新疆阿拉尔市绵羊产单核细胞李氏杆菌带菌情况的调查

为了解阿拉尔周边产单核细胞李氏杆菌的带菌情况。从阿拉尔市无菌采集120份羊鼻拭检样,依次进行两步增菌、选择性分离平板分离培养、初筛试验、生化鉴定,通过小鼠感染试验测定致病力。结果从120份样品中分离4株产单核细胞李氏杆菌,带菌率达3.3%。4株LM均引起小鼠发病,其中2株菌可使小鼠死亡。结论阿拉尔周边羊鼻拭中产单核细胞李氏杆菌的带菌率为3.3%,但都有致病性,调查为该地区动物性食品安全评估及产单核细胞李氏杆菌的监测提供参考和科学依据。     

单核细胞增多性李氏杆菌人工感染绵羊试验

将人从病羊脑分离纯化的单核细胞增多性李氏杆菌经列脉接种于健康得奴绵羊３只,结果被感染绵羊均表现出与自然感染绵羊相同的临床症状和病理变化,并从脑、心血、淋巴结中回收到了单核细胞增钨生李氏杆菌,从而证明了该分离株单核细胞增多性李氏杆菌具有较强的致病性。     

家禽的单核细胞增生李氏杆菌污染

家禽中所见的单核细胞增生李氏杆菌体水平污染并不是家禽胴体体有时所见这种细菌高水平污染的原因，进行良好的消毒可略微降低污染的比例。     

检测产单核细胞李氏杆菌溶血素的胶体金试纸条制备及初步应用

产单核细胞李氏杆菌为重要的食源性病原菌,本研究旨在建立快速、灵敏、特异的检测方法,提高检测效率和检测通量。李氏杆菌溶血素(LLO)蛋白经原核表达后, 制备单克隆抗体, 测定单克隆抗体的亚型、效价及亲和力。柠檬酸钠法研制LLO胶体金试纸条,并对试纸条的特异性、敏感性、重复性、稳定性及模拟样品进行检测,并初步应用于实际海产品的检测。结果发现,制备的LLO单克隆抗体特异性强、稳定性高、重复性佳、灵敏度较高,亲和力好,亲和力常数为4.25×10⁸ L·mol^－1。人工污染样品试验表明灵敏度与纯细菌培养物基本一致,为3.0×10⁵CFU·mL^-1。将LLO胶体金试纸条应用于500份海产品的实际检测中,产单核细胞李氏杆菌的阳性检出率为2.20% (11/500),略低于国标检测方法(GB4789.30—2010)的2.40%(12/500)和PCR检测方法的2.40%(12/500),三者之间符合率为91.67%。另外缩短检测时间至15 min,检测效率大幅度提高。本研究建立的LLO胶体金检测方法可用于产单核细胞李氏杆菌的快速检测。     

鸡李氏杆菌病的诊断和防控

重点对鸡李氏杆菌病的病原、流行病学及临床诊断等方面进行分析,并从搞好环境卫生的角度对鸡李氏杆菌病的防控作了简单介绍.     

1株跨种裂解李氏杆菌噬菌体的分离鉴定

本研究旨在获得天然李氏杆菌噬菌体,提供防治李氏杆菌病新型生物制剂,减少抗微生物药物的使用,抑制病原菌耐药性的产生。利用产单核细胞李氏杆菌作为宿主菌对屠宰场污水进行双层琼脂平板法筛选,获得噬菌体,并对其进行透射电镜观察、生长特性检测(温度、pH、一步生长曲线、最佳感染复数、有机溶剂影响)、基因组酶切鉴定和全基因组测序分析。分离出的产单核细胞李氏杆菌噬菌体中,选取1株裂解性强,遗传稳定的噬菌体进行后续试验,并命名为LP8;经电镜观察为肌尾科噬菌体,可以跨种裂解18株产单核细胞李氏杆菌和5株威尔斯李氏杆菌,确定LP8的最佳感染复数为1、最适生长温度为45 ℃、最适pH为7;在6种有机溶剂中,仅异戊醇可导致LP8活性丧失;对提取的基因组进行酶切鉴定,确定为双链DNA;LP8全基因组测序结果表明,基因组大小为87 038 bp、含有120个编码基因、编码基因的累计长度为76 326 bp、编码基因的平均长度为636 bp、编码区域长度占基因组的比例为87.69%。本试验分离出产单核细胞李氏杆菌噬菌体,并对其噬菌能力和应用价值进行鉴定。分离出的LP8噬菌体相较于李氏杆菌的噬菌体,细菌裂解能力更强,适应环境范围更广。本研究为实验室后续建立产单核细胞李氏杆菌噬菌体库和产单核细胞李氏杆菌噬菌体的其他应用提供了良好的基础。     

