黄芩提取物抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素溶血活性的研究

α-溶血素(αHL)是金黄色葡萄球菌(S.aureus)重要的毒力因子,为研究黄芩醇提物对αHL溶血活性的抑制作用,本研究通过乙醇回流提取法获得黄芩醇提取物,测定其对S.aureus的最小抑菌浓度(MIC)、对αHL表达和生物学活性的影响以及对αHL介导的A549细胞损伤的保护性作用.试验结果显示,黄芩醇提取物对所测试的S.aureus的MIC均高于2048 μg/mL;黄芩醇提取物能够抑制S.aureus培养物上清中的αHL的溶血活性,并呈浓度依赖关系,但对αHL的表达并无抑制作用;而且黄芩醇提取物也能够呈剂量依赖关系缓解S.aureus αHL介导的对A549细胞损伤作用.该结果表明黄芩醇提取物能够以某种形式导致αHL丧失生物活性,并提示黄芩醇提取物是一种潜在的抗S.aureus感染的复合物.     

中草药连翘提取物抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素分泌活性研究

通过乙醇回流提取获得中草药连翘粗提物,利用MIC值测定、溶血活性测定、免疫印迹、RT-PCR、LDH及live/dead等试验方法研究连翘提取物对金黄色葡萄球菌α-溶血素分泌的影响.结果表明:连翘提取物对金黄色葡萄球菌的最小抑菌质量浓度(MIC)均大于2 048 mg/L,表明连翘提取物不影响金黄色葡萄球菌生长.连翘提取物在16～128 mg/L时,抑制了金黄色葡萄球菌α-溶血素的分泌,而且这种抑制作用呈剂量依赖性.研究结果提示连翘提取物可作为一种潜在的抗金黄色葡萄球菌感染药物,可进一步开发.     

亚抑菌浓度穿心莲提取物对减缓金黄色葡萄球菌α-溶血素介导的A549细胞损伤作用的影响

金黄色葡萄球菌是一种广泛存在的重要致病菌,可引起人类和动物许多严重的感染。另外,α-溶血素是金黄色葡萄球菌最重要的毒力因子之一。本研究通过乙醇回流提取方法,获得中草药穿心莲提取物,然后通过最低抑制浓度(MIC)值测定、溶血活性测定、Western blotting、RT-PCR、LDH及Live/dead等方法研究分析穿心莲提取物对金黄色葡萄球菌α-溶血素分泌的影响及对A549细胞的保护作用。试验结果表明,穿心莲提取物对金黄色葡萄球菌的MIC值为2048 μg/mL,且呈剂量依赖性地抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素分泌,并能有效减缓金黄色葡萄球菌菌液上清对A549细胞的损伤。提示,穿心莲提取物是一种潜在的抗金黄色葡萄球菌感染的药物。     

金黄色葡萄球菌α-溶血素基因的克隆与序列分析

参考Gary S Gray和Michael Kehce在《传染与免疫》杂志上发表的关于金黄色葡萄球菌α溶血素蛋白的基因序列,设计合成1对引物,从分离自牛体的野生株金黄色葡萄球菌中提取细菌总DNA,对α溶血素蛋白基因进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现1条约960 bp的条带,回收纯化后,将其克隆至pMD18 T质粒载体中,进行核苷酸序列分析,然后与报道的α溶血素蛋白基因进行比较。结果表明:所鉴定的野生株金黄色葡萄球菌的α溶血素蛋白基因序列与报道的核苷酸的同源性高达99.99%以上,证实为金黄色葡萄球菌Wood 46株α溶血素蛋白基因。     

蜂胶对金黄色葡萄球菌α-溶血素的抑制作用

通过吸光度测量和荧光定量PCR的方法,在体外检测亚抑菌浓度的蜂胶作用下金黄色葡萄球菌α-溶血素活力变化及agrA、hla的mRNA表达量。结果显示,不同浓度蜂胶对金黄色葡萄球菌α-溶血素有不同程度的抑制作用（P〈0.05）;同时荧光定量PCR检测agrA和hla基因表明,蜂胶能够显著减少agrA和hla mRNA的相对表达量,进而抑制α-溶血素的表达。     

