橡胶基因组中一个与酿酒酵母脯氨酸特异性通透酶基因部分同源的多态性片段的克隆及序列测定

橡胶树(Hevea brasiliensis Muell.Arg.)的传统种植区主要分布于高温多雨的热带地区,抗旱基因或DNA标记的筛选鉴定对于橡胶耐旱品系的选育及橡胶树向温光和雨量相对不足的非传统植胶区的拓展具有十分重要的意义.RAPD分析是目前遗传多态性研究及特异性基因片段鉴定最有效的分子学工具之一.本研究借助聚合酶链式反应(PCR)对来自37个橡胶无性系的基因组DNAs进行了RAPD分析.结果显示,多态性及特异性扩增条带的数量随无性系及引物的不同而有所差异,有些扩增带为一些无性系共有,而另一些则仅存在于个别或少数无性系之中.根据引物OPB-12的两个特异性扩增条带(1.2和1.4kb)在各无性系中单独或同时存在与否,我们鉴定出了两个相应的特异性RAPD标记,其中1.4 kb扩增带尤其引人注目.克隆及测序结果表明,该RAPD片段与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)脯氨酸特异性通透酶基因存在一定程度同源性.针对该片段设计一对特异性引物并再次对基因组DNA进行更严格条件下的PCR扩增,结果从14个参试无性系中获得了该1.4kb条带.这种由RAPD标记通过特异性引物设计转化得到的SCAR(序列特异性扩增区)标记可用于橡胶树优良或特异性基因的筛选及鉴定.     

橡胶基因组中一个与酿酒酵母脯氨酸特异性通透酶基因部分同源的多态性片段的克隆及序列测定

橡胶树(Hevea brasiliensis Muell.Arg.)的传统种植区主要分布于高温多雨的热带地区,抗旱基因或DNA标记的筛选鉴定对于橡胶耐旱品系的选育及橡胶树向温光和雨量相对不足的非传统植胶区的拓展具有十分重要的意义.RAPD分析是目前遗传多态性研究及特异性基因片段鉴定最有效的分子学工具之一.本研究借助聚合酶链式反应(PCR)对来自37个橡胶无性系的基因组DNAs进行了RAPD分析.结果显示,多态性及特异性扩增条带的数量随无性系及引物的不同而有所差异,有些扩增带为一些无性系共有,而另一些则仅存在于个别或少数无性系之中.根据引物OPB-12的两个特异性扩增条带(1.2和1.4 kb)在各无性系中单独或同时存在与否,我们鉴定出了两个相应的特异性RAPD标记,其中1.4 kb扩增带尤其引人注目.克隆及测序结果表明,该RAPD片段与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)脯氨酸特异性通透酶基因存在一定程度同源性.针对该片段设计一对特异性引物并再次对基因组DNA进行更严格条件下的PCR扩增,结果从14个参试无性系中获得了该1.4kb条带.这种由RAPD标记通过特异性引物设计转化得到的SCAR(序列特异性扩增区)标记可用于橡胶树优良或特异性基因的筛选及鉴定.     

PCR方法进行牛Y—DNA特异性片段的分子克隆

本研究应用聚合酶链反应扩增牛Ｙ染色体特异性ＤＮＡ片段,从宰后成年公,母牛肝提取ＤＮＡ,分别俄为ＰＣＲ扩增模板,扩增产物电泳结果,公牛样品具有特异性ＤＮＡ扩增谱带,而母牛样品则没有扩增带,以ｐＵＣ１８为载体,将扩增片段构建成牛Ｙ特异性的部分Ｙ染色体文库。本实验所克隆的牛Ｙ特异性ＤＮＡ片段可以作为奶牛胚胎性别鉴定的探针ＤＮＡ。     

一种适用于PCR的环境友好型植物DNA提取方法(英文)

改进DNA提取方法,利用含2%CTAB、1%SDS、2%PVP、100mmol/LTris-Cl(pH8.0)、20mmol/LEDTA(pH8.0)和1.4mol/LNaCl的DNA提取缓冲液,提取了不同种属12种植物的DNA,并对其进行了PCR检测.结果显示,所提取的DNA符合PCR试验要求,用真核生物ITS4/ITS5通用引物均能扩增出清晰的条带.该方法无需酚仿抽提,简单、高效、环保,特别适合大规模植物DNA的提取.     

