虾蛄多肽酶解工艺的优化及其体外免疫活性研究

[目的]研究虾蛄多肽的免疫活性.[方法]采用胰蛋白酶水解虾蛄的生物组织,通过单因素试验和正交试验探索其最佳酶解条件,采用MIT试验研究虾蛄多肽对小鼠巨噬细胞的细胞活性,并通过中性红吞噬试验分析虾蛄多肽的免疫调节能力.[结果]虾蛄多肽的最佳酶解条件为:温度62.5℃、pH 9.5、酶解时间8h、加酶量0.08％,此时虾蛄多肽对RAW264.7有最高的细胞活性,并对小鼠巨噬细胞的吞噬能力表现出一定的促进作用.[结论]该研究为从海洋蛋白中获取高生物活性的酶解产物和具有免疫活性的多肽提供了一定的科学依据.     

抗肿瘤活性青蛤多肽的提取工艺研究

[目的]探究具有抗肿瘤活性的青蛤多肽的最佳提取工艺路线.[方法]选择胰蛋白酶酶解青蛤,以酶解液对PC-3细胞增殖抑制率（IR）为指标,研究料液比、温度、pH、加酶量和酶解时间对多肽提取率的影响,探讨最佳工艺,并采用超滤及G25洗脱分离纯化提取液.[结果]当温度为45℃、pH为7.0、料液比为1∶3、酶解时间为6h、加酶量为300 U/g时,分子量为3～5 kD青蛤提取液的抗肿瘤活性最好;分离纯化后在280 nm波长处得到3个峰,其中峰1和峰2成分抗肿瘤活性显著.[结论]以细胞增殖抑制率为指标可以确定青蛤多肽的提取及优化工艺路线.     

胰蛋白酶制备乌贼缠卵腺抗氧化活性多肽的研究

[目的]探讨胰蛋白酶制备乌贼缠卵腺抗氧化活性多肽的工艺及体外抗氧化活性.[方法]以乌贼缠卵腺为原料,用胰蛋白酶进行酶解,采用单因素和正交试验优化乌贼缠卵腺抗氧化活性肽的提取工艺;将酶解液超滤分成4个分子段,通过体外检测DPPH清除率、·OH清除率和还原力评价其抗氧化活性.[结果]胰蛋白酶酶解乌贼缠卵腺在加酶量2000 U/g、pH为8.5、料液比1:3、酶解时间8 h条件下得到的酶解物对DPPH的清除率最大.酶解液经超滤得到的<3 kD分子段的多肽具有良好的DPPH清除能力、·OH清除能力和还原能力.[结论]胰蛋白酶酶解制备的乌贼缠卵腺多肽具有较好的体外抗氧化活性,可作为抗氧化肽的理想来源.     

绿茶蛋白质的提取及抗氧化肽的制备研究

[目的]对茶叶蛋白质的最佳提取条件进行研究,并研究茶叶蛋白酶解产物的抗氧化性,为茶叶的高附加值利用提供思路。[方法]采用超声波辅助碱法提取茶叶蛋白质,采用响应面法进行茶叶蛋白提取工艺的优化。将茶叶蛋白采用风味蛋白酶进行水解,获得具有抗氧化活性的茶叶多肽。[结果]通过响应面法得到茶叶蛋白的最佳理论提取条件:提取时间120 min,提取温度59.02℃,碱液浓度0.65 mol/L,料液比1∶20。在此条件下,预测得到的茶叶蛋白质最大提取量为29.79%,经过验证后,茶叶蛋白的最大提取量达到28.39%。利用风味蛋白酶酶解茶叶蛋白获得具有较强抗氧化能力的多肽混合物,酶解的最佳条件为:酶解时间60 min,酶解温度60℃,酶解pH 7.0,酶用量9%。[结论]该研究开发了一种茶叶蛋白的提取工艺,并且茶叶蛋白可以通过风味蛋白酶酶解制备绿色、天然的抗氧化剂。     

复合酶法提取黑木耳多糖方法优化

[目的]优化黑木耳多糖酶法提取的工艺条件.[方法]采用复合酶法提取木耳多糖,以多糖的提取率为指标,考察了酶解温度、酶解溶液pH、浸提料液比以及酶解时间对黑木耳多糖提取效率的影响,并采用TLC薄层色谱层析法分析提取出的黑木耳多糖的成分.[结果]试验确定了复合酶酶解提取黑木耳多糖的最佳工艺条件:浸提料液比1:40 g/ml,酶解溶液pH7.0,酶解温度40℃,酶解时间3.0h.在此条件下,黑木耳多糖的提取率为4.353％,所含有的单糖为D-葡萄糖.[结论]研究可为黑木耳多糖的提取提供参考依据.     

