分子生物学技术在菇类研究中的应用

本文报道了应用ＲＦＬＰｓ和ＲＡＰＤ技术分析香菇类缘关系，鉴别品系及分析木耳杂交后人攻原体质体融合子的结果，发现供试的３２个香菇菌株的总ＤＮＡ限制性内切酶片段长度存在多态性；木耳杂交后代、融合子及其亲株间ＤＮＡ ＰＣＲ扩增产物谱带型出现差别，这充分说明ＲＦＬＰｓ和ＲＡＰＤ技术在分析遗传变异、鉴别品系、鉴定杂种和融合子研究中的重要作用。     

AFLP技术在黄瓜种资源鉴定及分类上的应用初探

关于黄瓜不同生态型之间的亲缘关系,有学者研究发现各类型黄瓜的遗传变异幅度较小,遗传基础狭窄,用同工酶酶谱研究较为困难〔１,２〕。随着生物技术的发展,ＲＡＰＤ技术开始应用于各类作物种属的分类和品种的鉴定,但在黄瓜种质资源和品种鉴定方面,因扩增的ＤＮＡ多态性很低,效果不理想〔２～４〕。ＡＦＬＰ技术是继ＲＡＰＤ技术后发展起来的新型分子技术,该方法克服了ＲＡＰＤ技术重复性差、多态性低等缺点,以其准确和高多态性而广泛用在资源的分类及分子标记辅助育种等方面。但尚未见到在黄瓜方面应用的报道。本文试图用ＡＦＬＰ…     

主要分子标记技术比较

主要分子标记技术比较周秀艳在过去的１０年中，分子标记技术得到突飞猛进的发展，至今已有十几种分子标记技术相继出现，并在各个领域得到了应用。本文系统地比较了植物中广泛应用的ＲＦＬＰ，ＲＡＰＤ和ＳＳＲ技术，以供参考。分子标记ＲＦＬＰＲＡＰＤＳＳＲ全称限制性...     

分子标记在植物上的应用

综述分子标记技术ＲＦＬＰ、ＲＡＰＤ、ＡＦＬＰ的基本原理、优缺点及其在植物研究中的应用情况。     

马铃薯青枯病抗性的分子标记

对两个马铃薯二倍体分离世代群体ＥＤ和ＣＥ共１４０个基因型进行青枯病人工接种鉴定,并以此为作图群体,综合ＲＡＰＤ,ＳＳＲ,ＡＦＬＰ３种标记技术,利用ＢＳＡ分析方法对抗性基因进行分子标记筛选和定位。筛选与抗病感病性状相连锁的３个ＲＡＰＤ标记ＯＰＧ０５９４０、ＯＰＲ１１８０和ＯＰＯ１３７７０;筛选到一个ＳＳＲ标记ＳＴＭ００３２,被定位于染色体ＸⅡ上,检测到７个ＡＦＬＰ多态性带,初步认为其与抗病性相关,并     

分子标记技术概述*(下)

２．５ ＳＴＳ技术 ＳＴＳ技术是基于ＲＦＬＰ发展起来的一类ＰＣＲ标记技术。Ｏｌｓｏｎ等（１９８９）首先在人类基因组的物理图谱研究中使用ＳＴＳ技术。ＳＴＳ技术的基本原理是通过对ＲＦＬＰ标记使用的cＤＮＡ克隆进行测序，然后根据其序列设计一对引物，利用这对引物对基因组ＤＮＡ进行特异扩增。由于在cＤＮＡ中内部存在着插入、缺失等非表达区域，从而使得与两引物配对的区域形成多个不同扩增子，并表现出扩增片段的多态性。ＳＴＳ技术是利用ＰＣＲ对ＲＦＬＰ标记的转化，具有ＲＦＬＰ标记无法比拟的实用上的可行性。但并不是所有Ｒ…     

西瓜野生种质耐冷性基因连锁的RAPD标记

运用ＲＡＰＤ技术进行了西瓜野生材料ＰＩ４８２３２２耐冷性基因连锁的分子标记的研究,找到了一个分子连锁标记ＯＰＧ１２／１９５０与耐冷基因连锁,其遗传距离为６．９８ｃＭ。     

沙田柚遗传转化的探讨

采用含ｎｏｓ基因和人工合成柞蚕抗菌肽Ｄ基因ＡＰ－Ｄ基因的根癌农杆菌对沙田柚外植体进行转基因研究,与根癌农杆菌共培养产生的芽,苗经Ｋｍ敏感性筛选,获得了若干转基因植株,并对这些植株进行了报告基因ｎｏｓ表达的电泳检测,同位素标记、ＡＰ－Ｄ基因为探针的点印迹杂交,外源ＡＰ－Ｄ基因的ＰＣＲ扩增和Ｓｏｕｔｈｅｎ杂交。结果显示,报告基因ｎｏｓ、抗菌肽Ｄ基因已转入沙田柚植株细胞中。     

