甲型H1N1与季节性H1N1流感病毒检测基因芯片的制备与初步应用

建立DNA微列阵技术检测甲型H1N1和季节性H1N1流感病毒的方法,进而探讨该方法用于检测临床标本的可行性。通过生物医学数据库甲型H1N1流感病毒及季节性H1N1亚型流感HA与NA基因进行检索和筛选,应用分子生物学软件,进行序列分析、引物及探针设计,并进行验证。试验所设计的探针可以对甲型H1N1流感与季节性H1N1流感病毒进行区分,用该方法检测了长春市CDC送检的6份疑似甲型H1N1流感病毒临床病例,4份阳性,检测结果同实时荧光定量PCR方法一致。结果表明,利用本研究建立的DNA微列阵技术检测甲型H1N1流感病毒方法,特异性和敏感性强,可作为甲型H1N1流感病毒临床标本检测方法。     

甲型H1N1流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立快速检测甲型H1N1流感病毒[Influenza A(H1N1)pdm09]的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究根据甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因保守序列,设计并合成了特异性引物和TaqMan MGB探针,采用实时荧光定量PCR技术检测甲型H1N1流感病毒。使用含有选定检测序列的重组质粒pMD-HA标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.999,敏感性可达50 TCID50。本研究中,甲型H1N1流感病毒TaqMan荧光定量RT-PCR方法与经典H1N1、类禽H1N1、类人H1N1、H1N2、H3N2、H5N1和H9N2流感病毒无交叉反应。结果表明,该方法可以在人类和动物间有效地检测甲型H1N1流感病毒。     

猪甲型H1N1流感及其防治

2009年3月,墨西哥和美国等先后发生人感染甲型H1N1流感病毒,为A型流感病毒。该毒株包含有甲型H1N1流感、禽流感和人流感3种流感病毒的基因片断,是种新型甲型H1N1流感病毒,可以人传染人。这种病在猪中经常发生,很少导致猪的死亡,猪的病死率为1%~4%。人类很少感染甲型H1N1流感病毒,但也曾发现人类感染甲型H1N1流感的病例,但大多数是与病猪有过直接接触的人。     

甲型H1N1流感的特点及其防控

甲型H1N1流感病毒是2009年3月墨西哥出现的一种新型流感病毒。此后不久,这种病毒造成世界范围内的蔓延。论文分析总结了甲型H1N1流感病毒与1918年流感病毒的相似性以及表现出的新特点,归纳了这种病毒的潜在危害性。此外,介绍了甲型H1N1流感的防控策略,主要包括加强猪群监控,流感疫苗和抗流感病毒药物治疗。     

2009甲型H1N1流感病毒在人与动物间的潜在风险评估

2009年4月份爆发的甲型H1N1流感,最初被命名为H1N1亚型猪流感,一时间猪价大跌,猪肉滞销,人们谈"猪"色变。2009甲型H1N1流感病毒在全球范围内的爆发证实了动物源性流感病毒的潜在风险。在食品安全问题受到全球性关注的今天,2009甲型H1N1流感病毒在人与动物间的潜在风险值得我     

甲型H1N1流感病毒核酸检测能力验证样品制备及其应用效果评价

为考核实验室检测甲型H1N1流感病毒的能力,设计和实施了“CNAS T0459甲型H1N1流感病毒核酸检测能力验证计划”.利用甲型H1N1流感病毒(2009)和经典H1N1猪流感病毒核酸标准物质制备6组能力验证阳性样品,经实验室检测分析,所制备的样品均匀性和稳定性均达到中国合格评定国家认可委员会对能力验证样品的要求.将6组阳性样品和1组阴性样品编号后下发54家参试实验室,共有50家实验室报送了有效数据,其中完全达到能力验证要求的实验室共34家,满意率达68％,其余16家为不满意实验室,包括8家实验室检测经典H1N1猪流感病毒满意,但甲型H1N1流感病毒(2009)特异性检测不满意.本次能力验证为整体提升我国甲型H1N1流感病毒的检测水平和评估各级实验室检测能力具有重要意义.     

