中草药提取液对3种柑橘病原菌的抑制作用

为了对中草药提取物应用于水果保鲜领域和开发新型植物源农药提供理论基础和依据,在中药质量浓度为0.05g/mL条件下,测定19种中草药水提物对3种来自柑橘采后病害的病原菌意大利青霉(Penicillium italicum Wehmer)、指状青霉(Penicillium digitatum Sacc.)和柑橘链格孢(Alternaria citri Ellis et Pierce)的抑菌效果.结果表明:同一种中药对不同病原菌及不同中药对同一病原菌的抑制作用存在差异.19种中草药水提物中,黄连对3种病原菌的综合抑菌率最高,为98.37%,且黄连提取物对意大利青霉,指状青霉,柑橘链格孢的最小抑菌浓度(MIC)分别为:0.2,0.025,0.05g/mL.而白芥子对意大利青霉以及桃仁、茯苓和玄参对指状青霉的生长则具有不同程度的促进作用.     

梨枣病原菌的抑制剂筛选研究

本文通过抑菌圈法,研究了不同药剂对梨枣病原真菌链格孢菌(Alternaria sp.)和青霉菌(Penicillium Link.)生长的抑制效果,筛选出对上述真菌生长抑制效果较好的抑菌剂过氧乙酸,1.5%过氧乙酸对链格孢菌相对抑制率为84.78%,对青霉菌相对抑制率为80.03%。     

柑橘采后主要病原菌的生物学特性研究

研究不同环境因子下柑橘绿霉病(指状青霉)、青霉病(意大利青霉)病原菌的生长生物学特性。分析不同的培养基、不同碳源、不同氮源、不同温度、不同pH值、不同盐度对指状青霉、意大利青霉生长所产生的影响。结果表明:采用PDA、SDA、PSA、YPGA等培养基培养2种青霉时,菌生长直径较大( 40 mm)、菌丝生长浓密、生长速度快;替换CA培养基中的蔗糖,当碳源采用葡萄糖、麦芽糖、乳糖、可溶性淀粉时,菌生长效果较好,菌落直径大于20 mm,菌丝密集度表现浓密或较浓密;酵母粉、蛋白胨、甘氨酸等有机氮对2种青霉病原菌菌丝的生长具有良好的促进作用。2种菌株在4～35℃范围内均可生长,最适生长温度为28～30℃;菌株能生长的pH值为2～12,最适生长的pH值为5～7;高浓度(4%以上)的盐水可以杀灭2种青霉菌;75℃是青霉菌的致死温度。     

蓝莓采后病原真菌的分离鉴定及抑制研究

以兔眼蓝莓(品种名为灿烂)为材料,采用组织分离法从自然腐败蓝莓中分离、纯化病原真菌,通过形态学观察及分子生物学技术进行鉴定,并考察肉桂醛、柠檬醛、牛至精油、香芹酚和丁香酚等对4种病原菌的抑制效果。结果表明,分离得到6株病原真菌,分别为1株稻黑孢霉(Nigrospora oryzae)、1株青霉属(Penicillium sp.)、3株枝孢属(Cladosporium sp.)和1株链格孢属(Alternaria sp.)真菌,经致病性试验确定链格孢霉为主要病原菌。牛至精油对4种病原真菌均具有较好的抑制效果,对链格孢霉的半最大效应浓度(EC_(50))为37 mg/L。     

阿魏精油对果蔬采后病原菌的抑制作用

蒸馏法提取阿魏精油并测定其对果蔬采后的致病真菌灰霉菌(Botrytis cinerea)、链格孢菌(Alternaria alternata)、青霉菌(Penicillium citrinum)、炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporiodes)的体外抑菌活性.结果表明,阿魏精油对供试的4种致病真菌有抑制作用.抑制率随阿魏精油浓度的增加而提高,随处理时间延长抑制作用也有所加强,但加强幅度不大.阿魏精油对病原菌48 h EC50从小到大依次为炭疽病菌、青霉菌、灰霉菌、链格孢菌.     

