用冻干菌液进行猪丹毒、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗效力检验的研究

在猪丹毒、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗的效力检验中,需要进行动物攻毒保护试验。传统方法使用的是2~8 ℃保存的新鲜菌液对试验动物进行攻毒。本研究中使用的是低温保存的冻干菌液,并对冻干保存的菌数进行了测定和优化。结果表明,冻干保存的菌液能达到新鲜菌液同等的检验结果。同时,对冻干菌液保存期进行试验验证,发现细菌存活状态稳定。因此,在猪丹毒、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗效力检验中,可将新鲜的攻毒菌液冻干保存,用于攻毒保护试验,以避免每次繁重的新鲜菌液前期准备工作,并克服活菌数衰减所造成的检验结果不准确等问题。     

用药物治疗后死亡动物的病理材料对病原菌检出影响的试验

用多杀性巴氏杆菌、猪丹毒杆菌、猪霍乱沙门氏菌和炭疽杆菌,分别感染试验动物,待体温开始升高时,用青霉素、链霉素、磺胺噻唑钠等进行治疗。结果除猪丹毒、炭疽各治愈一只外,其余试验动物治疗无效死亡。取死亡的试验动物肝脏一块,置普通冰箱中保存,每隔五天分别培养,抹片镜检,悬液接种小白鼠,以检查细菌存活情况。结果染有多杀性巴氏干菌、猪霍乱沙门氏菌等病理材料,保存15天(更长的时间未测)仍可分离出原菌;猪丹毒保存5天可检出原菌,10天则细菌已死亡;炭疽当天可检出原菌,5天则细菌已死亡。故认为作为细菌检验的病理材料,应强调采用未经抗菌素和磺胺类药物治疗过的病例。文中对青、链、磺等药物对病原菌的药理作用和临床上使用效果不一致的原因,进行了讨论。     

急性死亡猪中猪丹毒杆菌的分离鉴定

本试验从江西省南昌市某规模化猪场送检的2份疑似猪丹毒杆菌引起的急性死亡猪组织中分离出2株可疑菌株,经细菌分离培养、染色镜检、生化试验等实验室诊断,进一步以猪丹毒杆菌16S rRNA的特异性引物进行PCR鉴定,确定2株分离菌为猪丹毒杆菌.然后进行动物致病性试验及药敏试验,并对该厂常用的消毒药进行最小抑菌浓度(MIC)的测定.结果表明,1×10⁸ CFU的剂量可致死小白鼠;分离菌对β-内酰胺类抗菌药高度敏感,对多数抗菌药耐药;该厂常用消毒药的抑菌作用已明显下降.本试验结果对临床防制猪丹毒具有参考意义.     

1株猪丹毒杆菌的分离鉴定及药敏试验

无菌操作采集某规模养猪场疑似感染猪丹毒杆菌的病死猪肺脏等组织进行细菌分离,从中分离出一株病原菌,经细菌分离培养、形体特性及生化鉴定,确定为猪丹毒杆菌。通过药敏试验表明,该菌对阿莫西林、青霉素及头孢类药物高度敏感,为临床用药防治猪丹毒杆菌病提供科学根据。     

不同血清型猪丹毒杆菌的交互免疫试验

Wood等人已试验证明猪丹毒杆菌的免疫效力与血清型有关。White曾报道用1型或2型菌株制备的菌苗接种猪后,再用几种不同血清型的猪丹毒杆菌攻击,结果表明在免疫力上,同型菌间比异型菌间坚强。为了了解我国目前使用的菌苗对抵抗自然界猪丹毒各型菌株的免疫效力,本试验利用从我国江苏和四川荣昌健康猪脾脏、骨髓、扁桃     

猪丹毒杆菌分离鉴定及体外抑菌试验

为了确诊临床疑似猪丹毒病例,采集病死猪的内脏,用常规生化法和PCR法进行细菌分离鉴定,用牛津杯法做体外抑菌试验。结果:分离菌H_2S、靛基质、枸橼酸盐等试验为阴性;分解葡萄糖、麦芽糖等,不能分解蔗糖;对青霉素、头孢唑啉等高度敏感,对氯霉素、链霉素等中度敏感;枯草芽孢杆菌、鸡唾液乳酸杆菌和猪小肠乳酸杆菌对其均有较强的抑制作用。结论:分离菌为猪丹毒杆菌,该病是由猪丹毒杆菌引起的急性热性传染病,防治首选药物为青霉素,枯草芽孢杆菌、鸡唾液乳酸杆菌和猪小肠乳酸杆菌可减少或部分取代抗生素对该病的防治。     