多重RT-PCR方法检测新型甲型H_1N_1流感病毒的研究

为了建立快速检测新型甲型H1N1流感病毒的多重PCR技术,根据GenBank中公布甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)的HA和NA基因序列,设计并合成两套特异性引物。使用TaKaRa公司的一步法RT-PCR试剂盒和自行设计合成的引物建立多重RT-PCR反应,按照预期的PCR产物序列合成的DNA作为阳性对照。结果表明,该方法具有良好的特异性,可以将甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)与传统甲型H1N1、H3N2、H5N1、H6N2和H9N2亚型流感病毒区分。该方法同时具有较高的灵敏度,最低可以检测到100个拷贝的阳性克隆质粒。在对183份发热病人临床咽拭子样品检测中发现了10份阳性样品,对350份猪鼻腔拭子样品检测全部呈阴性,结果与中国检验检疫科学研究院试剂盒检测结果一致,说明了该多重RT-PCR方法在临床检测新型甲型H1N1流感病毒方面具有广阔的应用前景。     

猪场如何防控甲型H1N1流感

正在全球范围内发生蔓延的甲型H1N1流感疫情,是由一株新型流感病毒引起的具有公共卫生意义的重大疫病.已证实该病毒的核酸包含人流感病毒、北美禽流感病毒和北美、欧洲、亚洲三类猪流感病毒的多个基因.显然,甲型H1N1流感的发生,是人与动物流感病毒在某种特定条件下交互作用、重组变异的结果.该病自公布和报道以来,引起了世界范围内空前而广泛关注,截止2009年5月12日,世界上已有30个国家和地区确诊人感染该病,目前该病在传播方面的显著特征是人际间传播,且人感染甲型H1N1流感病毒后可以传染给猪,从而导致甲型H1N1流感的发生和流行.我国内地和香港已确诊2例人感染甲型H1N1流感的输入病例.     

理性看待甲型H1N1流感疫情

继墨西哥出现甲型H1N1流感疫情后,美国、英国、韩国等国相继出现甲型H1N1流感疫情。世卫组织警告：甲型H1N1流感比禽流感更可怕。甲型H1N1流感病毒早晚都会发生变异,使甲型H1N1流感能轻易在人与人之间传播,这只是个时间问题。一旦如此,那么它将给人类带来一场前所未有的大灾难。     

甲型H1N1(2009)流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价

自甲型H1N1(2009)流感病毒于2009年在世界多个国家暴发流行后,许多国家的猪群中检测到该病毒的存在,因此建立快速准确的甲型H1N1流感病毒的检测方法成为迫切需求。本研究针对甲型H1N1(2009)流感病毒NA基因设计特异性引物和探针,建立甲型H1N1(2009)流感病毒特异性实时荧光RT-PCR快速检测方法。并将该方法与WHO推荐美国CDC建立的检测方法和美国农业部推荐的检测方法进行比较。通过田间试验验证该方法在实际应用中的效果。结果表明:本研究建立的方法对检测甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的灵敏度达到10-6,与WHO推荐的A型流感病毒实时荧光PCR检测方法的灵敏度一致,并且高于美国农业部推荐方法的检测灵敏度(10-5);该方法特异性强,与经典型H1N1和其他亚型流感病毒株无任何交叉反应。与香港兽医化验所进行了检测比对,检测灵敏度和特异性完全一致。近3 800份的田间试验表明,所建立的方法准确可靠。本研究所建立检测方法快速灵敏,检测结果准确可靠,适合用于甲型H1N1(2009)流感病毒的分子生物学检测和监测。     

日本发现H5N1和甲型H1N1流感病毒易杂交

<正>2010年8月5日,日本东京大学医学研究所教授河冈义裕领导的研究小组在美国《病毒学杂志》网络版上发表论文指出,H5N1型禽流感病毒具有易和甲型H1N1流感病毒杂交的特性,虽然H5N1型禽流感病毒不容易感染人类,但它与甲型H1N1流感病毒杂交后,有可能诞生传染性更强的新病毒。     

日本研究发现部分甲型H1N1流感病毒出现变异

日本一研究小组18日发布的最新研究报告称,部分甲型H1N1流感病毒已出现变异。报告说,东京大学医学研究所教授河冈义裕领导的研究小组发现,变异发生在甲型H1N1流感病毒表面的血细胞凝集素上,这种刺     