甘草查尔酮E对金黄色葡萄球菌的抗菌活性

应用肉汤微量稀释法测定甘草查尔酮E对金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）的抗菌活性,并通过溶血试验、Western blot分析和荧光定量PCR试验考察亚抑菌浓度的甘草查尔酮E对金葡菌α-溶血素表达的影响。结果显示,甘草查尔酮E对7株金葡菌的最低抑菌质量浓度为2～8mg/L;亚抑菌浓度的甘草查尔酮E能显著降低金葡菌α-溶血素的表达,且呈现剂量依赖性。     

Study on the Intervention Effect and Mechanism on Insulin Resistant Mice of Total Flavone from Melastoma dodecandrum Lour.

This experiment was conducted to explore the intervention effect and mechanism on insulin resistance (IR) mice of total flavonoids from Melastoma dodecandrum Lour.(TFMD).The model of IR mice was established by intragastric administration of high-fat emulsion,while 600,300 and 150 mg/kg TFMD were administered once daily for 30 days.After the end of the experiment the mices' fasting blood glucose (FBG),fasting serum insulin (FINS),serum total cholesterol(TC),triglyceride (TG),high density lipoprotein(HDL) were determined.The mRNA expression level of liver insulin receptor(InsR),fat peroxisome proliferator-activated receptor-γ(PPAR-γ),and glucose transporter 4 gene (GLUT4) in skeletal muscle were detected by Real-time quantative PCR,and the protein levels were detected by immunohistoche mical method.The results showed that TDMF could reduce the body weight of IR mice,decrease the level of serum FBG,FINS and HOMA-IR,increase the level of ISI,decrease the content of serum TG,TC and LDL,and increase the content of HDL(P<0.01,P<0.05);And the mRNA expression of INSR,PPAR-γ in liver and GLUT4 in skeletal muscle of IR mice were increased(P<0.01,P<0.05),and the protein expression level of InsR,PPAR-γ in liver and GLUT4 in skeletal muscle of IR mice were increased(P<0.01,P<0.05).The results confirmed that the TFMD could relieve experimental insulin resistance in mice,and the activity was related to the regulation of glucose and lipid metabolism and the enhancement of insulin sensitivity.     

地菍总黄酮对胰岛素抵抗小鼠的干预作用及机制研究

本研究旨在探讨地菍总黄酮（TFMD）对胰岛素抵抗（IR）小鼠的干预作用及其机制。试验以灌胃高脂乳剂建立胰岛素抵抗小鼠模型,同时灌胃给予地菍总黄酮混悬液（高剂量（600 mg/kg）、中剂量（300 mg/kg）及低剂量（150 mg/kg））进行治疗,治疗周期为30 d。试验结束后测定小鼠血清中空腹血清胰岛素（FINS）、空腹血糖（FBG）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、胰岛素敏感指数（ISI）、血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）及高密度脂蛋白（HDL）水平;利用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠肝脏中胰岛素受体（InsR）、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）及骨骼肌中葡萄糖转运体4（GLUT4）的mRNA表达水平;利用免疫组化技术检测各组小鼠肝脏中InsR、PPAR-γ和骨骼肌中GLUT4的蛋白表达水平。结果显示,与模型组相比,地菍总黄酮能降低IR小鼠的体重,降低血清FBG、FINS及HOMA-IR水平,升高ISI水平（P<0.01,P<0.05）;降低血清TG、TC及LDL含量,升高HDL含量（P<0.01,P<0.05）;同时提高IR小鼠肝脏中InsR、PPAR-γ及骨骼肌中GLUT4的mRNA表达量,提高小鼠肝脏InsR、PPAR-γ及骨骼肌中GLUT4的蛋白表达水平（P<0.01,P<0.05）。以上试验结果证实,地菍总黄酮能有效缓解小鼠试验性胰岛素抵抗症状,该活性与调节糖脂代谢、增强胰岛素敏感性有关。     