含有α-胰凝乳蛋白酶作用位点的Cry3A突变体的构建、表达、纯化以及杀虫活性分析

[目的]构建含有α-胰凝乳蛋白酶作用位点的Cry3A的突变体Cry3Am,以期提高Cry3A的活化效率,增强杀虫活性.[方法]利用重叠PCR技术,构建Cry3A杀虫蛋白的突变体Cry3Am,使之在原核细胞中表达纯化突变体蛋白;将Cry3Am与饲料混合后饲喂黄粉虫,用以评价Cry3Am的杀虫活性.[结果]成功地在Cry3h杀虫蛋白结构域I的α3和α4之间加上1个α-胰凝乳蛋白酶的作用位点,并提取Cry3Am到杀虫蛋白.体外酶切试验结果表明,Cry3Am很容易地被降解为55 kD的杀虫蛋白.生测分析结果表明,Cry3Am对黄粉虫的毒力是Cry3A的2倍以上.[结论]向Cry3A中插入α-胰凝乳蛋白酶作用位点可以使突变体Cry3Am很容易地被α-胰凝乳蛋白酶降解成55 kD的片段,并能提高Cry3A的杀虫活性.     

纳升级反相液相色谱-串联质谱法分析麦氏弧菌蛋白质组

[目的]较系统地研究分析麦氏弧菌提取蛋白质.[方法]利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和纳升级反相液相色谱-串联质谱(nano-RPLC-MS/MS)法系统分析了来源于美国龙虾的一株麦氏弧菌F5-1提取总蛋白和总蛋白直接酶解产物,并进行数据库检索鉴定蛋白质.纳升级反相液相色谱分析条件为:上样量为5ul,经C18预柱(200 μm ×0.5 mm,3μmn,120 A)脱盐10 min,再经过ChromXPC18-CL毛细管柱(75 μm×15 cm,3μ,m,120 A)分析,2％乙腈(0.1％甲酸)-98％乙腈(0.1％甲酸)梯度洗脱90 min,采用ESI-Q-TOF MS,在IDA采集模式下分析鉴定麦氏弧菌提取总蛋白酶解产物.[结果]直接酶解鉴定到1 538种蛋白质,通过Gene Ontolo-gy分析了麦氏弧菌F5-1提取总蛋白的分子功能、生物进程和细胞组分.提取的麦氏弧菌蛋白具有催化、结合、结构分子、转录调节因子等功能活性,其中催化活性的蛋白比例较大,且多为参与代谢进程的相关酶类.[结论]研究可为麦氏弧菌蛋白质组学的深入研究奠定基础.     

淀粉酶提取小米米糠蛋白的工艺研究

[目的]探究小米米糠蛋白的提取工艺.[方法]以小米米糠为原料,先测定其营养成分,然后制备脱脂米糠,利用淀粉酶对小米米糠酶解处理进行米糠蛋白的提取,通过单因素试验对提取条件进行筛选.[结果]试验得到小米米糠蛋白的最佳提取工艺条件为:最佳料液比1∶10 g/ml,淀粉酶用量20 U/g,最佳反应时间2h,最佳反应温度60℃.[结论]研究可为小米米糠蛋白的提取提供理论依据.     

响应曲面法研究白果蛋白的酶解工艺

[目的]确定白果蛋白的最佳酶解条件。[方法]分别采用木瓜蛋白酶,2709碱性蛋白酶,中性蛋白酶对白果蛋白进行酶解,并对酶解效果较好的碱性蛋白酶进行单因素试验,考察各因素对酶解效果的影响;采用Designexpert软件设计试验、创建模型,采用响应曲面法分析试验结果。[结果]碱性蛋白酶对白果蛋白的水解度最大（50.50%）;酶解温度为50℃时蛋白水解度最大,酶用量为3g和酶解时间为6h时蛋白水解度达到稳定点;据模型分析,各因素对酶解效果的影响依次为：pH值〉温度〉底物浓度,最佳酶解条件为：时间6h,酶用量2g,pH值9.0,温度47℃,底物浓度2.17%。[结论]最佳酶解条件下白果蛋白的水解度可达67.75%,水解液过膜后干燥可得粗多肽1.3g（占干燥白果粉的6.51%）。     

