青贮巨菌草乳酸菌的分离鉴定及其对蚕豆秸秆青贮发酵的效果

【目的】从青贮巨菌草中筛选分离抑菌性能良好的乳酸菌,并研究其对蚕豆秸秆青贮发酵的效果。【方法】从青贮巨菌草中分离纯化乳酸菌;用指示菌(大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌)筛选获得拮抗菌;综合菌落形态、革兰氏染色和16S rDNA分析对其进行鉴定;通过生长曲线、产酸和抑菌能力、抗生素耐药性等确定青贮乳酸菌的特性;用筛选到的具有较强抑菌能力的乳酸菌发酵蚕豆秸秆,检测蚕豆秸秆的常规营养成分,并进行感官评价和霉菌毒素含量测定,确定所筛选乳酸菌对青贮发酵的效果。【结果】从巨菌草青贮产物中筛选到1株可抑制大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的乳酸菌R-01,并将其鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。该菌生长优良,产酸性能好,有较强的抑菌能力;对多种抗生素有较强的耐药性;将该菌作为添加剂,能有效提高青贮蚕豆秸秆的营养价值并降低霉菌毒素含量。【结论】筛选鉴定的R-01乳酸杆菌具有优良的生长、产酸、抑菌及耐药特性,可使青贮饲料快速酸化,能有效保持饲料营养成分,降低霉菌毒素含量并提升青贮整体效果,可作为青贮发酵菌株使用。     

盐穗木青贮中乳酸菌的分离及筛选

【目的】合理利用牧草资源,为新疆南疆地区畜牧业提供优质青贮,研究探讨了花果期盐穗木青贮后的营养价值和发酵品质,同时为提高青贮饲料发酵品质筛选提供乳酸菌资源。【方法】以新疆阿克苏地区花果期盐穗木为原料制作实验室小剂量自然发酵青贮,在发酵第150天时对比青贮前后盐穗木的干物质（DM）、粗蛋白（CP）、可溶性糖（WSC）、中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的含量变化,测定盐穗木青贮的pH、氨态氮（NH3-N）、乳酸（LA）、乙酸（AA）、丙酸（PA）和丁酸（BA）含量,并采用实验室纯培养方法结合生理生化分析,对青贮中乳酸菌的种类和形态学进行分类,通过葡萄糖发酵产酸产气试验、细菌微量生化反应碳源发酵试验、耐盐试验、耐酸试验和温度生长试验等生理生化试验对所筛选菌株进行研究。运用核酸 Blast技术,将所测序列与GenBank数据库进行对比,选择并下载与所测序列同源性最高的已知分类地位的菌种,与本试验所测菌株的序列一起,采用 Clustal 进行比对,用MEGA5.0绘制系统发育树,确定各菌株分类地位,对分离的菌株进行种属鉴定。【结果】与青贮前相比,由于乳酸菌发酵利用原料中的糖类物质导致青贮后盐穗木中的干物质和可溶性糖含量下降,同时在青贮发酵过程中盐穗木茎秆中难降解的水溶性碳水化合物被乳酸菌降解为易被利用的纤维,导致中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的含量升高,青贮pH为4.250-4.286,乳酸含量为60.923-61.283属于优良品质青贮饲料的范围。从自然发酵盐穗木青贮中分离得到3株粪肠球菌（Enterococcus faecium）、1株屎肠球菌（Enterococcus lactis）、2株蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）、1株戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）、1株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）和1株布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）。9株菌均能在pH4-7环境下能生长,在3.0%和6.5% NaCl条件下及10-45℃范围内生长,且生长状况良好,同时能利用D-葡萄糖、D-甘露糖、纤维二糖、D-甘露醇、D-果糖、蔗糖等多种碳源。其中,戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）、布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）产酸速率和生长速率较快,且具有很强的耐酸耐盐能力,在5-45℃范围内生长良好。【结论】将盐穗木制成青贮后其营养成分含量和发酵品质均处于良好水平,可将戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）、布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）这3株菌选作青贮饲料制作过程中的添加剂。     