红肉蜜柚内生菌的分离及抑菌活性分析

选取牛肉膏蛋白胨、马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)和高氏1号3种培养基,利用组织块法对红肉蜜柚(Citrus grandis)果实的内生菌进行分离纯化,得到9株菌株,经生物学性状分析,9株菌株均为放线菌,分属于诺卡氏菌属(Norcardia)和链霉菌属(Streptomyces)。采用平皿对峙法测定供试菌株的拮抗活性,有6株表现出不同程度的拮抗作用,占全部分离菌株的66.7%,其中1株对大肠杆菌(Escherichia coli)、4株对金色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、3株对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)具有明显的抑菌效果;在3种柑橘病原菌的抑菌试验中,有7株菌株表现出不同程度的拮抗作用,占全部分离菌株的77.8%,其中7株对指状青霉(Penicillium digitatum Sacc.)、3株对意大利青霉(Penicillium italicum Wehmer)、3株对柑橘链格孢(Alternaria citri Ellis et.Pierce)的抑菌率超过75%。菌株P1、R2对3种柑橘病原菌均有很高的抑菌活性。     

柑橘采后主要病害植物源杀菌剂的筛选及抑菌效果分析

探讨植物源杀菌剂(植物提取物)对柑橘果实绿霉病、青霉病病原菌的抑菌活性,以期实现柑橘贮藏病害的绿色防控。以柑橘意大利青霉(Penicillium italicum)和指状青霉(Penicillium digitatum)为供试真菌,选择具有抗菌抑菌作用的72种药用植物丙酮提取物进行离体生物活性测定。在提取物(生药)质量浓度为1.0 g/mL条件下初筛,得到20种具有较强抑菌活性的植物,其中丁香、肉桂、迷迭香、细辛、山苍子、零陵香、凤仙透骨草、广藿香、博落回等植物提取物处理后抑菌圈直径均达到20 mm以上。丁香、肉桂、迷迭香的抑菌效果较好,对2种病原菌的最低抑菌质量浓度和最低杀菌质量浓度均较低,分别为3.125～6.25 mg/mL、25～50 mg/mL。当3种提取物质量浓度达到3.0 mg/mL时,对2种病原菌孢子形成的抑制率达86.84%～99.60%,对菌丝生长的抑制率也均达到85%以上,平均半数抑制质量浓度(EC_(50))分别为1.86、1.94、2.11 mg/mL。3种提取物以质量浓度2.0 mg/mL处理柑橘果实,处理组果实发病率与无菌水对照组之间分别相差48.31%、41.57%、35.96%,有效地降低了柑橘果实发病率。植物提取物作为一种新型植物源杀菌剂,为柑橘果实高效、绿色、环保贮藏提供了方向。     

椪柑贮运病原菌分离及天然物对其抑制作用*

 以云南省宾川县所产椪柑为试验材料,研究椪柑在贮藏运输中的主要病害及病原真菌,并采用滤纸片扩散法,用多种天然植物提取液对病原菌进行了抑菌试验,目的在于找到对病原菌有抑制作用的天然物质。分离、鉴定出意大利青霉(Penicillium italicum Sacc.)和指状青霉(Penicillium digitatum Sacc.)2种病原真菌,找到了对2种病原真菌有抑制作用的天然植物提取液,并确定了最低抑制浓度(MIC)。为进一步研究柑橘类果品的天然保鲜剂提供了一定的基础资料。     

丁香提取物对枝孢霉菌的抑菌效果及抑菌机理

以壳梭孢菌、青霉菌及枝孢霉菌为靶标菌,检测丁香提取物的抑菌效果,并进一步探究丁香提取物的抑菌机理,结果表明:丁香乙醇提取物对3种真菌的抑制效果较佳,特别是对枝孢霉菌抑菌效果显著,3.125 mg·m L~(-1)丁香乙醇提取物对枝孢霉菌具杀菌作用。与无药物处理的对照组相比,经过1 mg·m L~(-1)的丁香提取物处理的枝孢霉菌表现为:菌丝形态畸形、电导率上升、菌丝可溶性蛋白质含量约为对照组的3倍、菌丝总糖含量下降了87.18%、孢子梗瘦弱纤细,容易倒伏、产孢抑制率为69.31%,推测其抑菌机理是通过破坏枝孢霉菌的细胞膜结构,抑制菌的生长代谢及其繁殖来达到抑菌目的。     

