两种检测扁桃基因组RAPD扩增产物方法的比较分析

通过2;(w/v)的琼脂糖凝胶和8;(w/v)的聚丙烯酰胺凝胶电泳对扁桃品种基因组DNA的RAPD检测.结果表明:8;(w/v)聚丙烯酰胺凝胶优于2;(w/v)琼脂糖凝胶,主要表现在,8;聚丙烯酰胺凝胶对长度相差100 bp以下的DNA分子的分离较2;的琼脂糖凝胶电泳效果好;且8;聚丙烯酰胺凝胶的分辨范围广,在线性DNA分子(0.1～2.0 kb)范围内也能得到很好的分离效果;用8;的聚丙烯酰胺凝胶分离扁桃品种基因组DNA的RAPD扩增结果,表现出在扁桃品种间DNA水平上差异大,运用此方法提高了扁桃品种的鉴别能力.     

一种新的微卫星PAGE的DNA显带方法

提出了一种新的微卫星聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)显带方法,即微卫星PAGE荧光染料显带法,与琼脂糖凝胶荧光染料显带法和PAGE银染显带法相比,该法具有简单易行、快速高效、分辨率高、背景清晰等特点,是一种成功的DNA显带技术。     

PCR-SSCP检测微卫星基因型方法的研究

非变性丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)在检测片段差异较小的微卫星等位基因时误差较大。针对Native-PAGE的不足,以鸡1号染色体上的7个微卫星位点为例,对PCR-SSCP(单链构陷多态)检测此类等位基因的效果进行了分析。结果表明,对MS202和MS502,通过检测单链DNA,PCR-SSCP能准确分离PAGE无法区分的片段差异较小的等位基因;对MS1404,单链和双链DNA分离效果相同;对MS1805、MS1803、wxt_MS_3,双链DNA得到了很好分离,但单链DNA分离效果不佳。结果表明,对某些微卫星位点,PCR-SSCP能弥补Native-PAGE不足。     

基于两种电泳检测方法的华东野生菰ISSR遗传多样性分析

[目的]筛选更优的ISSR-PCR扩增产物电泳检测方法,分析我国华东地区野生菰种质资源遗传多样性,为建立和完善菰植物种质库及合理开发与利用菰资源提供理论依据.[方法]挑选7条ISSR引物对华东地区9个野生菰居群104份材料基因组DNA进行PCR扩增,其ISSR-PCR产物分别采用2%琼脂糖凝胶电泳和5%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测.[结果]2%琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,华东地区野生菰的多态性位点百分率(PPB)为63.49%、观测等位基因数(Na)为1.6349、有效等位基因数(Ne)为1.3012、Nei's基因多样性指数(He)为0.1871、Shannon's信息指数(I)为0.2908、居群间遗传分化系数(Gst)为0.3922、遗传相似系数(Gs)变化范围在0.8293~0.9775;其聚类分析结果表明,当遗传相似性系数阈值为0.885时,9个野生菰居群被分为两大类,SH(上海)和PYH(鄱阳湖)居群归为一类,其他7个居群归为另一类.5%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,华东地区野生菰的PPB为78.03%、Na为1.7803、Ne为1.2762、He为0.1804、I为0.2914、Gst为0.5086、Gs变化范围在0.7679~0.9837;其聚类分析结果表明,当遗传相似性系数阈值为0.850时,9个居群也被分为两大类,其中PYH居群单独为一类,其他8个居群归为另一类.[结论]我国华东地区野生菰种质资源遗传多样性丰富,居群间和居群内变异显著,基于ISSR分子标记的野生菰遗传多样性采用5%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测可获得更可靠的遗传图谱,而2%琼脂糖凝胶电泳检测更适合早期的ISSR分子标记引物筛选.     

微卫星DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术的探讨

采用PCR一非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、硝酸银染色检测DNA片段。结果表明,该方法检测DNA具有灵敏度高、背景浅、条带清晰等突出特点。聚丙烯酰胺凝胶电泳后采用银染技术分析,方便快捷,易长期保存,且减小了对人体、环境的毒害作用。     

仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系的优化

[目的]优化仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系。[方法]以25份仁用杏和3份食用杏为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术筛选出多态性高、可重复的SSR位点。并比较不同因子对电泳体系的影响,探索仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系。[结果]仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系为：聚丙烯酰胺凝胶的浓度为6%,丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1,1000V下电泳2～3h,0.1%AgNO3染色15min后显影。[结论]该优化体系为仁用杏资源微卫星标记遗传分析奠定了技术基础。     

仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系的优化

[目的]优化仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系。[方法]以25份仁用杏和3份食用杏为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术筛选出多态性高、可重复的SSR位点。并比较不同因子对电泳体系的影响,探索仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系。[结果]仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系为：聚丙烯酰胺凝胶的浓度为6%,丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1,1000V下电泳2～3h,0.1%AgNO3染色15min后显影。[结论]该优化体系为仁用杏资源微卫星标记遗传分析奠定技术基础。     

