山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

试验旨在了解山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的污染状况及耐药情况。选择山东省3个地区的规模化奶牛场共采集227份牛奶样品,采用细菌学方法对大肠杆菌进行分离鉴定,用微量肉汤稀释法检测分离菌对11种常规抗菌药物的敏感性,采用PCR方法对常见的13种耐药基因、8种毒力基因和Ⅰ类整合子基因盒结构进行分析。结果显示,从227份牛奶样品中共分离出71株大肠杆菌;大肠杆菌对1种及1种以上抗菌药耐药的菌株达到77.5%,多重耐药率为15.5%,其中对多黏菌素耐药率为52.2%,对阿莫西林-克拉维酸耐药率为39.4%,而所有菌株均对新霉素表现为敏感。PCR检测耐药基因、毒力基因和Ⅰ类整合子结果显示,β-内酰胺类耐药基因中blaTEM基因携带率为100%,其中全部为blaTEM-1基因,blaCTX-M基因携带率为32.4%,其中主要为blaCTX-M-15基因,没有检测到blaSHV、blaOXA基因;多黏菌素的耐药基因mcr-1携带率为29.6%;喹诺酮类耐药基因中aac(6’)-Ⅰb-cr基因携带率为29.6%,qnrB基因携带率为20.8%,没有检测到qnrA和qnrC耐药基因;对8种毒力基因检测分析结果显示,仅Hly毒力基因没有被检出,Ecs3703、Irp2基因的检出率较高,分别为90.1%和63.4%,71株大肠杆菌中共有11株携带Ⅰ类整合子,检出率为15.5%,11株大肠杆菌携带6种耐药基因盒结构,最主要的耐药基因盒排列为dfr17-aadA5。本研究结果表明,山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的耐药现象严重,携带毒力基因Ecs3703、Irp2的大肠杆菌可能是引起奶牛乳房炎的致病菌,Ⅰ类整合子的检测在细菌耐药性与基因携带率方面发挥着关键作用,可为临床预防和治疗奶牛乳房炎大肠杆菌病提供理论依据。     

奶牛乳房炎大肠杆菌整合子与耐药表型的相关性研究

为研究自乳房炎奶牛分离的大肠杆菌整合子携带情况与其耐药表型之间的相关性，在获得菌株对20种抗菌药物耐药谱的基础上，设计Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子简并引物扩增菌株的整合酶基因，并结合内切酶限制性片段长度多态性分析，调查菌株携带的各类整合子，然后进一步扩增菌株整合子的基因盒插入区，测序分析其携带的基因盒。结果发现，80株自奶牛乳房炎病例分离的大肠杆菌中有37株检出Ⅰ类整合子（检出率46．25％），未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子。Ⅰ类整合子阳性菌中31株扩增出3种不同大小的基因盒插入区片段，插入基因盒主要是二氢叶酸还原酶基因（dfr）和氨基糖苷类抗生素耐药基因（aadA），最主要的基因盒排列为dfrA17-aadA5。分析表明，Ⅰ类整合子集中分布在耐受7种以上抗菌药物的菌株中，与菌株的多重耐药性高度相关，而菌株Ⅰ类整合子携带的耐药基因盒与其耐药谱缺乏对应关系。     

猪源大肠杆菌耐药性与Ⅰ型整合子关系研究

目的为了解猪源大肠杆菌中Ⅰ型整合子的流行情况,探讨Ⅰ型整合子与大肠杆菌耐药表型的相关性。方法采用微量肉汤稀释法测定119株猪源大肠杆菌对8类14种抗菌药物的耐药性,并采用PCR法检测猪源大肠杆菌Ⅰ型整合酶基因(int I1)并扩增其可变区,对PCR产物进行酶切分析,测序分析整合子可变区携带的耐药基因盒。结果 119株大肠杆菌耐药现象十分严重,对四环素、磺胺异恶唑、新诺明全部耐药,所有菌株均呈多重耐药。119株猪源大肠杆菌中有92株含Ⅰ型整合子,检出率77.31%。扩增出7类大小不同的基因盒插入区片段,范围为1008bp～3149bp。7类Ⅰ型整合子在119株猪源大肠杆菌中存在13种流行组合。78.15%大肠杆菌菌株的Ⅰ型整合子携带2种或2种以上的基因盒,其中以携带编码氨基糖苷类药物耐药基因(aadA1、aadA2、aadA5、aadA22、aadB)最多,其次为编码磺胺类药物耐药基因(dfrA1、dfrA12、dfrA17、dfrA27),此外还携带编码利福平、林可霉素和氯霉素的基因lnuF、cmlA6、aar-3、orf。结论Ⅰ型整合子普遍存在于大肠杆菌中,且呈流行上升趋势;Ⅰ型整合子参与耐药及多重耐药,但单株细菌携带的耐药基因盒与其耐药表型无对应关系。     