Association af Changes in the Bacterial Ecology of Bovine Mastitis with Changes in the use of Milking Machines and Antibacterial Drugs

The results of mastitis bacteriology made by the National Veterinary and Food Research Institute in Finland during the past 50 years (1.15 million samples) are viewed in relation to simultaneous changes in dairy cow management. Although intensive preventive measures have been applied for decades, the prevalence of bovine mastitis has not decreased. Instead, pathogenic bacteria are becoming progressively less susceptible to the available therapy. In part this must be due to the emergence of antibiotic resistant strains of bacteria, but it seems that the bacterial spectrum has also changed. The incidence of Streptococcus agalactiae (group B streptococci) has decreased, while in contrast, the incidence of staphylococci, initially Staphylococcus aureus and later coagulase-negative staphylococci, has increased. Results suggest that external pressure, like changes in animal husbandry, including antimicrobial treatments and introduction of modern milking machines, act as selective forces on the bacterial species which cause bovine mastitis.     

鸢尾黄素作为MgrA抑制剂对小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的治疗作用

本研究旨在从中药小分子库中筛选出金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）转录调控因子MgrA的单体抑制剂,并探讨其对金黄色葡萄球菌主要毒力因子的影响及对小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的治疗作用。使用荧光各向异性分析法进行抑制剂的筛选,通过实时荧光定量PCR、溶血试验及纤维蛋白原黏附试验考察药物对MrgA调控的相关毒力基因转录表达及对溶血和黏附的抑制作用,采用热稳定迁移试验对其抑制机制进行初步探讨,最后通过建立小鼠肺炎模型评估鸢尾黄素对金黄色葡萄球菌诱导的小鼠肺炎的治疗作用。结果显示,鸢尾黄素作为MgrA的抑制剂,在不影响细菌生长的低浓度下（IC₅₀=20.35 μg/mL）就能显著抑制MgrA的活性（P<0.05）;实时荧光定量PCR结果显示,鸢尾黄素可显著降低fnba基因的转录水平（P<0.05）,极显著降低hla和RNAⅢ基因的转录水平（P<0.01）,同时极显著上调ebh、srap和spa基因的转录水平（P<0.01）;溶血试验显示,8 μg/mL鸢尾黄素可极显著抑制USA300菌株的溶血作用（P<0.01）;纤维蛋白原黏附试验证实32 μg/mL鸢尾黄素可极显著抑制USA300菌株的黏附活性（P<0.01）;热稳定迁移试验揭示了鸢尾黄素是通过与MgrA结合从而抑制其活性。小鼠肺炎试验结果显示,鸢尾黄素能极显著提高金黄色葡萄球菌感染小鼠的存活率（P<0.01）,极显著减少其肺脏载菌量（P<0.01）,并减轻小鼠肺脏组织的病理损伤和炎症反应。以上结果表明,鸢尾黄素能通过抑制转录调控因子MgrA的活性对金黄色葡萄球菌感染引起的小鼠肺炎起到治疗作用,可作为开发治疗金黄色葡萄球菌感染的先导化合物,并为以毒力因子MgrA为靶标的药物研发提供了理论依据。     

SarA调控金黄色葡萄球菌生物被膜形成的研究进展

金黄色葡萄球菌生物被膜的形成是一个多基因和多因子共同调控的过程。葡萄球菌属辅助调节子SarA是金黄色葡萄球菌主要的毒力基因表达调控系统,能直接或间接调控多种生物被膜形成相关基因的表达。本文将对SarA的结构及其调控生物被膜形成的机制作一综述,为深入研究金黄色葡萄球菌的致病机理和开发新的抗生物膜感染策略提供参考。     

安普霉素及其联合用药对3种细菌体内抗生素后效应的研究

采用菌落计数法和中性粒细胞减少小鼠股部感染模型,分别测定了安普霉素及其与阿莫西林、氨苄西林联用对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌的体内抗生素后效应(post antibiotic effect,PAE)。试验结果表明,安普霉素在体内对3种细菌均有较长的体内PAE,且随药物浓度的升高其PAE也相应的延长,呈明显的剂量依赖性。安普霉素与阿莫西林或氨苄西林联用对3种细菌的体内PAE呈现协同作用。     