柑橘皮渣青贮用优良乳酸菌的筛选及其青贮效果

【目的】筛选出适合柑橘皮渣青贮的乳酸菌,以获得柑橘皮渣青贮制剂最佳菌株。【方法】采用平板划线法从自然发酵的柑橘皮渣和添加秸秆发酵的柑橘皮渣中初步分离乳酸菌,对其进行形态学和生理生化鉴定;再通过产酸性试验、耐酸耐碱性试验、生长曲线、产有机酸情况等进行优良菌的复筛及其种属鉴定。以直接青贮为对照,利用优良菌发酵青贮柑橘皮渣,分析测定皮渣品质。【结果】初选的12株乳酸菌中有7株为乳杆菌属(Lactobacillus)细菌,5株为片球菌属(Pediococcus)细菌。经过产酸性试验、耐酸耐碱性试验、产有机酸情况等筛选出1株优良菌株Q5,该菌株经16SrDNA鉴定为植物乳杆菌。该菌株产酸快(pH可下降到3.48),发酵2h即可进入对数生长期,耐酸耐碱能力强,主要产乳酸和乙酸。利用该菌青贮的柑橘皮渣粗蛋白含量等有所提高,达到广谱青贮剂的水平,优于直接青贮。【结论】菌株Q5是适合青贮柑橘皮渣的优良菌,可作为柑橘皮渣青贮的菌种来源。     

稻草青贮乳酸菌菌种的筛选

从贵阳及周边地区采集试验样品100份,利用MRS培养基进行培养,分离出乳酸菌菌株。经过低pH耐性试验、耐碱性试验、形态特征鉴定、培养特征鉴定和生化特征鉴定,对分离的乳酸菌菌株进行筛选,从100份样品中共筛选出乳酸菌菌株39株。通过添加乳酸菌菌株的稻草青贮试验,对稻草青贮饲料的含水量、中性洗涤纤维（NDF）、粗蛋白（CP）、酸性洗涤纤维（ADF）、pH值进行试验分析。结果表明,63号菌株能显著提高稻草青贮饲料的品质,是一种优质的乳酸菌添加剂。     

青贮用乳酸菌的筛选及其生物学特性研究

【目的】筛选生长繁殖快、产酸能力强且耐酸的乳酸菌,以获得制备果渣青贮发酵剂的优良菌株。【方法】通过葡萄糖发酵产酸产气特征、产酸速率和生长曲线进行供试乳酸菌的筛选,对筛选出的优良菌株进行形态学、生理生化和分子生物学鉴定,并进一步研究其生长温度范围、酸碱耐受性、耐盐性,最后对菌株发酵液进行酸度滴定和有机酸组分分析。【结果】经筛选共获得R7、R3、Rg和Re 4株优良乳酸菌。经形态学、生理生化和16SrDNA序列分析,确定R7为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),R3为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus),Rg为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum),Re为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)。4株菌均可在15~50℃生长。菌株R7生长最快,降酸能力最强,发酵液乳酸含量最高,占总酸含量的95.40%,在pH值3.0条件下可以旺盛繁殖,同时可耐受质量浓度0.08g/mL NaCl。Re、R3生长及产酸仅次于R7,酸碱耐受性较强。Rg在50℃生长良好,可耐受高温。【结论】菌株R7、Re、R3、Rg具有生长快、产酸能力强、耐酸、产乳酸含量高等优良生物学特性,可应用于果渣青贮饲料添加剂的制备。     