吉林地区乳房炎奶样中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解吉林省奶牛乳房炎中分离到的大肠杆菌耐药情况,本研究从全省15个奶牛场采集的300份乳样中分离革兰氏阴性菌144株,经生化鉴定获得60株大肠杆菌,药敏实验结果显示:60株大肠杆菌对阿奇霉素、头孢噻呋、阿莫西林、氨苄西林、链霉素、磺胺异噁唑、萘啶酸等完全耐药;95%以上的菌株对头孢西丁、头孢曲松钠、四环素和甲氧苄氨嘧啶耐药;60%的菌株对氯霉素耐药;45%的菌株对庆大霉素耐药;30%的菌株对环丙沙星耐药。研究发现在所有分离的革兰氏阴性菌中大肠杆菌检出率最高,占总检出率的41.67%,且不同奶牛场和不同标本中分离的大肠杆菌对常用抗菌药物的耐药性有着不同的特点。     

湛江地区肉鸡养殖场大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解广东湛江地区肉鸡养殖场中大肠杆菌耐药性和耐药基因的流行与传播特点,从湛江地区的8个肉鸡场分别采集粪便和土壤样品各120份,从中分离鉴定出200株大肠杆菌,药敏纸片扩散试验检测分离菌株对23种抗菌药的耐药情况,并利用PCR法检测分离菌株携带耐药基因的分布情况。结果显示,从粪便和土壤中分离的200株菌株均对磺胺异噁唑、万古霉素、复方新诺明等12种抗菌药具有较高耐药率(≥50%),对美罗培南、呋喃唑酮、磷霉素等11种抗菌药具有较低耐药率(≤50%)。分离的大肠杆菌菌株均检出耐药基因,养殖场粪便分离菌中检出耐药基因28种,其中bla_TEM、sul2检出率较高;土壤分离菌中检出耐药基因25种,其中bla_TEM、int1、sul2、tet D检出率较高。分离菌的多重耐药现象普遍存在。由于耐药机制复杂,细菌耐药性的传播特点和方式仍需进一步探索。     

致犊牛脑炎大肠杆菌分离鉴定、耐药性及毒力基因检测

为了确定新疆石河子地区某规模化牛场表现为神经症状的病死犊牛的细菌性病原及其生物学特性,为后期新疆地区犊牛大肠杆菌病的防制及研究提供基础,研究采用常规细菌分离鉴定方法以及16S rRNA基因测序分析从病变组织中分离鉴定细菌,并对分离株进行药物敏感性试验、致病性试验以及特异基因PCR检测,对分离株进行耐药基因和毒力基因的分析。结果显示,从病死犊牛的肺脏和脑组织共分离鉴定出3株致病性较强的大肠杆菌;3株菌对青霉素、阿莫西林、头孢他啶、头孢唑啉、头孢拉定、链霉素、庆大霉素、多西环素、麦迪霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、复方新诺明、替考拉宁、克林霉素表现出100%耐药,对多黏菌素B、阿奇霉素表现出高度敏感;从3株分离菌中均检测到blaCTX-M、sul1、sul2、gyrA、aadA1、aacC2、aph(3’)-Ia、tetB等8种耐药基因以及crl、hlyE、iucD、papC、malX、ompA、opmC、ompF、irp2等9种毒力基因。结果表明,新疆石河子地区某规模化牛场表现为神经症状的病死犊牛的细菌性病原是大肠杆菌,且表现较强的多重耐药现象,分离株携带丰富的耐药基因以及...     

河南地区猪源肠外致病性大肠杆菌的分离鉴定与耐药性试验

为了解猪源肠外致病性大肠杆菌在河南地区的流行及耐药性,本试验于2016—2018年从河南省61家猪场送检的发病猪中,采集肺脏等病料,进行大肠杆菌的分离与鉴定,并用微量稀释法测定分离菌株的耐药性,采取PCR法检测分离菌株中氟苯尼考耐药基因(floR)、Ⅰ类整合酶基因的携带情况,通过Ⅰ类整合子基因盒可变区序列的BLAST比对,分析其耐药基因携带情况。结果显示,经细菌分离共获得17株肠外致病性大肠杆菌,检出率为27.86%(17/61);分离菌株对氨苄西林、磺胺甲噁唑、四环素、氟苯尼考和氯霉素等药物耐药率为100%,对多黏菌素耐药率为41.18%,分离菌株均呈多重耐药;在分离菌株中,floR、Ⅰ类整合子携带率均为100%,Ⅰ类整合子基因盒主要携带dfrA17-aadA5、aadA22-aadA23-aadA25、dfrA12、dfrA12-aadA2和floR等类型耐药基因谱。本试验结果表明河南地区猪源肠外致病性大肠杆菌具有一定的流行性,且耐药问题十分严重,极易导致临床上治疗失败,应引起重视。     