我国不同地区高粱籽粒寄藏真菌种群分析

采用分离培养检验法,对采自我国13个省17市区的274份高粱籽粒寄藏真菌类群进行了分析,结果表明:主要分离获得链格孢菌(Alternaria spp.)、曲霉菌(Aspergillus spp.)、镰孢菌(Fusarium spp.)、青霉菌(Penicillium spp.)、芽枝孢菌(Cladosporiumspp.)、蠕孢菌(Bipolaris spp.)和弯孢霉菌(Curvularia spp.)共7个不同类群真菌。在分离到的真菌中,链格孢菌、曲霉菌和镰孢菌等出现频率较高,分别为33.61%、16.6%和14.98%,高粱籽粒带菌率、带菌种类及分离频率地区间差异明显。     

洋葱贮藏期青霉病病原菌的分离及鉴定

【目的】明确甘肃洋葱贮藏期青霉病青霉菌的种类及其致病性.【方法】采用常规组织分离法对甘肃省5个县区洋葱贮藏期青霉病病样进行病原物的分离、纯化培养,同时采用形态学和rDNA-ITS分子生物学方法进行鉴定.【结果】共分离得到108株青霉菌菌株,分离频率为46.3%,其中青霉P1、P2、P3和P4的分离频率依次为30.5%、27.8%、22.2%和19.5%,P1为优势病原菌;结合形态学和rDNA-ITS分子生物学方法,鉴定出P1、P2、P3和P4分别为皮落青霉(Penicillium crustosum)、波兰青霉(Penicillium polonicum)、鲜绿青霉(Penicillium viridicatum)和光孢青霉(Penicillium glabrum).致病性测定结果表明,青霉菌P1、P2、P3和P4在有伤和无伤的条件下均能引起洋葱青霉病.【结论】皮落青霉(P.crustosum)、波兰青霉(P.polonicum)、鲜绿青霉(P.viridicatum)和光孢青霉(P.glabrum)是洋葱贮藏期青霉病的病原菌.     

植物杀菌剂的筛选

采用牛津杯管碟法用56种植物的丙酮提取物对指状青霉(Penicillium digitatum)和意大利青霉(P.itali-cum)进行抑菌活性测定.通过试验,分别筛选出11和12种对指状青霉和意大利青霉有抑制作用的植物提取液,其中丁香、肉桂、细辛、牡丹、五倍子等5种提取液对指状青霉和意大利青霉都表现出较强的抑制作用,并通过两倍稀释法确定了这5种提取液的最低抑菌浓度(MIC).研究结果为进一步探寻适宜的柑橘天然保鲜剂提供了重要的基础资料.     

意大利苍耳提取物抗植物病原真菌活性研究

[目的]研究意大利苍耳提取物抗植物病原真菌活性,为植物资源的利用及植物源农药的开发提供研究基础。[方法]以意大利苍耳(Xanthium italicum Moretti)全草为原料,经90%乙醇超声辅助提取后,分别用不同溶剂进行萃取得到石油醚相、氯仿相和乙酸乙酯相。采用菌丝生长速率法研究各相对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、茄交链孢(Alternaria solani)、尖孢镰刀菌(Fusarium Oxysporum)、链格孢(Alternaria alternata)等植物病菌的抑菌活性。[结果]3种萃取相对4种植物病原真菌均具有显著抑制且呈浓度依赖性,其中氯仿萃取相对4种植物病原真菌抑制效果最好,当浓度为800μg/mL时抑制率均达50%以上。对灰葡萄、孢链格孢、尖孢镰刀菌和茄交链孢的EC_(50)分别为788.36、566.93、496.48、339.39μg/mL。[结论]意大利苍耳萃取相中,氯仿相对供试真菌抑制作用显著,活性成分主要集中在中低极性部位。该研究为从意大利苍耳次生代谢物中发掘活性先导化合物和植物源农药的创制提供了理论依据。     