梅花鹿单核细胞增生性李氏杆菌病的诊治

2006年,长春市某鹿场有7头梅花鹿先后在10日内发生死亡,并有多头陆续发病,经临床检查、病理剖检、实验室检查及动物试验等方法,诊断为单核细胞增生性李氏杆菌病。     

一起仔猪感染李氏杆菌病的诊疗

李氏杆菌病是由单核细胞增多性李氏杆菌引起的畜禽传染病。易感动物广泛，自然感染以绵羊、猪和家兔较多，牛和山羊次之，马、犬、猫很少；在家禽中，鸡、鹅多见；啮齿动物特别是鼠类和一些野兽、野禽易感，常成为本病原菌在自然界中的贮存库。李氏杆菌病发病率较低，死亡率较高。健康猪吃了带菌鼠的尸体、带菌饲料或接触被污染的环境，通过消化道、呼吸道及眼结膜传染。2005年4月初，我区部分仔猪出现死亡现象，初诊为李氏杆菌病。现将对该病的诊疗情况报告如下。     

Systemic Listeria monocytogenes infection and concurrent pleural mesothelioma in a cat

Herein we describe a rare case of systemic Listeria monocytogenes infection with concurrent pleural mesothelioma in a stray cat that was found dead and submitted for autopsy. Gross pathology changes consisted of thoracic clear yellow fluid admixed with suspended fibrin strands; clear-to-tan, variably sized, <3 mm diameter pulmonary nodules; and enlargement of the submandibular, retropharyngeal, and prescapular lymph nodes. Histologic changes consisted of extensive areas of suppurative inflammation and necrosis with mineralization that partially effaced the pulmonary parenchyma and lymph nodes. Random, distinct necrotic foci were present throughout the hepatic parenchyma. Extending from the pleura, within perinecrotic alveolar spaces, and infiltrating the submandibular, retropharyngeal, and prescapular lymph nodes were dense sheets of neoplastic epithelioid cells with moderate pleomorphism and occasional karyomegaly and multinucleation. Neoplastic cells exhibited immunolabeling for pancytokeratin AE1/AE3 and vimentin, consistent with pleural mesothelioma. Aerobic bacterial culture of lung yielded heavy growth of L. monocytogenes. Immunohistochemistry (IHC) for L. monocytogenes revealed clusters of bacteria in the lung, lymph node, and liver. Pathologic changes were consistent with systemic listeriosis, confirmed by bacterial culture and IHC, and concurrent pleural mesothelioma.     

单核细胞增生性李斯特菌感染ICR小鼠模型的建立

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种人畜共患食源性致病菌,能引起人和动物较为严重的感染症状。现广泛使用具有免疫活性的小鼠模型测定半数致死量(LD₅₀)来评价不同LM菌株的致病性。为建立LM的ICR小鼠模型,本研究采用1/2a血清型的N21 LM菌株,分别以10⁶、10⁷、10⁸、10⁹和10¹⁰ CFU的剂量口腔灌注感染6周龄ICR小鼠,每组10只;另取10只接种PBS作为对照组,测定LM对ICR小鼠的LD₅₀;另取40只小鼠,平均分为2组,公母各半,以测定的LD₅₀剂量接种LM,分别对各组小鼠临床症状、组织病理变化、体重变化及组织中细菌载量进行评价。结果发现,N21 LM菌株对ICR小鼠的LD₅₀为10^9.25 CFU;感染周期为10 d左右,感染小鼠出现被毛粗糙、精神萎靡、阴茎垂出及体重下降等临床症状。组织病理学分析结果显示,肝脏先后出现实质内灶状细菌团块、形成血栓、细胞坏死等;脾脏主要表现为白髓内淋巴细胞减少;肺脏主要表现为纤维素性肺炎。菌落计数和Real-time PCR的检测结果发现肝脏中细菌载量最高,脾脏次之。结果表明,ICR小鼠能作为单核细胞增生性李斯特菌的感染模型。本试验结果为研究LM的致病机制、疫苗研究及抗菌肽转基因小鼠抗LM的评价奠定了基础。     

食品中产单核细胞李斯特菌PCR检测方法的建立

根据产单核细胞李斯特菌hlyA基因设计引物,进行PCR扩增,检测该方法的特异性和灵敏度。人工污染样品经Half-fraser和Fraser增菌后进行PCR检测。结果表明,产单核细胞李斯特菌扩增出234bp的条带,对照菌未扩增出目的条带。该方法的灵敏度为104cfu/mL。人工污染样品的检出限为8cfu/25g,说明PCR方法检测食品中产单核细胞李斯特菌具有快速、特异、敏感等特点,具有较高的实用价值。     

产单核细胞李斯特菌毒力因子及免疫预防研究进展

产单核细胞李斯特茵在病原学上已被公认为一种人兽共患病和食源性疾病的致病菌,在各国已引起食品加工部门、公共卫生部门的高度重视和研究者的兴趣.文章就该菌的毒力因子及免疫预防研究做一简述.     