一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因

该文集多种分离差异表达基因方法的优点于一体,自行优化了一种基于固相扣除杂交和聚合酶链式反应(PCR)技术直接克隆全长差异表达基因的策略．该策略中的所有操作步骤,包括poly (A)+mRNA的分离,cDNA的合成和扣除杂交都是在磁珠上进行的,操作简单易行．扣除杂交是用结合在磁珠上的以oligo(dT)为引物合成的对照材料（Driver）的cDNA第一链,直接扣除加有接头的处理材料（Tester）cDNA第二链中的共有序列．多次反复使用Driver一链与Tester二链进行杂交,能有效去除Tester二链中的共有序列.磁珠的分离能最小限度地减少每次杂交造成的损失．最后一轮扣除后的Tester二链中,含有大量差异表达序列,用Tester二链特有的接头引物进行扩增,能进一步提高扣除效率．该文选用此扣除方法,成功分离到了低温驯化沙冬青幼苗和对照苗2个群体的18个差异表达克隆,其中有4个克隆是全长cDNA序列．经序列分析发现,这些基因都与低温相关,进一步说明,该方法可用于克隆未知差异表达基因．      

鹅源性成分PCR检测方法的建立

[目的]建立一种检测鹅源性成分的PCR方法。[方法]以15种动物的DNA为模板,利用鹅的特异性引物进行PCR反应,PCR产物用1．4％的琼脂糖凝胶电泳检测并测序,检测引物的特异性和敏感性。[结果]通过PCR反应从鹅样品中扩增到了304bp的目的片段,其他物种火鸡、鸭、鸽鹑、鸵鸟、鸽子、鸡、马、牛、羊、猪、狗、驴、猫、鱼和空白对照则无目的片段,表明该引物的特异性良好。鹅组织PCR产物的核苷酸序列与GenBank中检索到的相应序列基本符合,相似性为98％;PCR检测方法的检测灵敏度为0．01％。[结论]该PCR检测方法特异性强、准确性好、灵敏度高、可重复性好,为明确食品与饲料的成分和来源,预防禽流感的传播提供了有效的分子生物学捡测方法.     

一种基于模板DNA的PCR扩增难易预测方法

借助赋予四种碱基A,G,C,T四个三维空间中的点(0,0,1),(0,1,0),(-1,-1,0),(1,0,0),将一条DNA序列转化为一个二十四维向量。在此基础上利用Fisher线性判别法对人类基因组中189条基因片段进行PCR扩增难易预测,识别率达到了90%。     

菊芋凝集素基因组片段的PCR扩增及克隆

通过PCR扩增 ,获得了菊芋凝集素基因 (hta)的编码区基因组片段hta - g。DNA序列分析表明 ,PCR产物长 70 2bp ,包括 444bp的编码区序列 ,编码区被一个 2 5 8bp的内含子分成 2个长度分别为 2 1 0bp及 2 34bp外显子 ,内含子边界序列符合GT/AG规则。与htacD NA序列的比较分析表明 ,hta - g的编码区序列与htacDNA序列高度同源 ,同源性在 93%～98%。     

IBVS1基因RT－PCR产物的分子克隆

报道了在两条引物的５′端加有不同酶切位点的ＩＢＶＤ４１株Ｓ１基因ＰＣＲ产物与ｐＵＣ１８进行分子克隆的研究情况。采用自己改进的微量基因克隆的方法，经回收的插入片段的分子量大小及ＨａｅⅢ酶切分析，证明获得了两株重组质粒转化子     

青鱼将DNA聚合酶β基因的电子克隆与分析

[目的]为了进行青鱼将DNA聚合酶β基因的电子克隆与分析的试验。[方法]利用生物信息学手段克隆了青鱼将DNA聚合酶β(OlPolβ)基因全长cDNA序列,并对其启动子和编码蛋白结构进行分析。[结果]该cDNA序列的全长1 716 bp,编码含338个氨基酸残基的蛋白。OlPolβ具有14个外显子和13个内含子。OlPolβ启动子上发现了SP1等一些转录因子的潜在结合位点。[结论]OlPolβ蛋白序列与其他脊椎动物的蛋白序列具有高度一致性。     

