪免疫功能受到抑制。     

“益康XP”替代抗生素对早期断奶藏羔羊生长发育的影响

为了在早期断奶藏羔羊日粮中添加达农威“益康XP”,通过观察对早期断奶藏羔羊生长发育的影响,确定其代替抗生素的可替代性。试验选取早期断奶(55±2)日龄,体重(7.91±0.83) kg藏羔羊42只,随机分为3组（每组14只,公母各半）,饲喂基础日粮为粗蛋白和能水平量分别为(18.02%/12.95) MJ/kg的开口料。实验Ⅰ组为基础日粮,实验Ⅱ组为基础日粮+1%“益康XP”,实验Ⅲ组为基础日粮+0.03%莫能菌素。试验结果表明：实验Ⅱ组藏羔羊的日增重明显高于实验Ⅰ组和实验Ⅲ组,差异显著(P<0.01);实验Ⅱ组藏羔羊的日采食量高于实验Ⅰ、Ⅲ组,实验Ⅱ组对藏羔羊的腹泻率明显低于实验Ⅰ、Ⅲ组(P<0.05);65日龄后,各实验组对藏羔羊血糖(GLU)、血清尿素氮(BUN)、血清总胆固醇(TC)、血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)和球蛋白(GLOB)差异不显著(P>0.05)。说明基础日粮中添加”益康XP”能降低藏羔羊的腹泻率,提高羔羊的生长,是抗生素的一种良好替代品。     

猪附红细胞体ORF4蛋白的空间结构与B细胞抗原表位预测

为了预测猪附红细胞体(Mycoplasma suis)ORF4蛋白的空间结构和B细胞抗原表位。选择Genebank序列号AJ504999中ORF4基因,应用生物信息软件和互联网在线程序分析ORF4的氨基酸序列预测二级结构、三级结构、亲水性、柔韧性、抗原指数及表面可及性。结果表明：ORF4蛋白二级结构没有α-螺旋,其中柔性结构以β-转角为主,潜在的优势B细胞抗原表位区段主要分布在28~34,54~61氨基酸区段。本研究预测了ORF4蛋白空间结构和B细胞抗原表位,为猪附红细胞体表位疫苗的设计研发提供了指导意义。     

乐清湾围塘养殖泥蚶繁殖周期与环境因子的关系

为了研究人工养殖环境条件及气候变化对乐清湾泥蚶性腺发育造成的影响。自2010年3月-2011年2月,利用组织学等手段对乐清湾围塘养殖泥蚶的性腺发育作了周年观察,同时对围塘养殖环境温度、盐度和叶绿素a做了周年调查和分析。结果表明：其性腺发育分为增殖期、生长期、成熟期、排放期和休止期5个阶段。配子发生开始于3月,水温为16.6℃,大部分个体在6-7月性成熟,此时水温和叶绿素a含量达到最高,7月后大规模产卵。乐清湾围塘养殖泥蚶为雌雄异体,泥蚶的卵细胞直径呈显著的周年变化,从3月(8.87±2.4) μm开始增加,7月达最大值(48.47±9.51) μm。随着产卵的发生,卵径急剧减小,至8月,卵径降低至(18.57±2.77) μm。卵径变化与性腺发育周期具有明显的相关性,卵径可以作为判断泥蚶性腺成熟度的一个良好指标。     

百球清对仔猪等孢球虫病治疗效果观察

为了研究百球清（Toltrazuril）对猪等孢球虫病的治疗效果,用15 mg/kg.bw和7.5mg/kg.bw2个剂量的百球清口服治疗感染猪等孢球虫（Isospora suis）的7日龄仔猪,用粪便性状及腹泻持续时间、OPG值及排卵囊持续时间、增重率、死亡率及剖检病变等指标来判定百球清治疗效果。结果显示,首次给药后第5—6天给药组（Ⅰ、Ⅱ组）仔猪粪便性状全部恢复正常,首次给药后第3—4天Ⅰ、Ⅱ组仔猪粪便卵囊转阴率达100%,仔猪精神、食欲等明显好转,除Ⅰ组死亡1头外,组其余仔猪全部存活。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组仔猪2周内增重率分别为65.1%、61.9%和34.7%,Ⅰ、Ⅱ组仔猪增重率提高显著（P<0.01）。而感染不给药组（Ⅲ组）仔猪首次给药后1周仍有少量卵囊排出,死亡2头,存活仔猪明显消瘦。表明百球清对仔猪等孢球虫病具有良好的治疗效果。     

附红细胞体感染后红细胞相关免疫因子的研究

为了检测小鼠感染附红细胞体后红细胞相关免疫因子的功能受影响,用猪附红细胞体阳性血感染BALB/c小鼠,在第1,3,5,7,9天后采用ELISA方法检测小鼠红细胞表面CD35和血浆中CD35、CD58和CD59水平变化。结果表明,小鼠感染猪附红细胞体后红细胞表面CD35分子水平逐渐降低;第1,3,5,7,9天后,血浆中CD35、CD58和CD59水平分别高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),且第3天血浆CD35、CD58和CD59水平达到高峰。说明小鼠感染猪附红细胞体后红细胞表面CD35降低,血浆中CD35、CD58和CD59出现升高现象,且高峰均出现在第3天。试验表明,小鼠感染附红细胞体后红细胞表面CD35、CD58和CD59分子受到破坏,影响了红细胞的免疫功能,进一步可影响到机体的整个免疫系统的功能。     

苜蓿多糖对小鼠树突状细胞增殖和巨噬细胞能量代谢水平影响的研究

为了系统探讨苜蓿多糖对小鼠免疫细胞增殖的影响,给苜蓿多糖对免疫活性调节的下一步深入研究打下基础,采用MTT法,检测苜蓿多糖对正常Balb/c小鼠体外骨髓树突状细胞增殖的影响和腹腔巨噬细胞能量代谢水平的影响。结果表明：苜蓿多糖可以刺激小鼠骨髓树突状细胞的增殖,可以刺激小鼠腹腔巨噬细胞能量代谢水平的提高。提示苜蓿多糖可以提高辅佐细胞的抗原递呈作用。说明苜蓿多糖可通过提高辅佐细胞的抗原递呈作用来提高免疫活性细胞的功能。     

银翘天甘对猪链球菌Ⅱ型病理模型的防治试验

为观察银翘天甘中药制剂体内抗猪链球菌病的效果。用猪链球菌Ⅱ型对18~22 g昆明鼠攻毒并开展预防和治疗实验。预防试验是用猪链球菌Ⅱ型对18~22 g昆明鼠攻毒同时口服银翘天甘中药制剂0.5、1.0、2.0 g/mL,1次/d,连用3天,观察7天后的动物发病率、死亡率和保护率;治疗试验是先用猪链球菌Ⅱ型攻毒并建立昆明鼠疾病模型后口服上述药物,2次/d,连用3天,观察7天后的动物死亡率、治愈率和有效率。预防试验结果表明：银翘天甘中药制剂组实验动物死亡率均极显著低于感染对照组(P<0.01);给药组实验动物发病率均极显著低于感染对照组(P<0.01);治疗试验结果表明：银翘天甘中药制剂组昆明鼠死亡率极显著低于阴性对照组(P<0.01);低剂量组治愈率极显著高于中、高剂量组(P<0.01),低剂量组有效率显著高于中、高剂量组(P<0.05),与阳性对照组之间无显著性差异(P>0.05)。由此表明,口服低剂量银翘天甘中药制剂能够在昆明鼠猪链球菌病理模型上发挥预防和治疗作用。