乳酪蛋白肽制备工艺的优化

[目的]研究制备乳酪蛋白肽的最佳工艺.[方法]以乳酪蛋白为原料,以水解度为考察指标,确定碱性蛋白酶为乳酪蛋白的最佳水解酶.利用单因素试验考察酶解温度、pH、投酶量、酶解时间和底物浓度对水解度的影响,确定主要影响因素.通过L9(34)正交试验获得碱性蛋白酶的最佳水解条件.利用凝胶色谱法确定乳酪蛋白肽的分子量.[结果]试验得出制备乳酪蛋白肽的最佳工艺为:酶解温度60℃,pH 7.0,投酶量1.5％,酶解时间150 min.制备的乳酪蛋白肽分子量为2 kD.[结论]研究可为乳酪蛋白活性肽的产业化研发提供理论依据.     

碱性蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化特性研究

采用碱性蛋白酶对核桃粕蛋白进行酶解,测定了不同酶解时间下的酶解液抗氧化性;用葡聚糖凝胶分离活性肽段并测定其抗氧化性。结果表明,酶解条件为酶用量3 000 U/g底物、底物质量浓度为40mg/mL、pH为8.5、温度为50℃下酶解210 min,酶解液的抗氧化活性较高,OH.清除率为72.3%,氧自由基清除率为83.1%,DPPH.清除率为102.6%,总抗氧化能力为162.986 U/mL;通过葡聚糖凝胶分离并与已知标准品对照表明碱性蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化活性多肽的分子量主要集中在1 321~607 u,该多肽片段对OH.清除率为70.23%,氧自由基清除率为62.57%,DPPH.清除率为99.56%,总抗氧化能力为118.987 U/mL。     

改进TRIzol法提取不同发育时期海葵的总RNA

获得海葵纯度高、完整性好的高质量RNA,为海葵高通量转录组测序等分子生物学的深入研究提供基础,以南海海葵为研究对象,采用改进TRIzol法提取不同发育时期海葵的总RNA,并利用琼脂糖凝胶电泳、Nano Drop TM 2000分光光度计和Agilent 2100生物分析仪检测其质量。结果表明:改进TRIzol法从不同发育时期的海葵中提取的RNA电泳条带清晰、海葵-大与海葵-中的RNA完整性好,海葵-小RNA完整性不合格;海葵-大、海葵-中和海葵-小的纯度(OD260/280)分别为1.981、1.983和2.071,浓度分别为335ng/μL、357ng/μL和232ng/μL。改进TRIzol法可有效从海葵中提取高质量RNA。     

鱼皮胶原多肽口服液的研制

以草鱼皮为原料,用胃蛋白酶提取胶原多肽,探讨了影响鱼皮胶原多肽水解度的主要影响因素,优化了酶解工艺条件,发现鱼皮胶原多肽最佳酶解条件为料液比6%、酶用量30 mg/g蛋白、酶解温度40℃、pH值2.0;然后以提取的鱼皮胶原多肽为原料配制胶原多肽口服液,得出了胶原多肽口服液的最佳配方为鱼皮胶原多肽液20 mL、蜂蜜5 g、葡萄糖1 g。     

水酶法提取扁桃仁油工艺的研究

[目的]采用水酶法提取扁桃仁油.[方法]采用单因素试验和正交试验,研究单一酶和复合酶种类及浓度、酶解时间、酶解温度、酶解pH、料液比对出油率的影响.[结果]水酶法提取扁桃仁油的最佳工艺条件为:采用由果胶酶、纤维素酶和木瓜蛋白酶组成的复合酶,酶解温度55℃,酶解时间3h,酶浓度2;,酶解pH7.0、料液比1∶4,在此条件下出油率达77.31;.[结论]单一酶中碱性蛋白酶,复合酶中果胶酶、纤维素酶、木瓜蛋白酶的组合对扁桃仁油的提取率最高;复合酶的出油率比单一酶高.     

酶法制备大豆蛋白成骨活性肽

[目的]探究从大豆分离蛋白双酶分步酶解产物中分离促成骨细胞增殖肽的工艺,为大豆产品的开发提供参考.[方法]以促成骨细胞增殖活性作为测定指标,选用木瓜蛋白酶酶解大豆分离蛋白(SPI),采用MTT法检测不同浓度的木瓜蛋白酶酶解产物对成骨细胞的促增殖活性.采用pH-Stat法检测水解时间为1、2、3、4、5和6h的木瓜蛋白酶...     