RFLP在马铃薯遗传育种中的应用

介绍了ＲＦＬＰ的基本原理和实验技术。详细阐述了ＲＦＬＰ在马铃薯遗传育种中的应用，主要有以下７个方面：（１）品种鉴定和分类；（２）识别体细胞杂种和纯合二倍体；（３）进行马铃薯进化研究；（４）构建马铃薯分子连锁图谱；（５）进行马铃薯数量性状位点（ＱＴＬ）定位；（６）评价２ｎ配子转移的杂合性效率；（７）评价四倍体马铃薯杂种优势学说。     

大白菜和紫菜薹自交系染色体组DNA的RAPD分析

用８个随机引物（１０ｂｐ）对２个紫菜薹自交系的３个单株和４个大白菜自交系的４个单株的染色体组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，共有４０条带分离清晰、明亮，其中引条带在７个单株中表现出差异，可作为遗传标记（ＲＡＰＤ标记）。４个大白菜自交系之间的平均差异条带数为１２．３，２个紫菜薹自交系之间为９．５，大白菜与紫菜薹之间平均有１５．５条带的差异。用７个引物在９３Ｗ０５－７（紫菜薹）和９３Ｗ５８－５（大白菜）之间检测出对个ＲＡＰＤ标记。从同一自交系的不同单株抽提的染色体组ＤＮＡ扩增出较一致的ＤＮＡ谱带，而不同自交系间扩增出的ＤＮＡ谱带差异很大，这表明此方法也可以象ＲＦＬＰ一样，用于大白菜和紫菜薹的分子标记。     

苹果RAPD分析体系的建立

对富士苹果（Ｍａｌｕｓ　ｐｕｍｉｌａ　Ｍｉｌｌ．ｃｖ．Ｆｕｊｉ）ＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ　Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＤＮＡ）分析体系的优化研究表明,ＲＡＰＤ反应体系中,ＤＮＡ、Ｔａｑ酶、引物和Ｍｇ２＋４种主要成分的最适用量分别为：２０ｎｇ、１．０ Ｕ、０．２ｕｍｏｌ·Ｌ－１和３．０ｕｍｏｌ·Ｌ－１。采用该优化体系,以 ＯＰＪ０３为引物,构建了我国及世界范围内苹果生产中重要的２８个品种的ＲＡＰＤ指纹图谱,分析了其遗传多样性,区分了供试的２８个苹果品种中的１５个,区分率达５３．６％。讨论了ＲＡＰＤ鉴定苹果品种的应用及其主要影响因素。     

分子标记在桃上的应用

遗传标记有形态标记、细胞标记、生化标记和分子标记等几种方法。分子标记是随着分子生物学的发展新近形成的遗传标记方法 ,能从生物体的遗传物质 (ＤＮＡ)去揭示生物体的遗传本质。有关分子标记应用的原理及其在果树上的应用已有文献综述[1～ 2 ] 。本文根据笔者对 2 0 3份桃类植物的分子标记研究和国内外有关桃分子标记方面的研究报道 ,对分子标记在桃上的应用作一简要介绍。1　分子标记技术在桃种质资源研究上的应用1 1　桃属种的系统发育和分类　笔者采用ＲＡＰＤ技术 ,用从 2 0 0多个随机引物筛选的 2 2个引物 ,对桃属主要种的ＤＮＡ进…     

葡萄属植物染色体DNA的提取、纯化及RFLP鉴定

利用ＪｅｎｎｉｆｅｒＡ．ＣｏｕｃｈａｎｄＰａｕｌＪ．Ｆｒｉｔｚ的改良方法提取葡萄嫩叶染色体ＤＮＡ，并进行ＲＦＬＰ分析。结果表明，该方法提取的ＤＮＡ均未降解；以Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ层析柱纯化后可进行ＲＦＬＰ分析；核糖体ｒＤＮＡ的ＰＶｖｃ一Ａ片段制备的探针与ＨｉｎｄⅢ酶组合，使所有供试样品都显示多态性。     

葡萄属植物染色体DNA的提取,纯化及RFLP鉴定

利用Ｊｅｎｎｉｆｅｒ Ａ．Ｃｏｕｃｈ ａｎｄ Ｐａｕｌ Ｊ．Ｆｒｉｔｚ的改良方法提取葡萄嫩叶染色体ＤＮＡ，并进行ＲＦＬＰ分析。结果表明，该方法提取的ＤＮＡ均未降解；以Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ层析柱纯后后可进行ＲＦＬＰ分析．核糖体ｒＤＮＡ的ＰＶｖｃ－Ａ片段制备的探针与ＨｉｎｄⅢ酶组合，使所有供试样品都显示多态性。     