腌菜中乳酸菌的分离及产酸菌筛选研究

[目的]从云南不同地区腌菜样品中分离乳酸菌,并筛选产酸能力较强的菌株,为筛选用于腌菜制作的乳酸菌菌株奠定基础。[方法]将收集到的16个腌菜样品在MRS培养基上分离纯化乳酸菌,对其进行形态学观察;通过筛选培养基上的水解圈筛选产酸菌株,再通过初步乳酸发酵进一步筛选产酸菌株。[结果]从16个腌菜样品共分离得到22个菌株,均为革兰氏阳性菌,其中有15个是杆菌,7个为球菌;以产酸菌株筛选培养基筛选出产水解圈的3个菌株,其中1086b水解圈最大。初步发酵研究表明2,2菌株乳酸发酵都可使发酵液pH下降,其中10株菌pH下降幅度较大。[结论]分离出多样性丰富的乳酸菌菌株,从中筛选出产酸能力较强的菌株,研究可为筛选用于腌菜制作的乳酸菌菌株提供借鉴。     

单一和复合乳酸菌添加对高丹草青贮效果的影响

【目的】研究单一和复合乳酸菌添加处理对高丹草青贮发酵效果的影响,为高丹草青贮菌剂的开发研制提供科学依据。【方法】利用前期筛选出的植物乳杆菌（保存编号LP06）、戊糖片球菌（保存编号PP02）和短乳杆菌（保存编号LBR02）添加至高丹草,乳酸菌总添加量约5×105 CFU/g,设8个处理:（1） CK（无乳酸菌）;（2） LP06;（3） PP02;（4）LBR02;（5） F-1（LP06:PP02=1:1）;（6） F-2（LP06:LBR02=1:1）;（7） F-3（PP02:LBR02=1:1）;（8） F-4（LP06:PP02:LBR02=1:1:1）。对8个处理青贮60 d后的感官品质进行评定,测定分析发酵品质、营养成分和主要微生物数量,并利用隶属函数法进行综合评价。【结果】高丹草青贮60 d后,LP06和F-1处理具有明显芳香果味,感官品质最优; F-2处理pH最低,为3.88; 7个乳酸菌添加处理氨态氮（NH₃-N）含量显著低于CK（P<0.05,下同）; LP06处理乳酸含量最高,为4.21%; LBR02、F-2、F-3和F-4处理乙酸含量显著高于其他处理; LP06、F-1和F-4处理乳酸菌数量较高,均在7.00×105CFU/g以上; LBR02、F-2和F-3处理未检测到酵母菌和霉菌,有害微生物生长抑制效果明显; 7个乳酸菌添加处理粗蛋白质（CP）含量显著高于CK,可溶性碳水化合物（WSC）含量显著低于CK,而干物质（DW）、酸性洗涤纤维（ADF）和中性洗涤纤维（NDF）含量在8个处理间差异不显著（P>0.05）。根据隶属函数法综合评价结果,F-2处理隶属函数值最高（0.69）,青贮发酵效果综合表现最优。【结论】同型发酵乳酸菌LP06在提高高丹草青贮感官品质、降低NH₃-N含量、减少CP损失、增加乳酸含量和乳酸菌数量上表现更具优势,异型发酵乳酸菌LBR02在抑制有害微生物生长方面作用更显著,LP06和LBR02以1: 1比例混合添加青贮发酵效果综合表现最优。     

葡萄糖对王草青贮品质的影响

[目的]确定王草青贮时葡萄糖的最佳添加比例,为改善王草青贮品质提供技术参考.[方法]在王草青贮过程中分别添加5、10、15、20和25 g/kg的葡萄糖,然后评价添加不同比例葡萄糖对王草青贮发酵品质及营养成分含量的影响.[结果]王草青贮前后,其干物质(DM)、粗蛋白(CP)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量变化不明显,色泽、气味、质地、pH值等指标综合评定均属良好以上等级.与对照组相比,添加葡萄糖虽然在降低青贮饲料pH值方面的效果不明显,但能显著提高青贮饲料的乳酸含量,且乳酸占总酸的比例均在69%以上;其Flieg氏评分均为优等(80分以上).[结论]在王草中添加葡萄糖可显著提高其青贮发酵品质,主要营养成分含量变化不明显,且以添加20 g/kg葡萄糖的王草青贮效果最佳.     