柑橘采后青霉病原中寄生病毒的筛选与鉴定

【目的】从采后霉烂柑橘上分离青霉病原菌，并筛选和鉴定病原中寄生的青霉病毒。【方法】以柑橘园腐烂的柑橘为材料，挑取分生孢子在PDA培养基上进行划线分离，根据总基因组电泳图谱筛选具有基因组额外核酸片段的病毒菌株，并使用RT-PCR扩增额外片段测序鉴定相应病毒。【结果】根据菌落形态初步分组，分离到两类菌落特征差异明显的青霉菌(共25株),其中具灰绿色菌落的青霉16株，具暗黄绿色菌落的青霉9株。扩增两类青霉的代表菌株(DY10和DY18)的ITS并测序，鉴定结果显示，DY10和DY18分别为意大利青霉(Penicillium italicum)和指状青霉(P.digitatum)。青霉菌株总基因组电泳筛选发现，DY9、DY11、DY12、DY17菌株中存在约6000 bp的基因组额外片段，推测可能为指状青霉病毒1 (PdV1)同种不同病毒株的基因组。根据PdV1基因组设计特异性引物，RT-PCR扩增出约500 bp的条带，测序序列与PdV1基因组同源序列的一致性高达99.7%,将所分离的病毒鉴定为PdV1同种的不同病毒株。【结论】本研究从腐烂柑橘上分离鉴定意大利青霉16株和指状青霉9株，并从指...     

胡杨内生真菌分离及其抑菌活性研究

从健康胡杨的叶、皮、枝、干、根分离获得182株内生真菌,经形态观察分类鉴定属于4目5科25属。采用两点对峙培养拮抗试验、孢子萌发试验和人工接种试验,对杨树烂皮病菌(Cytospora chrysosperma)、松苗立枯病菌(Fusarium oxysporum)、豆角炭疽菌病菌(Colleotrichumsp.)、杨灰斑病菌(Coryneum populinum)进行抑菌活性测定。结果表明,所获内生真菌菌株对病原真菌菌丝生长和孢子萌发均存在不同程度的抑制作用,其中,青霉属(Penicilliumsp.)和木霉属(Trichodermasp.)真菌的菌株抑菌效果表现最明显。青霉菌和木霉菌可迅速对病原菌菌落包围、覆盖,从而使植物病原菌生长受到抑制。孢子萌发试验中,青霉菌培养3d时的滤液可对病原菌孢子萌发产生抑制作用,表现出一定的抑菌活性。     

8种菌株代谢物对茄链格孢菌菌丝生长及孢子萌发的抑制

为防治由茄链格孢菌(Alternaria solani)引起的番茄早疫病,研究了8株有益微生物的代谢产物对茄链格孢菌菌丝生长及孢子萌发的抑制,并且测定了曲霉、细黄链霉菌对病菌的持续抑菌作用。结果发现5株芽孢杆菌代谢物原液对茄链格孢菌菌丝生长均有一定的抑制作用,茄链格孢菌分生孢子萌发的受抑制率分别为:地衣芽孢杆菌44.87%、胶冻样芽孢杆菌51.97%、枯草芽孢杆菌55.44%。细黄链霉菌对茄链格孢菌具有较强的持续抑制作用,且黑曲霉、米曲霉、细黄链霉菌作用后茄链格孢菌菌丝发生了畸变、原生质浓缩等现象。表明8种微生物代谢物对茄链格孢菌具有抑菌活性,且效果明显。     