一株猪丹毒杆菌分离株的致病性与耐药性分析

从某猪场病死猪心血、肝、脾等组织分离到1株革兰阳性杆菌,经细菌形态、16S rRNA基因扩增,确定分离菌为猪丹毒杆菌。对分离菌进一步开展了药物敏感性试验、耐药基因的检测、细菌致病性试验及免疫保护性试验。结果发现:分离株对β-内酰胺类、大环内酯类、氟苯尼考高敏,但对氨基糖苷类、四环素、林可霉素、诺氟沙星等耐药;分离株可扩增出氨基糖苷类耐药基因aac C2和四环素耐药基因tetB,但菌株中没有扩增到四环素耐药基因tetA。细菌致病性试验表明该毒株对小鼠的LD50为1.77×10~5cfu/mL。小鼠免疫保护试验结果表明,疫苗G4T10免疫后28 d,以分离株攻毒,对照组全部死亡(5/5),免疫组小鼠攻毒后没有死亡,仅表现为体重减轻,表明现用猪丹毒疫苗能保护小鼠抵抗猪丹毒的致死性攻击。     

兔源多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌的分离鉴定与药敏试验

为了确定引起兔呼吸困难、死亡的病原,本研究对河南省某兔场发病病例剖检,采集8份有呼吸道症状的病兔样品对病原进行分离培养,通过生化鉴定、16S rRNA PCR鉴定及小鼠致病性试验确定病原,并采用药敏试验分析其耐药性。结果显示,分离得到8株两端钝圆、卵圆形的革兰阴性球杆菌及8株短粗、卵圆形的革兰阴性菌;生化鉴定结果显示分离的细菌1和细菌2分别符合多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌的生化特性,分别命名为HN-W01和LY-W05株;扩增的分离菌16S rRNA基因序列片段大小分别为643和1 494 bp,与多杀性巴氏杆菌AY604234.1和肺炎克雷伯菌MK824895.1的同源性分别为99.32%和99.93%,表明该兔场患病兔为多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌混合感染。致病性试验显示,分离出的多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌对小鼠均有致病力,可使小鼠死亡。经药敏测定发现分离得到的多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌同时对多粘菌素B和氯霉素敏感,对其他药物有不同程度的耐药性。本研究为家兔养殖过程中多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌混合感染的分离鉴定以及临床科学用药提供了参考依据。     

鹿科动物和斑马巴氏杆菌病的诊断

针对我国鹿科动物和斑马发生以高热和出血民生败血症为特征病例，进行细菌的分离鉴定并采制鼻道拭子，结果从鼻拭子和病死动物组织中均分离到多杀巴氏杆菌。该菌菌落为Ｆg型 落，琼扩试验证明含有Ｂ型抗原。该菌对蒽诺沙星和二甲硝咪唑敏感。通过加强饲养管理，注射蒽诺沙星，二甲硝咪唑饮水有效控制巴氏杆菌病的发生。本研究提示动物本身是带菌者，免疫机能的强弱是发病的重要因素。     

鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为鉴定临床疑似鸭多杀性巴氏杆菌感染肉鸭的病原菌，本试验通过细菌分离培养、菌体形态观察、细菌生化鉴定、16S rRNA基因测序分析、细菌种特异性鉴定、荚膜分型鉴定和动物回归试验进行鉴定，并通过药敏试验和耐药基因检测进行耐药性分析。结果显示，从患病鸭肝脏组织分离到的细菌在鲜血琼脂培养基中呈现表面光滑凸起、灰白色菌落，为革兰氏阴性短小杆菌，瑞氏染色呈两极浓染；生化鉴定结果显示，分离菌能发酵葡萄糖、蔗糖和甘露醇，硫化氢、氧化酶和吲哚等试验阳性；16S rRNA基因序列系统进化树分析显示，该分离菌与多杀性巴氏杆菌聚为一支，同源性 > 99%；细菌种特异性鉴定结果与多杀性巴氏杆菌相符；荚膜分型鉴定结果仅扩增到约为1 050 bp的目的基因片段，与荚膜血清A型相符；动物回归试验显示，该分离菌有较强的致病性；药敏试验结果显示，该分离菌对羧苄西林、氨苄西林、复方新诺明和四环素等12种药物耐药；经耐药基因PCR检测显示，该分离菌携带Sul1、Sul3、tet（X）和Intl1 4种耐药基因，与药敏表型相符。本试验成功分离到1株鸭源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌，为鸭多杀性巴氏杆菌病的防治提供参考依据。     