青鳉DNA聚合酶β基因的电子克隆与分析

[目的]为了进行青鳉DNA聚合酶β基因的电子克隆与分析的试验。[方法]利用生物信息学手段克隆了青鳉DNA聚合酶β（OlPolβ）基因全长cDNA序列,并对其启动子和编码蛋白结构进行分析。[结果]该cDNA序列的全长1716by,编码含338个氨基酸残基的蛋白。OlPolβ具有14个外显子和13个内含子。OlPolβ启动子上发现了SP1等一些转录因子的潜在结合位点。[结论]OlPolβ蛋白序列与其他脊椎动物的蛋白序列具有高度一致性。     

微卫星PCR聚丙烯酰胺凝胶银染法影响因素的分析研究

 微卫星PCR结合聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的DNA检测方法。此法分离小于500bP的DNA片段效果很好，分辨率极高，只相差1bp的片段也能分开，且可容纳相对大量的DNA。再结合银染法使该方法得到了广大科研工作着的青睐，本研究通过多方面摸索对该方法进行了总结和改良。     

稻田土壤DNA的提取及nifA基因的PCR扩增

为弄清茅贡米土壤微生物群落结构和生物固氮等代谢活动机制,采用试剂盒、SDS高盐和土壤预处理+SDS高盐3种土壤DNA提取方法,以从贵州茅贡米基地采集的土样提取的宏基因组DNA为模板,进行nifA基因的PCR扩增,比较了3种土壤DNA提取方法的效果.结果表明,试剂盒提取的DNA扩增到约200 bp和900 bp的nifA...     

不同DNA聚合酶对PCR-DGGE技术的影响

[目的]研究不同DNA聚合酶对PCR-DGGE技术的影响。[方法]选用3种不同的DNA聚合酶对单一的7株菌进行PCR扩增,通过DGGE图谱分析探讨不同的DNA聚合酶对PCR-DGGE技术的影响。[结果]用相同的DNA聚合酶1时,上游引物使用357F1比357F2的效果要好。当357F1作为上游引物时,DNA聚合酶2明显好于DNA聚合酶1,但仍有干扰结果出现;当357F2作为上游引物时,使用DNA聚合酶1和DNA聚合酶2都不能使各菌株分离开来。使用高质量的DNA聚合酶3时,上游引物所加入的无论是40 bp还是只有18 bp的＂GC＂夹,都能够使不同的DNA片段分离开来。[结论]不同的DNA聚合酶对PCR-DGGE技术的影响是很大的,选择合适的DNA聚合酶是至关重要的。     

克隆汽车营销 开自行车“4S店”

汽车4S店是指集整车销售、零配件提供、售后服务、信息反馈“四位一体”的汽车经营模式。近日笔者发现，有这样一家效仿汽车营销理念的自行车“4S店”．不但出售自行车．还负责后期的维修、保养等。与其他卖车店、修车铺和汽车4S店不同的是．这家店还回收自行车用于出租。笔者了解到．这家自行车店目前月收入过万元。     

两地分居性可“零存整取”

现实生活中，有些人因为不得不两地分居，从而带来了性困扰。的确，性能量聚集到一定程度，就要有一个正常的排解手段来释放。那么，两地分居的人，该如何保持亲密呢？     

新型城镇化乡村社区的“德”治与“法”治

随着我国农村城镇化发展,新型乡村社区越来越多,它不同于原来的村庄,社区居民的生产、生活方式、各种社会关系都发生了巨大的变化。几千年来"村庄"意识的惯性仍在影响着新型社区管理,新生活的要求与人们传统习俗会发生一些矛盾。新型社区的管理应"德"治、"法"治相结合,以"法"治为主,规范人们的行为,并冷冻固化,使之成为自然。     

农行将面向“三农”进行金融服务试点

中国农业银行前不久下发<关于进一步做好深化和扩大面向"三农"金融服务试点工作的通知>,面向"三农"金融服务试点将于今年10月份在全行推开.     

“十一五”末我国可基本实现“乡乡能上网”

信息产业部将坚持统筹规划、协调发展、因地制宜、分类指导、试点示范、典型引路的原则，务实推进信息产业服务“三农”的各项工作。其中在互联网建设方面，信息产业部制定的“规划目标”是确保到“十一五”末全国基本实现“乡乡能上网”。