抗猪甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备与特性分析

本研究旨在制备猪甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体.采用RT-PCR方法扩增猪甲型H1N1流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS上,获得重组质粒pCAGGS-HA,转染293T细胞,通过间接免疫荧光(IFA)检测表明HA蛋白在293T细胞中得到表达.将pCAGGS-HA以100 μg·只-1剂量免疫5周龄BALB/c小鼠,获得4株稳定分泌抗HA蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为11G7、3C10、3G3和2B11.其中11G7诱导小鼠产生的腹水HI效价为14log2,中和效价为1:8 192,HI试验结果进一步表明11G7只与甲型H1N1流感病毒发生反应,而不与其他H1N1、H1N2、H3N2、H5N1及H9N2亚型流感病毒反应.该MAb的制备将为建立猪甲型H1N1流感病毒与传统亚型SIV的鉴别诊断方法奠定基础.     

正确认识甲型H1N1流感

什么是甲型H1N1流感？ 人的流感病毒分为甲、乙、丙三型,其中甲型病毒最为常见,也是流感大流行的罪魁祸首。甲型病毒的两种表面抗原：H（血凝素）和N（神经氨酸酶）,用于区分不同的病毒血清型。此次墨西哥、美国等地暴发的为甲型H1N1流感。这次甲型H1N1流感的源头并不清楚,并非是直接由猪传染给人的。     

甲型H1N1流感病毒及其疫苗研究热点

2009年4月初,北美爆发一种新型甲型(H1N1)流感病毒,并通过各种途径迅速传播,引起了全球极大的恐慌。文章介绍了历史上历次甲型流感大流行,流感的分类与生物学特性,甲型H1N1流感的病原学特点和分子特征,甲型H1N1流感的传染源、传染性、传染途径和传染方式,甲型H1N1流感的临床特征和严重危害。最后指出疫苗是最经济有效的预防流感的手段,国内生产疫苗主要使用鸡胚作为生产基质,筛选出高丰度的流感病毒适应性细胞将成为研究的热点。     

农业部加强生猪甲型H1N1流感预防工作

针对当前全球检测到生猪感染甲型H1N1流感病毒的国家和地区不断增多的情况，近日，农业部再次发出通知，全面部署进一步加强生猪甲型H1N1流感预防工作。     

甲型流感病毒H1N1感染猪和其他动物的回顾

甲型流感病毒在哺乳动物和禽类中存在广泛感染谱,通常野生水禽被认为是甲型流感病毒主要的自然贮存宿主。2009年5月2日,首例新甲型H1N1病例确诊于加拿大一个猪场,公共卫生学调查表明病原是由人传播到猪的。随后新甲型H1N1感染火鸡、猫、犬、水貂和一些野生动物相继被报道,病毒从人传播到动物在后续病例得到更多证实。此病毒最初被命名为＂猪流感H1N1＂,虽然后来被正名为新甲型H1N1,但仍导致全球范围内猪肉产品消费锐减,生猪养殖业深受影响。至今,新甲型H1N1已平息,总结新甲型H1N1感染猪及其他动物感染谱,不但对正确认识流感病毒传播特点、为类似突发疫病防控提供经验,而且也使我们更重视流感病毒易感动物监测,避免使猪再次蒙冤,对保护养猪业健康发展有一定的价值。     

农业部部署进一步加强生猪甲型H1N1流感预防工作

针对当前全球检测到生猪感染甲型H1N1流感病毒的国家和地区不断增多的情况，近日，农业部再次发出通知，全面部署进一步加强生猪甲型H1N1流感预防工作。     

认识甲型H1N1流感

甲型H1N1流感（Swine influenza,SI）是由A型流感病毒引起的一种猪的急性呼吸道传染病。该病不仅危害猪体健康,同时影响育肥猪的上市时间,并增加饲养成本,对养猪业造成的损失不容忽视。重要的是甲型H1N1流感病毒在整个流感病毒的遗传进化和生态分布中都占有重要地位,特别是对人类健康具有巨大威胁。     

我国首个甲型H1N1流感病毒耐药分析基因芯片问世

<正>我国首个专门针对甲型H1N1流感病毒抗药性的基因确诊和耐药性分析的基因芯片,5月15日在军事医学科学院放射与辐射医学研究所研制成功。据介绍,这种芯片采用了具有自主知识产权的纳米标记信号放大技术,在准确检测到甲型H1N1流感病毒