甜高粱与苜蓿混贮品质评价与乳酸菌分离鉴定

为了评价混合青贮的品质和筛选优良的乳酸菌菌株,本研究以不同比例(甜高粱与苜蓿比例分别为0∶100,20∶80,40∶60,60∶40,80∶20,100∶0)的甜高粱与苜蓿混合青贮为材料,对混合青贮进行了感官评价和发酵品质分析,通过MRS平板分离、生理生化分析和16S rRNA相结合的方法对不同比例混合青贮中乳酸菌的种类、生理生化特性进行了研究。结果表明,40%SS比例的混合青贮效果最佳。从不同比例混合青贮中共分离得到18株乳酸菌,4株鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus),5株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),3株耐久肠球菌(Enterococcus durans),2株肠膜明串珠菌肠膜亚种(Leuconstoc mesenteroides subsp mesenteroides),2株屎肠球菌(Enterococcus faecium),乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)和干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)各1株。各菌株产酸试验和生长试验结果表明,植物乳杆菌产酸性能好,生长速度快,可作为制作混合青贮饲料的优良菌株。     

产有机酸芽孢杆菌对玉米秸秆青贮品质及有氧稳定性的影响

为了考察产有机酸芽孢杆菌R42-16对玉米秸秆青贮品质及有氧稳定性的影响,试验设对照组和3个不同菌浓度(高、中、低)的R42-16添加组,青贮30 d后,测定青贮秸秆的p H值、有机酸及常规物质含量,并连续15 d室温暴露放置,测定温度和p H值。结果表明,与不加菌剂组相比,菌浓度中、高水平的R42-16添加组乳酸、乙酸含量显著提高(P0.05),丁酸含量显著降低(P0.05)。添加R42-16菌剂不能显著影响干物质、粗蛋白、粗纤维、酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤木质素的含量,但显著降低氨态氮/总氮值(P0.05)。在整个有氧暴露过程中,对照组在11 d时开始出现"二次发酵",而试验组始终处于稳定状态。综合考虑,添加R42-16菌剂能够改善青贮玉米秸秆发酵品质,提高其有氧稳定性。     

发酵树叶及其在鸡生产应用的研究进展

我国树木资源丰富多样,但未充分开发利用。树叶的粗蛋白质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量较高,黄酮和酚类物质含量丰富,但部分树叶含有单宁、植酸等抗营养因子。通过微生物发酵延长树叶使用时间、降解抗营养因子,转化难吸收的营养物质,将树叶改变为适口性好、无毒低毒、营养价值高的生物饲料,是绿色的饲料化技术方向之一。发酵树叶种类主要有银杏叶、辣木叶、桑叶等,使用的菌种主要是乳酸菌、霉菌、芽孢杆菌、酵母。研究表明,发酵后树叶保存时间延长,粗蛋白质含量提高,品质较好。发酵树叶黄酮、氨基酸、还原糖、多酚等活性物质含量较高,具有抗氧化活性。发酵树叶应用于鸡生产,可提高动物抗氧化能力,促进机体健康,改善肠道健康,提高生产性能及产品品质。发酵树叶用于饲养动物有利于资源循环,降低生产成本,解决环境污染等问题。     

Effect of lactic acid bacteria and propionic acid on conservation characteristics,aerobic stability and in vitro gas production kinetics and digestibility of whole-crop corn based total mixed ration silage