犊牛肺炎大肠杆菌的分离鉴定、耐药性及致病力检测

为确定新疆石河子地区某规模化牛场表现为呼吸道症状病死犊牛的细菌性病原,本研究采用常规细菌分离、PCR及生化鉴定方法从采集的病牛组织中分离并鉴定病原菌,采用PCR方法对其系统进化分群、采用K-B纸片扩散法检测细菌的药物敏感性、采用PCR方法分别检测细菌的耐药基因和毒力基因,经腹腔注射菌液进行小鼠的致病性试验,对分离菌株进行生物学特性研究。分离及鉴定结果显示,从病死犊牛的肺脏分离鉴定出的2株大肠杆菌(E1和E2)分属于A群和B1群;药敏试验结果显示两株分离菌对青霉素、阿莫西林、头孢他啶、头孢唑啉、头孢拉定、头孢哌酮、美罗培南、链霉素、妥布霉素、多西环素、麦迪霉素、阿奇霉素、氟苯尼考、替考拉宁、克林霉素耐药;且2株分离菌均检测到β-内酰胺类的blaTEM、喹诺酮类的aac(6’)-Ib、gyr A共3种耐药基因以及crl、csgA、fimH、pap、motA、hlyE、iucD、omp A、espA、Lux S、fyu A、pta共12种毒力基因;分离菌株耐药基因与耐药表型的结果表明分离菌株表现较强的多重耐药现象;小鼠的致病性试验结果显示分离菌株均为致病性大肠杆菌,E1菌株感染小鼠在32 h...     

胶东地区耐药猪源大肠杆菌Ⅰ型整合子-基因盒流行状况分析

在胶东地区119株多重耐药大肠杆菌中,共92株菌有I型整合子整合酶基因,检出率达77.31%。92株I型整合子携带大肠杆菌共扩增出7类不同大小的基因盒插入区片段,大小分别为1008bp、1318bp、1586bp、1663bp、1913bp、1945bp、3149bp,其中以大小为1008bp的插入区片段的检出率最高,为31.67%。而检出率最低的为长度为1318bp的基因盒插入区。将基因盒插入区扩增片段的测序结果与Genebank中的相关序列进行比对,得出Ⅰ型整合子携带的耐药基因盒种类分别为aadA1、aadA2、aadA5、aadA22、aadB、dfrA1、dfrA12、dfrA17、dfrA27、lnuF、cmLA6、aar-3、orfF分别编码对相应药物的耐药性。     

我国部分地区乳房炎奶样中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解我国部分地区奶牛乳房炎奶样中大肠杆菌的耐药情况,以指导牛场合理使用抗生素,提高治疗效果和畜产品质量,从全国六个省市自治区采取158例奶牛乳房炎的奶样,对奶样中的大肠杆菌进行分离纯化与鉴定,并进行药敏试验。结果显示,158份奶样中,共分离出38株大肠杆菌,其中黑龙江18株(分离率为36.0%)、上海3株(分离率6.0%)、北京3株(分离率27.2%)、新疆10株(分离率33.3%)、山东4株(分离率26.7%)、陕西0株(分离率0)。药敏试验显示,磺胺异噁唑耐药率最高,为73.7%;环丙沙星、诺氟沙星、四环素、链霉素药物的敏感率最高,为100%。分离菌株最多耐13种药物,最少耐4种药物,呈现多重耐药性。不同种类的抗生素中,上海和山东对β-内酰胺类药物和氯霉素类药物以及黑龙江、上海和新疆对磺胺类药物的耐药情况比较严重,耐药率高达50%以上。结果表明,各地区分离株对多种抗菌药物产生了不同程度耐药性和多重耐药,临床兽医在治疗时应注意合理用药,提高疗效和畜产品质量,减少耐药性的产生。     

Detection and Analysis of Virulence Genes and Drug Resistance Genes in E. coli Strains Isolated from Dairy Cows with Clinical Mastitis in Liaoning Region