RELP在柑桔遗传多样研究上的应用

通过研究摸索出适宜提取柑桔叶片总ＤＮＡ的方法，利用异源ＤＮＡ探针－小麦ｒＤＮＡ克隆ＰＴＡ７１，与用四种核酸内切酶ＥｃｏｒＩ，ＰｓｔＩ，ＢａｍＨ１及Ｂｇ１Ⅲ酶切消化的几种柑桔叶片总ＤＮＡ杂交，结果表明，ＰＴＡ７１－ＥｃｏＲ１，ｐＴＡ７１－ｐＴＡ７１－ＢａｍＨ１，ｐＴＡ７１－Ｂｇ１Ⅲ四种探针－酶组合均可在本地早、宜昌橙、枸橼和金柑等柑桔等型中检测到ＲＦＬＰ差异，利用ｒＤＮＡ的ＲＦＬＰ变异可以从分子水平     

RAPD标记在苹果属种间杂交一代的分离方式

以富士苹果和山定子及二者的种间杂交Ｆ１代为试材,对ＲＡＰＤ标记的分离方式进行了研究。结果表明,ＲＡＰＤ标记在Ｆ１代的分离方式可归为３类,即呈孟德尔分离、偏离孟德尔分离比例和异常分离。呈孟德尔分离的情况有：不分离（代表了父母本中相应ＲＡＰＤ标记的５种组合：ＡＡ×ＡＡ、ＡＡ×Ａａ、Ａａ×ＡＡ、ＡＡ×ａ、ａ×ＡＡ）、１∶１分离（代表了父母本中相应ＲＡＰＤ标记的２种组合：Ａａ×ａ、ａａ×Ａａ）和３∶１分离（代表了父母本中相应ＲＡＰＤ标记的１种组合：Ａａ×Ａａ）。异常分离的标记包括：Ｆ１代出现双亲均不具备的标记、分子量在不同Ｆ１个体间变化的标记,以及隔代遗传的标记。据对２００个ＲＡＰＤ标记的统计分析,不分离标记、按１∶１或３∶１比例正常分离的标记、偏离孟德尔分离比例的标记和异常分离标记分别占４５．５％、４５．０％、８．０％和１．５％;双亲共有标记中７４．７％不发生分离,单亲特有标记中５７．１％～７９．６％发生正常分离;富士特有标记中不分离标记占３３．３％,而山定子特有标记中不分离标记只占４．３％,表明富士基因组中纯合基因位点的比例要高于山定子。对异常分离的ＲＡＰＤ标记等进行了讨论。     

苹果RAPD分析体系的建立

对富士苹果（Ｍａｌｕｓ Ｐｕｍｉｌａ Ｍｉｌｌ．ｃｖ．Ｆｕｊｉ）ＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ）分析体系的优化研究表明,ＲＡＰＤ反应体系中,ＤＮＡ、Ｔａｑ酶、引物和Ｍｇ＾２＋４种主要成分的最适用量分别为：２０ｎｇ、１．０Ｕ、０．２μｍｏｌ．Ｌ＾－１和３．０μｍｏｌ．Ｌ＾－１。采用该优化体系,以ＯＰＪ０３为引物,构建了我国及世界范围内苹果生产中重要的２８个     

威赛克柱型苹果与旭的AFLP多态生研究

以旭和威赛克等８个柱型苹果品种（品系）为试材,建立了ＡＦＬＰ银染技术体系。经过引物筛选,发现引物ＰｓｔＩ－ＧＡＣ／ＭｓｅＩ－ＴＡ和ＰｓｔＩ－ＧＡＣ／ＭｓｅＩ－ＣＧ可分别在旭和威赛克之间各扩增出１条特异片段,初步认为这两条特异片段可能与苹果柱型Ｃｏ基因相关。     

中国枣种质资源的RAPD分析

利用ＲＡＰＤ技术对枣６４个品种及类型的遗传变异进行了研究。从１２０个１０ｂｐ随机引物中筛选出４０个多态性引物用于正式扩增，共扩增出４９２条ＤＮＡ带，其中多态性ＤＮＡ带２９３条，占５９．５５％，平均每个引物扩增的ＤＮＡ带的数目为１２．３１条。有１３个品种及类型扩增出了１个以上的特有ＲＡＰＤ标记，据此可以进行品种鉴定或早期性状预选。利用ＤＮＡ扩增结果进行聚类分析，把供试的６４个品种及类型分为８类，并对     

RAPD技术在杨梅属植物分类研究中的应用

对杨梅属植物的２４个材料进行了ＲＡＰＤ型带及聚类分析。结果表明：ＲＡＤ技术能将起源于北美中心的蜡杨梅与起源于中国的３个种明显区分开，起源于中国的３个种各自聚类，各材料之间都有不同的遗传距离，证明ＲＡＰＤ技术可作为种级水平的分类鉴定依据。对ＲＡＰＤ技术在杨梅属植物分类研究中的问题进行了探讨。