This study was conducted to evaluate the effect of lactic acid bacteria and propionic acid on the fermentation quality, aerobic stability and in vitro gas production kinetics and digestibility of whole-crop corn based total mixed ration(TMR) silage. Total mixed ration was ensiled with four treatments:(1) no additives(control);(2) an inoculant(Lactobacillus plantarum)(L);(3) propionic acid(P);(4) propionic acid+lactic acid bacteria(PL). All treatments were ensiled in laboratory-scale silos for 45 days, and then subjected to an aerobic stability test for 12 days. Further, four TMR silages were incubated in vitro with buffered rumen fluid to study in vitro gas production kinetics and digestibility. The results indicated that all TMR silages had good fermentation characteristics with low pH(3.80) and ammonia nitrogen(NH_3-N) contents, and high lactic acid contents as well as Flieg points. Addition of L further improved TMR silage quality with more lactic acid production. Addition of P and PL decreased lactic acid and NH_3-N contents of TMR silage compared to the control(P0.05). After 12 days aerobic exposure, P and PL silages remained stable, but L and the control silages deteriorated as indicated by a reduction in lactic acid and an increase in pH, and numbers of yeast. Compared to the control, addition of L had no effects on TMR silage in terms of 72 h cumulative gas production, in vitro dry matter digestibility, metabolizable energy, net energy for lactation and short chain fatty acids, whereas addition of PL significantly(P0.05) increased them. L silage had higher(P0.05) in vitro neutral detergent fiber digestibility than the control silage. The results of our study suggested that TMR silage prepared with whole-crop corn can be well preserved with or without additives. Furthermore, the findings of this study suggested that propionic acid is compatible with lactic acid bacteria inoculants, and when used together, although they reduced lactic acid production of TMR silage, they improved aerobic stability and in vitro nutrients digestibility of TMR silage.     

Effects of Lactobacillus plantarum and fibrolytic enzyme on the fermentation quality and in vitro digestibility of total mixed rations silage including rape straw

The aim of the current study was to investigate the effects of a lactic acid bacteria inoculant(Lactobacillus plantarum, LP), fibrolytic enzyme(EN), combination of LP and EN(LP+EN) on fermentation quality, nutritive characteristics and in vitro digestibility of total mixed ration(TMR) silages containing 0, 7.5 and 15.0%(on dry matter basis) of rape(Brassica campestris L.) straw(RS)(denoted as CTMR, LTMR and MTMR, respectively). After ensiling for 60 days, TMR silages without additives were well preserved, but MTMR had higher p H than CTMR and LTMR. There were no differences in other parameters of fermentation quality, microbial composition, nutrition and in vitro digestibility between CTMR and LTMR except for yeast and mold number and crude protein(CP) content. CTMR and LTMR silage had higher CP content, in vitro neutral detergent fiber digestibility(IVNDFD) and in vitro acid detergent fiber digestibility(IVADFD), lower acid detergent fiber(ADF) content than MTMR silage. LP and EN decreased p H and increased dry matter(DM) recovery of TMR silages. LP+EN improved the fermentation quality, nutritive characteristics and in vitro digestibility of TMR silages, showed by lower p H, ADF content, higher lactic acid content, in vitro dry matter digestibility(IVDMD) and IVNDFD. Therefore, It was suggested that TMR silage contained 7.5% RS on a DM basis and treated with LP+EN can be as a useful feed for ruminant.     

黄羊食物营养质量的初步研究

研究测定了１４种黄羊主要饲料植物和５１头黄羊瘤胃内食物的粗蛋白质、中性洗涤性纤维、酸性洗涤性纤维、酸性洗涤性木质素、中性洗涤性纤维灰分、酸性洗涤性纤维灰分、纤维素和半纤维素的含量。结果表明,各类饲料植物中营养成分的含量存在显著差异（Ｐ〈０．０５）,而且具有明显的季节性变化：春季粗蛋白质的含量最高,冬季最低。洗涤性纤维和木质的季节变化则相反,春季最低,冬季最高。瘤胃内食物的营养成分季节变化模式与饲料植物相似,同一时期,瘤胃内食物的营养成分要高于饲料植物。中性洗涤性纤维与粗蛋白质呈显著的线性负相关性,与其它营养成分则是显著的线性正相关性。     