葡萄根圈土壤耐4-羟基苯甲酸真菌筛选及其应用效果研究

为了探明葡萄自毒物质(4-羟基苯甲酸,4-HBA)的作用机制,本试验以4-羟基苯甲酸介导下的根际真菌为研究对象,在20株优势真菌中,筛选出5株高效代谢4-HBA的真菌,经ITS序列分析鉴定,结果表明:菌株分别为细极链格孢菌属(Alternaria tenuissima)、青霉菌属(Penicillium sp.)、木霉菌属(Trichoderma harzianum)、小克银汉霉菌属(Cunninghamella elegans)和产黄青霉菌属(Penicillium chrysogenum)。液体培养48h时,5株真菌对不同浓度4-HBA(600,1200,1800,2400μg·m L-1)的平均代谢效率分别为95.17%,86.25%,62.45%,65.10%和37.32%。其中代谢效率最高的为细极链格孢菌属菌株。盆栽试验表明,细极链格孢菌属菌株显著抑制葡萄植株的生长,其处理后葡萄的株高、茎粗及地上鲜重分别较对照降低14.92%,2.76%和16.82%。可见,自毒物质(4-羟基苯甲酸)能够促进葡萄根际土壤有害真菌的产生,进而抑制植株的生长。     

壳寡糖对杏果实采后主要病原菌抑菌作用的研究

[目的]研究壳寡糖对引起杏果实采后病害主要病原真菌抑菌作用的影响因素.[方法]将供试菌种扩展青霉(Penicillium expansum)、胶孢链格孢(Alternaria alternata)和匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)活化培养后接种到含有壳寡糖的PDA培养基上,观察不同分子量及不同浓度的壳寡糖对不同病原菌菌落生长的影响.[结果]壳寡糖对3种供试菌均有较好的抑制作用.不同分子量的壳寡糖抑菌效果不同,分子量5000和10000壳寡糖的抑菌率显著高于分子量3 000的壳寡糖.在供试壳寡糖浓度中,处理效果表现为剂量依赖关系,三种分子量的壳寡糖均以2.0;浓度对三种供试菌的抑菌效果最好.不同病原菌对壳寡糖的敏感性不同,供试壳寡糖对胶孢链格孢(A.alternata)和匍枝根霉(R.stolonifer)的抑制率明显高于扩展青霉(P.expansu).[结论]不同分子量的壳寡糖对病原菌的菌落生长均有较好的抑制作用,抑制作用的大小因壳寡糖分子量、浓度、病原菌的不同而有差异.     

崇明水仙腐烂病病原菌的分离鉴定

鳞茎腐烂是近几年崇明水仙经常发生的一种严重病害.依据柯赫法则,从崇明水仙腐烂鳞茎组织中分离到2株引起水仙鳞茎腐烂的病原真菌HSD1和HSD3,应用形态学鉴定法和真菌rDNA-ITS序列分析对其进行鉴定,结果这2株真菌分别属于链格孢属的烟草赤星菌(A lternaria alternata)和青霉属的疣孢青霉(Penicillium verrucosum.     

黑龙江省水稻褐变穗病病原鉴定及生物学特性研究

水稻褐变穗病是黑龙江省水稻生产中主要穗部病害。利用形态学、分子生物学及致病性测定等方法确定黑龙江省水稻褐变穗病害病原种类。对采自黑龙江省14个市县水稻产区的水稻褐变穗病病样作单孢分离,共获得119个菌株。根据菌落与分生孢子形态特征,归类后获得3类菌株,主要为链格孢属(Alternaria sp.),共112株,其次为镰孢菌属(Fusarium sp.),共5株,再次为青霉菌(Penicillium sp.),共2株。选取不同地区3种具有代表性20个链格孢属(Alternaria sp.)菌株,5个镰孢菌属(Fusarium sp.)菌株,2个青霉菌(Penicillium sp.)菌株作致病力测定,其中20个链格孢属菌株均导致水稻发病,而镰孢菌属和青霉菌属菌株均未致病。对112个链格孢属菌株作形态学鉴定,并测定其代表性菌株ITS序列,确定水稻褐变穗病病原为链格孢(Alternaria alternata(Fr.)Keissl)。经生物学特性研究,该病原菌最适培养基为大米马铃薯煎汁培养基,菌丝生长最适温度为27℃,最适宜pH为6.5,最适光照条件为24h黑暗,病原菌孢子最适萌发温度为30℃,pH为7,光照条件为24h黑暗,最适碳源为果糖和蔗糖,最适氮源为胰蛋白胨和牛肉膏。