貉巴氏杆菌病的诊断与中西医结合治疗

为了确定某养殖场的使貉发病的主要病原菌并筛选出治疗药物,对青岛市某养殖场送检的病死貉进行病理剖检,并分离到1株细菌,随后进行分离菌形态观察、生化试验、细菌16S rRNA基因测序及药敏试验。结果表明:该株菌为多杀性巴氏杆菌,药敏试验显示该株菌对庆大霉素、妥布霉素、诺氟沙星、左氧氟沙星、多黏菌素B高度敏感;中西医结合治疗可有效控制病情。     

一例猪巴氏杆菌病的诊断及体外抑菌试验

为了确诊某猪场患病猪的病原菌,找到防控办法,对死亡猪肺脏、气管液进行细菌分离鉴定,经过生化试验、药敏试验、体外抑菌试验、动物试验等,得知:分离菌培养特性、生化反应特性与巴氏杆菌基本一致;分离菌高敏药物为头孢氨苄、头孢曲松等,低敏药物为青霉素G、林可霉素等;乳酸菌对巴氏杆菌有明显的抑菌作用;攻毒小白鼠48 h内全部死亡。结论:分离菌为多杀性巴氏杆菌,该病为多杀性巴氏杆菌引起的猪巴氏杆菌病,乳酸菌配合高敏药物能防治该病。     

风水梁獭兔养殖园区一株兔巴氏杆菌的分离及鉴定

兔巴氏杆菌病是一种因兔感染巴氏杆菌而引起的急性传染病,也称兔出血性败血症。本试验从内蒙古风水梁獭兔养殖园区病死幼兔肝脏中分离到一株细菌,通过对病死兔的临床解剖及细菌的菌落形态学观察、细菌革兰氏染色判断为疑似巴氏杆菌。对分离到的菌株进行生化反应、动物试验及PCR种属鉴定。结果显示该株细菌为多杀性巴氏杆菌。药敏试验结果显示该菌对头孢拉定、氟苯尼考、环丙沙星、氧氟沙星、复方新诺明高度敏感。     

10日龄肉鸭混合感染新型鸭肝炎病毒和多杀性巴氏杆菌的病原学研究

对1例疑似鸭肝炎病毒和多杀性巴氏杆菌混合感染的10日龄肉鸭采用常规的病毒、细菌鉴定方法和RT-PCR、PCR方法分别进行病毒、细菌的分离与鉴定。病毒鉴定为新型鸭肝炎病毒,细菌鉴定为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌多杀亚种。细菌对SPF鸡的毒力试验结果显示,分离的巴氏杆菌与强毒标准株C48-1毒力相近,为强毒株。细菌对10日龄肉鸭的致病性回归试验结果表明,一定数量的该株巴氏杆菌可导致10日龄雏鸭的感染死亡。结果表明,该批肉鸭为新型鸭肝炎病毒和A型多杀性巴氏杆菌混合感染。这是国内首例从感染鸭肝炎病毒10日龄雏鸭肝脏中分离到多杀性巴氏杆菌。     

增菌培养基效果试验

将自制的增菌培养基按比例添加于猪丹毒G4T10株活疫苗、猪多杀性巴氏杆菌EO630株活疫苗、猪多杀性巴氏杆菌A型CA株活疫苗、猪链球菌ST-171株活疫苗的培养。结果上述四种疫苗比使用常规培养基培养的菌数分别提高44%;34%;95%和59%;增菌的效果明显。这也说明了在其他工艺条件较稳定的情况下,增加培养基中细菌所需的营养成分和数量,对获取高浓度菌数的重要性。添加增菌培养基后,不会影响上述四种疫苗的免疫原性和安全性。菌数的提高可获得较好的经济效益和社会效益。     