饲料玉米中优质乳酸菌的分离和鉴定

[目的]从饲料玉米中筛选适合做青贮饲料添加剂的高效乳酸菌。[方法]用MRS＋CaCO3固体培养基筛选乳酸菌,经形态学和生理生化试验进行初步鉴定,测定其产酸效率;挑选出12株产酸率强的乳酸菌进行耐盐和耐酸能力的测定,并对其进行16 S rDNA鉴定。[结果]从饲料玉米中共分离得到44株乳酸菌,12株产酸能力强的菌株经生理生化试验鉴定分别属于明串珠菌属、乳杆菌属和肠球菌属,且12株菌株都具有良好的耐盐、耐酸能力。经16 S rDNA鉴定：A4、B9、B11、B12和B14为植物乳杆菌;A1、A2、A7、A11和B8为肠膜明串珠菌葡聚糖亚种;A8和A9为兼性肠球菌。[结论]从饲料玉米中筛选出具有较强产酸能力的乳酸菌,作为青贮饲料添加剂。     

一株青贮用高性能乳酸菌的筛选

为筛选优良青贮饲料添加剂,从德国南部山区苜蓿制备菌粉中分离得到5株乳酸菌。通过对菌株形态学、生理生化和16S r RNA相结合方法进行鉴定,对5株外源乳酸菌和常规优势菌株7的生长曲线测定和产酸性试验,得到3株高性能乳酸菌,并对这3株乳酸菌的生物学特性进一步研究。结果显示,R1、R5为植物乳杆菌,R2、R3和R4为屎肠球菌;菌株R 1、7和R 5生长迅速、产酸能力较好;T50℃时,菌株R1比R5、7耐温能力强,pH2.5时,菌株R1的适应能力比菌株7、R5强,菌株R1比菌株R5、7抑菌能力强,外源品种R1可作为制备乳酸菌青贮饲料添加剂新的优良菌株。     

不同来源鸡粪有机肥对西瓜-青贮玉米产量、品质的影响及效益分析

针对当前鸡粪利用率较低的问题,以施用无机复合肥为对照,比较施用3种不同来源鸡粪有机肥(自制有机肥T1、进口有机肥T2、国产有机肥T3)对一年两熟种植模式中西瓜和青贮玉米的生长、产量、品质及土壤理化性质的影响,并计算经济效益。结果表明:1)施用该3种有机肥均可显著提高西瓜叶片SPAD值,其中以T2对其营养生长的促进作用最佳,可显著提高西瓜的主蔓长及分枝数;2)T1及T3显著提高了西瓜感官品质,T2提高了西瓜中心可溶性固形物含量;3)施用该3种有机肥均可显著提高土壤碱解氮、速效磷、速效钾含量,其中T2显著降低了土壤pH;4)施用该3种有机肥均可显著提高青贮玉米株高、绿叶数及鲜草产量,提高粗蛋白、粗脂肪含量及相对饲喂价值,降低其酸性洗涤纤维及中性洗涤纤维含量;5)T1和T3可提高经济效益,其中T1提升幅度最大,达21.42%。综上,自制有机肥较其他2种商品肥更有优势可作为当地的推广用肥。     

黄花棘豆青贮前后常规营养成分分析

[目的]为黄花棘豆的开发利用提供科学依据。[方法]采用标准方法对青贮前后黄花棘豆的常规营养成分及主要矿物质元素含量进行了测定。[结果]3个青贮组黄花棘豆粗蛋白含量均低于青贮前,而其灰分、粗纤维、粗脂肪、酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维、水分含量均高于青贮前。"棘防E号"青贮组Fe、Zn、Ca、Mn和Mg含量均高于青贮前,也高于直接青贮组和酶制剂青贮组,其中酶制剂青贮组Cu含量最高,均达到我国牛饲养标准和美国国家科学研究委员会(NRC)奶牛、绵羊饲养标准要求的安全剂量。[结论]黄花棘豆中粗蛋白和粗脂肪含量接近上等苜蓿干草,是1种潜在的优质牧草。