金黄色葡萄球菌对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞PDGF-BB mRNA及蛋白表达的影响

为研究金黄色葡萄球菌(S.aureus)对奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)中PDGF-BB m RNA及蛋白表达的影响,本研究采用热灭活的不同浓度的S.aureus菌液(0、105、106、108cfu/m L)作用于BMEC,分别在不同时间点(6 h、12 h、24 h、48 h)利用荧光定量PCR和western blot方法检测PDGF-BB m RNA及其蛋白的相对表达量。结果显示,不同浓度菌液处理组的PDGF-BB m RNA相对表达量随着作用时间延长表达量升高(p0.05)。6 h处理组随着菌液浓度的升高,PDGF-BB m RNA的相对表达量呈升高趋势;12 h处理组随着菌液浓度的升高,PDGF-BB m RNA的相对表达量呈降低趋势;24 h和48 h处理组105cfu/m L菌液处理组PDGF-BB m RNA相对表达量最高(p0.05)。同时,各时间点不同浓度菌液处理组PDGF-BB蛋白的相对表达量和m RNA表达基本一致。本研究表明,热灭活的S.aureus能够促进BMEC PDGF-BB m RNA和蛋白的表达。     

赤芍、白芍煎剂对金黄色葡萄球菌诱导肺炎小鼠血清HMGB1水平影响的比较

通过ELISA法和病理组织学观察,比较赤芍与白芍煎剂对金黄色葡萄球菌吸入性肺炎小鼠的血清高迁移率族蛋白B1（HMGB1）水平的影响及肺的病理组织学变化。结果表明,金黄色葡萄球菌感染的肺炎小鼠的血清HMGB1水平显著升高（P<0.01）,但经赤芍、白芍处理的小鼠HMGB1水平极显著低于肺炎小鼠（P<0.01）;白芍处理肺炎小鼠的HMGB1水平显著或极显著低于赤芍处理组（P<0.05或P<0.01）。金黄色葡萄球菌感染的肺炎小鼠肺泡壁显著增厚,肺支气管周围炎性细胞浸润;赤芍、白芍处理组小鼠肺组织中,只有少许肺泡壁增厚,肺泡腔内未见异物。赤芍、白芍均能减轻肺炎所致的肺组织结构变化和明显地降低血清炎症介质HMGB1水平,白芍的效果更为显著。     

Mechanism of insulin action on glucose metabolism in ruminants

This review presents a brief overview on the mechanism of insulin action on glucose metabolism at the molecular basis in ruminants. For ruminants, an exact mechanism of insulin on glucose metabolism is still rudimentary, but it is clear that originally, if not all, the mechanism of insulin action in ruminants was the same as in other species. Like non‐ruminants, the insulin‐sensitive glucose transporter GLUT 4 is thought to be a key‐protein in the control of glucose uptake and metabolism in ruminants, and insulin regulates glucose transport by stimulating the translocation of GLUT 4 from an intracellular membrane pool to the plasma membrane in adipocytes and muscles. Moreover, insulin‐induced GLUT 4 translocation is activated through the common intracellular signaling pathway of insulin phosphatidylinositol 3‐kinase (PI3‐kinase) signaling pathway rather than the mitogen activated protein kinase (MAP kinase)‐dependent signaling pathway. However, GLUT 4 mRNA and protein, and insulin‐induced GLUT 4 translocation on adipocytes and muscles in ruminants are lower than those in rodents and human subjects. Furthermore, insulin‐induced PI3‐kinase activation is reduced concomitantly with the lower content of insulin receptor substrate‐1 (IRS‐1) in ruminants. In spite of normal status, a resistance to the stimulatory action of insulin on glucose metabolism in ruminants as compared to non‐ruminants may be due to, at least in part, the lower content of GLUT 4 and the lower capacity of insulin signal transduction, resulting to the lower glucose transport activity.