超声辅助酶重量法提取树仔菜总膳食纤维

[目的]优化超声辅助酶重量法提取树仔菜总膳食纤维工艺,为后续野生蔬菜膳食纤维研究工作提供技术参考.[方法]以树仔菜为原料,通过单因素试验考察蛋白酶种类、酶添加量、溶液pH、超声时间和超声温度对总膳食纤维提取率的影响,并在此基础上采用正交试验优化酶解工艺.[结果]蛋白酶种类对树仔菜总膳食纤维提取率影响的排序为木瓜蛋白酶>中性蛋白酶>碱性蛋白酶>胰蛋白酶;超声辅助酶重量法提取树仔菜总膳食纤维的最佳工艺条件为:木瓜蛋白酶添加量0.60%、溶液pH 5.0、超声时间50 min、超声温度65℃,对提取率影响程度排序为木瓜蛋白酶添加量>超声时间>超声温度>溶液pH;在优化条件下,树仔菜总膳食纤维提取率为45.0%,变异系数小于5.00%,测定结果与GB 5009.88-2014《食品中膳食纤维的测定》测定结果(44.8%)基本一致.[结论]超声辅助酶重量法提取树仔菜总膳食纤维具有酶解时间短、操作简便等优点,可用于批量样品总膳食纤维的提取.     

兴安藜芦提取液对榆紫叶甲幼虫的防治效果

[目的]明确野生兴安藜芦对榆紫叶甲不同龄期幼虫的防治作用.[方法]以野生兴安藜芦为材料,采用70％乙醇、60％丙酮、沸水对藜芦的根、茎、叶分别进行提取,研究各提取液对榆紫叶甲2龄、3龄、4龄幼虫的防治效果.[结果]兴安藜芦不同药用部位的杀虫活性具有明显差异,以根提取物的杀虫活性最强,叶提取物的杀虫效果最差;不同提取方法的杀虫效果也有明显不同,以70％乙醇提取液的杀虫活性最强.[结论]试验结果为榆紫叶甲的生物防治提供了参考.     

海葵多肽类神经毒素的结构与药理学功能

海葵以其触手刺细胞中的毒液行使捕食和防御功能,其毒液中富含各种多肽类神经毒素,分子量为3—7kDa之间,分子序列中含多对二硫键以稳定其结构。海葵神经毒素以钠离子通道毒素和钾离子通道毒素为其主要成分,此外还发现有作用于其他离子通道的成分,此外,还有部分海葵毒素目前尚不清楚其分子靶标。不同类型的海葵毒素具有不同的空间结构。海葵毒素多肽的分子多样性使其成为动物毒素研究的一个重要分支,同时海葵多肽毒素对不同离子通道的特异性和高亲和性,使得它们成为神经生理学和药理学研究的一种重要工具。     

单环刺螠体壁制备海鲜调味基料的工艺研究

[目的]筛选单环刺螠体壁制备海鲜调味基料的最佳工艺.[方法]以单环刺螠体壁为原料,将物理抽提法与酶解法相结合制备海鲜调味基料,分析单环刺螠体壁的基本营养成分、氨基酸组成,并采用单因素试验和正交试验优化酶解工艺.[结果]采用风味蛋白酶进行酶解,最优酶解工艺条件为酶解温度50℃、料液比1:4、加酶量7000 U/g、酶解时间5 h.在该条件下蛋白水解度为38.23％,所得酶解液风味较好、分子量较低.[结论]将酶解液过滤后与蒸煮所得上清液复合即得到鲜味浓郁、营养丰富的单环刺螠海鲜调味基料,可用于进一步复配加工成相关海鲜调味料.     

响应面法优化亚麻籽粕不溶性膳食纤维提取工艺

[目的]采用响应面法研究亚麻籽粕不溶性膳食纤维的最佳提取条件.[方法]以亚麻籽粕为原料,采用碱性蛋白酶水解.在单因素试验基础上,选取酶解温度、时间、加酶量(质量分数)和料液比为响应变量,以不溶性膳食纤维提取率为响应值,利用Box-Behnken试验设计方案和响应面分析法,建立不溶性膳食纤维提取率与响应变量的回归方程,并确定最佳提取条件.[结果]在提取率的二次多项模型中,温度、时间、加酶量在一次项中表现差异显著,温度、料液比、加酶量在二次项中表现差异显著.[结论]亚麻籽粕不溶性膳食纤维的最佳提取条件为:酶解温度55℃、酶解时间4h、料液比1:20、加酶量9;,此条件下水不溶性膳食纤维得率为52.05;,与预测值52.5;较为一致.