猪巴氏杆菌病

<正>1相关性1880年,路易斯·巴斯德从禽霍乱病例中分离到了多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm),从而确认巴氏杆菌属为致病微生物。之后,以他的名字命名了这个菌属。多杀性巴氏杆菌被确认为猪呼吸系统疾病的病原体已经超过125年。然而,由于其可引起猪的渐进性萎缩性鼻炎(Atrophic Rhinitis,PAR)和肺炎,因此此细菌在世界各地持续显著影响着猪的健康。     

1株猪丹毒杆菌的分离与鉴定

为确定导致安徽和县某猪场猪只发病的病原,从该猪场送检病料(心、肺、脾、肝)中分离并纯化细菌,根据其形态特征、PCR鉴定及生化试验结果,确诊为猪丹毒杆菌。spa A基因序列分析结果显示该菌与猪丹毒杆菌G4T10(Gen Bank登录号:KF150604.1)有99%的同源性。全自动生化反应报告该菌为丹毒丝菌的概率高达95%。小鼠攻毒试验表明,试验组小鼠在腹股沟皮下注射该菌后,4 d内全部死亡;死亡小鼠剖检可见全身败血性出血,各脏器均有病变,从死亡小鼠的血液、心、肝、脾、肺等组织中分离到与该感染菌株形态特征完全一致的细菌。药敏试验结果表明,该菌对β-内酰胺类和大环内酯类抗生素敏感,对链霉素、卡那霉素、四环素、多西环素、林可霉素和磺胺异恶唑耐受。     

应用紫外分光光度法进行禽多杀性巴氏杆菌(C_(48-1))细菌计数的研究

本试验通过对禽多杀性巴氏杆菌(C48-1) 菌液不同稀释度吸光度值的测定,与平板活菌计数结果相结合,建立吸光度-菌液浓度回归直线y = 14.757x + 0.2038(R2 = 0.9974).试验结果证明运用测定吸光度进行细菌计数的方法具有简单、迅速等优点,在兽用细菌灭活疫苗生产过程中,具有很高的参考价值.     

介紹一种簡單的手提培养瓶制造法

为了适合广大基层兽医人員在防治疫病上检驗病理材料的便利,我們利用广口保温瓶制造成培养細菌的恆温瓶,不用电也不用油,只是使用温水,可保持温度在36—38.5℃之間,适合于大多数病元菌的生长发育。經我們与油电两用恆温箱对照培养之結果,炭疽桿菌、猪丹毒桿菌、出敗桿菌、产气性細菌的发育生长是一致的,涂片染色鏡检菌型亦无差异。現将我們制     

番鸭巴氏杆菌的分离鉴定及体外抑菌实验

为了对番鸭巴氏杆菌病的防治提供科学方法,对疑似番鸭巴氏杆菌病例进行细菌分离鉴定及体外抑菌试验。从病变部位划线接种血平板进行细菌分离培养;用微量生化法结合分子生物法对分离菌进行种属鉴定;用纸片扩散法和牛津杯扩散法检测分离菌抑菌活性;用腹腔注射分离菌来复制病例。结果:获得菌株Y-X-1、Y-X-2、Y-G-1、Y-G-2,在血平板上半透明、不溶血;对蔗糖产酸不产气,对乳糖不产酸也不产气;于1800bp处出现分离菌PCR电泳条带,分离菌16S rRNA基因序列与多杀性巴氏杆菌高度吻合,Y-G-1与MG597107.1菌株,Y-X-1与KX579748.1菌株的亲缘关系最近,进化树上处于同一分支;头孢曲松高度抑制分离菌生长,青霉素不影响分离菌生长;鸡唾液乳酸杆菌、猪小肠乳酸杆菌对分离菌均表现较强的抑菌性能;复制病例的试验动物,均死于攻菌后的12h之内,死亡动物呈现典型症状。结论:Y-X-1、Y-X-2、YG-1、Y-G-2为多杀性巴氏杆菌,该病例确诊为番鸭巴氏杆菌病。该病防治首选抗生素为头孢曲松,头孢曲松结合乳酸杆菌治疗效果更好。