In order to understand the virulence genes and drug resistance genes carried by E.coli strains from dairy cows with mastitis in large-scale dairy farms in Liaoning region, and also provide improved programs for control and treatment of mastitis to dairy farmers, 66 strains of E.coli isolated from milk of dairy cows with clinical mastitis in several large-scale farms in Liaoning region were examined to detect 4 virulence genes and 4 drug resistance genes using PCR methods. The results showed that none of the target genes was detected in only one strain, while at least 2 and up to 7 target genes were detected in the rest of 65 strains. The detection rates of the virulence genes stx2e, eaeA, K99 and astA were 56.1%, 47.0%, 34.8% and 31.8%, respectively. In addition, the detection rate of dual virulence gene reached 43.9%, in which the genotype with the highest detection rate was eaeA/stx2e. The detection rates of the drug resistance genes sul3, sul1, cmlA and aacA4 were 87.9%, 83.3%, 40.9% and 28.8%, respectively. And the dual resistance gene detection rate was 36.4%, in which the highest detection rate was sul1/sul3 genotype; Triple drug resistance gene detection rate was 37.9%, and cmlA/sul1/sul3 presented the highest detection rate. These results confirmed that the E.coli isolated from dairy cow mastitis in large-scale dairy farms in Liaoning region had high detecting rates of sulfonamide resistance genes and chloramphenicol resistance genes, which was directly related to the drug resistance of the E.coli. These results provided important guiding significance for the prevention and control of dairy cow mastitis in Liaoning region as well as the safety of public health.     

辽宁地区奶牛乳房炎源大肠杆菌毒力基因及耐药基因检测分析

为了掌握辽宁地区规模奶牛场乳房炎源大肠杆菌携带的毒力基因和耐药基因,为奶牛养殖业提供更好的乳房炎防制方案,本研究采用PCR检测方法对辽宁地区多个规模奶牛场临床奶牛乳房炎奶样中分离的66株大肠杆菌进行了4种毒力基因和4种耐药基因的检测分析。结果发现,66株大肠杆菌中仅有1株未检出相关目的基因,其余65株中最少检出2种目的基因,最多检出7种目的基因。其中,毒力基因stx2e、eaeA、K99和astA的检出率分别为56.1%、47.0%、34.8%和31.8%,双重毒力基因的检出率达到43.9%,以eaeA/stx2e基因型的检出率最高;耐药基因sul3、sul1、cmlA及aacA4的检出率分别为87.9%、83.3%、40.9%和28.8%,双重耐药基因的检出率为36.4%,以sul1/sul3基因型检出率最高;三重耐药基因的检出率为37.9%,以cmlA/sul1/sul3检出率最高。本研究结果证实,辽宁地区奶牛乳房炎源大肠杆菌携带磺胺类耐药基因和氯霉素类耐药基因的比率较高,与大肠杆菌的耐药性有较直接的关系,该结果对于辽宁地区奶牛乳房炎的防制具有重要的指导意义,更具有重要的公共卫生意义。     

西藏那曲市羊源大肠杆菌分离鉴定及耐药性研究

为了解西藏那曲市羊大肠杆菌的耐药情况,指导临床进行合理用药,本试验从那曲市采集羊新鲜无污染腹泻物92份,进行大肠杆菌显色培养基分离、革兰氏染色镜检、生化鉴定、分子生物学鉴定、致泻性大肠杆菌生化鉴定、药敏试验及耐药基因检测。结果显示,分离菌株在大肠杆菌显色培养基上呈蓝色菌落、革兰氏染色为粉红色的短杆菌,通过生化鉴定及23S rRNA的PCR检测得到26株羊源大肠杆菌,分离率为28.3%;其中25株符合致泻性大肠杆菌生化特性,致泻菌株分离率为27.2%。药敏试验结果显示,所得25株羊源大肠杆菌对氨苄西林的耐药性较高,耐药率为24.0%;对羧苄西林、卡那霉素的耐药性次之,耐药率为8%;对哌拉西林、头孢呋辛、庆大霉素、四环素、米诺霉素等药物耐药率为4%;对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星等药物极为敏感,可作为临床用药。5种耐药基因检测结果显示,bla_TEM基因检出率为100%,表明分离菌均含有相应的耐药基因。以上结果表明,西藏那曲市羊源大肠杆菌对多种药物耐药,提示在临床实践过程中应注重合理用药、联合用药,减缓大肠杆菌耐药性的产生。     