单核细胞增多性李斯特菌LMO1847基因在不同应激条件下的表达

根据GenBank登陆的单增李斯特菌标准株EGD序列设计引物,PCR扩增LM01847基因片段后插入表达载体pET-30 a,构建重组原核表达载体,并在E. coliBL21中成功表达。纯化目的蛋白制备多抗,ELISA结果显示:该蛋白多抗与单增李斯特菌全菌、全菌多抗与该蛋白均可发生反应。证明该蛋白在天然状态下存在于单增李斯特菌表面,且具有良好的免疫反应性。该蛋白在45℃、高盐、酸性环境中表达水平基本稳定,但在低pH值条件下反应活性消失;高盐或低温条件下,表达量随盐浓度的升高或温度的下降而降低。除4℃以外,该蛋白均能保持良好的免疫反应活性。本研究为建立针对该蛋白的李斯特菌免疫微球凝集、免疫磁珠分离等检测方法奠定基础。     

食源性单增李斯特菌inlA/inlB/inlC基因缺失株的构建及其生物学特性分析

为探究内化素inlA/inlB/inlC基因对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)生物学特性的影响,本研究采用融合PCR方法构建Lm681 inlC基因缺失突变体,并构建pKSV7-△inlC穿梭载体,将其转化Lm681-△inlAB感受态细胞,利用温度(42℃)和氯霉素(10μg/mL)抗性双重压力来实现同源重组,筛选同源重组子进行鉴定并研究其部分生物学特性。结果显示,PCR和测序结果证实成功构建了3基因缺失株(Lm681-△inlABC),且缺失株的生长特性与野生株相比无明显差异,溶血特性与野生株保持一致;小鼠感染试验显示,野生株Lm681、Lm681-△inlAB和Lm681-△inlABC对小鼠的致死率分别为80%(8/10)、60%(6/10)和40%(4/10),对小鼠的LD50分别为4.36×10~4、1.35×10~6和2.95×10~7 CFU,且Lm681-△inlABC在肝脏、脾脏及脑组织中的定植能力极显著低于野生株(P<0.01)。研究结果表明,inlA/inlB/inlC基因对Lm致病性发挥具有一定的作用,为深入研究inlX基因介导Lm入侵宿主细胞过程中的作用机制提供了科学依据。     

单核细胞增生症李斯特菌的分子亚分型法及其应用

细菌亚分型方法的建立不仅能检测人群李斯特菌病的暴发流行 ,还能追踪食物链中单核细胞增生症李斯特菌 (L M)的污染情况。亚分型法对更好的了解 LM的群体遗传学、流行病学及生态学有重要意义。过去的 5年内 ,在建立对 LM敏感、快速、自动化、简便易用的分子亚分型方面起得了重大的进展。文章对 L M不同的亚分型方法及其应用作了概述     

单核细胞增生李斯特菌prfA基因重组菌的构建及其生物学特性研究

为制备单核细胞增生李斯特菌(LM)减毒的prfA基因重组菌,本研究通过构建重组质粒pKSV7-ΔprfA-gfp,电转化至LM TA感受态细胞中,将绿色荧光蛋白基因gfp插入LM的prfA基因第25 bp～93 bp之间,在42℃和10μg/mL氯霉素的双重选择压力下,筛选LM重组菌(rLM-ΔprfA-gfp),并对其生物学特性进行鉴定。试验结果表明,重组菌与亲本菌相比具有相似的体外生长特性,溶血素基因(hly)mRNA的转录水平降低;对小鼠的毒力显著减弱,其LD50由105.53升高到109.79,对肝、脾、肾的损伤不明显;免疫保护力试验显示重组菌与LM TA灭活疫苗的保护率分别为90%和35%,表明rLM-ΔprfA-gfp比传统疫苗具有更高的保护力。本研究构建的rLM-ΔprfA-gfp具有良好的遗传稳定性,并且具有较好的免疫原性,为LM活疫苗载体和分子标记疫苗的研制奠定了基础。     

单增李斯特菌双元调控系统lmo1060/lmo1061缺失株的构建及其抗酸应激能力

为了探明双元调控系统Lmo1060/Lmo1061是否影响单增李斯特菌(LM)的抗应激作用及致病性,本研究以LM 10403S为亲本株,通过同源重组技术构建了 Δlmo1060/lmo1061缺失株.应激存活试验结果表明,lmo1060/lmo1061缺失显著增强LM在酸应激(pH=2.5)条件下的存活率,但不影响该菌...     

Listeriosis in sheep. Isolation of Listeria monocytogenes from grass silage.

Two hundred and ninety-one grass silage samples from 113 farms with recent outbreaks of listeriosis were examined for the presence of Listeria monocytogenes (Lm). The frequency of Lm isolations increased with increasing pH. Lm was isolated from 22 % of the samples with pH < 4, from 37 % with pH 4–5 and from 56 % with pH > 5. Formic acid had been used as additive.A similar investigation was carried out on 32 samples from a farm with no outbreak of listeriosis during the investigation period. Lm was isolated from 9 samples.