肉牛溶血性大肠埃希菌分离鉴定和毒力与耐药基因检测及药敏试验

为了解肉牛溶血性大肠埃希菌毒力基因和耐药基因分布情况及药物敏感性,从河北省围场县采集的健康肉牛鼻腔棉拭子中分离鉴定溶血性大肠埃希菌,采用PCR检测大肠埃希菌的4个毒力基因和12个耐药基因,并采用K-B法进行药敏试验。结果表明,从116份健康的肉牛鼻腔中分离鉴定出23株溶血性大肠埃希菌,分离率为19.8%;毒力基因检测结果显示,6株菌同时携带LEE(Ler、eaeA)毒力基因,携带率26.1%,18株同时携带高致病性毒力基因HPIirp2、fyuA,携带率78.3%,6株同时携带LEE和HPI毒力基因,携带率为26.1%;耐药基因检测结果显示,blaTEM、aadA1耐药基因的携带率最高,为100%;药敏试验结果显示,23株溶血性大肠埃希菌对头孢氨苄、复方新诺明、磺胺间甲氧嘧啶耐药。结果表明,溶血性大肠埃希菌普遍存在于健康肉牛鼻腔中,HPI毒力基因和β-内酰胺类和耐链霉素类耐药基因携带率高。对河北省围场县肉牛溶血性大肠埃希菌毒力基因和耐药基因进行了研究,并进行药物敏感性分析,结果提示溶血性大肠埃希菌对肉牛养殖存在潜在威胁。     

猪源大肠杆菌耐药性与I型整合子关系研究

目的为了解猪源大肠杆菌中I型整合子的流行情况,探讨I型整合子与大肠杆菌耐药表型的相关性。方法采用微量肉汤稀释法测定119株猪源大肠杆菌对8类14种抗菌药物的耐药性,并采用PCR法检测猪源大肠杆菌I型整合酶基因（int11）并扩增其可变区,对PCR产物进行酶切分析,测序分析整合子可变区携带的耐药基因盒。结果119株大肠杆菌耐药现象十分严重,对四环素、磺胺异恶唑、新诺明全部耐药,所有菌株均呈多重耐药。119株猪源大肠杆菌中有92株含I型整合子,检出率77．31％。扩增出7类大小不同的基因盒插入区片段,范围为1008bp-3149bp。7类I型整合子在119株猪源大肠杆菌中存在13种流行组合。78．15％大肠杆菌菌株的I型整合子携带2种或2种以上的基因盒,其中以携带编码氨基糖苷类药物耐药基因（aadA1、aadA2、aadA5、aadA22、aadB）最多,其次为编码磺胺类药物耐药基因（dfrA1、dfrA12、dfrA17、dfrA27）,此外还携带编码利福平、林可霉素和氯霉素的基因1nuF、cm1A6、aar-3、off.结论I型整合子普遍存在于大肠杆菌中,且呈流行上升趋势;I型整合子参与耐药及多重耐药,但单株细菌携带的耐药基因盒与其耐药表型无对应关系。     

犊牛肺源致病性大肠杆菌分离鉴定、耐药性及耐药基因检测

本试验旨在确定新疆石河子地区某牛场因呼吸系统疾病导致犊牛死亡的细菌性病原,并对分离病原进行系统进化分类、耐药表型和耐药基因分析。采用细菌常规分离结合全自动生化分析系统对分离株进行分离鉴定,采用纸片法和PCR方法对分离株进行系统分群、药敏表型及耐药基因的分析。从患病犊牛肺脏、肝脏及淋巴结组织分离鉴定出6株致病性大肠杆菌,6株分离株均呈多重耐药现象,其中对青霉素、阿莫西林、头孢唑啉、头孢拉定、链霉素、庆大霉素、氟苯尼考、替考拉宁、克林霉素、美罗培南、四环素和妥布霉素的耐药率高达100%。氨基糖苷类耐药基因aacC2、β-内酰胺类耐药基因bla_CTX-M和bla_TEM、四环素类耐药基因tetA、喹诺酮类耐药基因gyrA、磺胺类耐药基因sul2携带率分别为66.67%、83.3%、66.7%、100%、100%和100%。结果表明,新疆石河子某牛场发生呼吸道感染死亡犊牛细菌性病原是大肠杆菌,且表现较强的多重耐药现象,分离株携带更为丰富的耐药基因。     

一株鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药分析

对江西省樟树市某鸭养殖场送检的病死鸭进行病理剖检,通过细菌分离、生化鉴定得到1株致病性大肠杆菌。药敏试验结果表明,该菌株对头孢拉定、头孢唑啉、头孢曲松和阿莫西林等β-内酰胺类抗生素产生了严重的耐药。通过质粒提取和接合转移试验对分离菌株进行耐药性分析;提取得到一10 kb左右的质粒;质粒接合转移试验表明,成功将该质粒转化入感受态E.coli JM109,并能使E.coli JM109获得对β-内酰胺类抗生素耐药且与分离菌株的耐药谱一致。推测该菌株产β-内酰胺酶的基因存在于质粒,并且该耐药基因能随质粒的转移转化入敏感菌E.coli JM109。