白香猪内脏器官乳酸脱氢酶同功酶的比较研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对成年白香猪的肺、肝、脾、肾和胰脏组织的乳酸脱氢酶(LDH)进行分离,结果显示:它们均含有5条LDH同功酶谱带。经生物图象处理系统扫描定量得出:LDH1,LDH2,LDH3,LDH4和LDH5各组分在肺脏的百分含量的排列顺序:LDH5>LDH2>LDH1>LDH3>LDH4,M亚基∶H亚基为62.93%∶37.08%;在肝脏中百分含量的排列顺序为:LDH5>LDH2>LDH1>LDH3>LDH4,M亚基∶H亚基为49.52%∶50.48%;在脾脏中百分含量排列依次是:LDH5>LDH2>LDH4>LDH3>LDH1,M亚基∶H亚基为52.41%∶47.59%;在肾脏中百分含量多少的次序是:LDH1>LDH2>LDH4>LDH3>LDH5,M亚基∶H亚基为19.00%∶81.00%;在胰脏中百分含量顺序是:LDH1>LDH2>LDH5>LDH3>LDH4,M亚基∶H亚基为32.86%∶67.14%。以上结果提示:LDH同功酶在不同的内脏组织中各谱带及亚基组成与含量的不同,它们反映了相应组织的中乳酸和丙酮酸间转化代谢过程的差异,由此保证了机体糖代谢中LDH所催化反应的正常协调进行。     

两种小花蝽酯酶同工酶的比较研究

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,检测了南方小花蝽和微小花蝽的酯酶同工酶酶谱。结果表明:两种小花蝽无论成虫还是若虫,其酯酶同工酶酶带数目、活性强弱及泳动率等均有较大差异。     

高粱微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件的优化

以高粱抗、感丝黑穗病3号生理小种部分品种(S95062B、7050B、2381R、LR625;622A、622B、矮4)为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行抗病基因的引物筛选.通过比较各因子对电泳体系的影响,建立了一个高粱微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系:电泳时间为92～105 min;银染温度为27.8～29.0 ℃;显色温度为32℃左右.     

DHPLC与ABI377系统的微卫星检测效果比较

利用猪SCAU-LL资源群,根据猪USDA-MARC2.0连锁图谱,选取4号染色体上微卫星标记SW1678,用变性高效液相色谱(DHPLC)系统和ABI377系统分析了F2代64个个体的微卫星多态性,比较了这2个分析系统在进行微卫星分型中的效率和利弊.2个系统检测到57个样品的基因型相同,有相同的2个样品未检测到产物.另外有3个样品,DHPLC检测出基因型,ABI377未检测到,有2个样品ABI377检测出基因型,而DHPLC未检测到.2个系统检测微卫星多态性的相同率达92.2%,DHPLC未检出率6.3%,ABI377未检出率7.8%,2个系统检测的灵敏度和准确度基本接近,但是DHPLC的检测成本低于ABI377的检测成本.     

有效微卫星标记预测猪部分经济性状杂种优势

为了探明微卫星标汜预测猪经济性状尔种优势的有效性,选用8个与日增重QTL紧密连锁的微卫星引物,检测了4个不同杂交组合猪群的遗传差异．结果表明,有效标记的应用可以显著提高亲本问遗传距离、平均基因杂合度与经济性状杂优率的相关性．微卫星标记的有效性,杂交亲本的遗传背景及杂交方式是影响预测杂种优势效果的重要因素．     

猪的微卫星DNA的克隆与分析

本研究应用多种DNA限制性内切酶切割基因组DNA从而浓缩微卫星DNA的方法克隆测定了8个不同位点的猪的微卫星序列,统计分析结果表明（1）猪的基因组中大于或等于40bp的微卫星序列约占基因组全部微卫星序列的10％,（2）GTG）n和（GAG）n类型的微卫星序列,在猪的基因组中分别约每250－500kb的片段中就有一个。     

微卫星PCR聚丙烯酰胺凝胶银染法影响因素的分析研究

 微卫星PCR结合聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的DNA检测方法。此法分离小于500bP的DNA片段效果很好，分辨率极高，只相差1bp的片段也能分开，且可容纳相对大量的DNA。再结合银染法使该方法得到了广大科研工作着的青睐，本研究通过多方面摸索对该方法进行了总结和改良。     

利用微卫星PCR技术分析山猪的遗传结构*

 选用世界粮农组织（FAO）和国际动物遗传学会（ISAG）联合推荐的23个微卫星位点对山猪群体的遗传多样性进行检测。通过等位基因频率、有效等位基因数、杂合度、多态信息含量的计算以及瓶颈效应分析,判断山猪群体目前遗传结构和濒危状况。结果表明,23个微卫星座位的多态信息含量在0.452~0.847之间。群体平均多态信息含量和平均杂合度分别为0.686和0.731。瓶颈效应分析表明,山猪群体拥有极显著的杂合度过剩位点数,在无限等位基因模型和逐步突变模型下的平均杂合度为0.559和0.672,推断其有效群体大小近几十年在明显下降,从而说明山猪群体已经处于被灭绝的威胁中。上述研究结果对于山猪的保种和开发利用具有重要的指导意义。     

五指山猪3个近交家系内微卫星等位基因的遗传变化

 【目的】探索五指山猪近交3个不同家系F14-F18等位基因的遗传学规律,为大型动物近交系培育提供依据。【方法】利用14对微卫星DNA引物,以五指山小型猪（Wuzhishan Miniature pig,WZSP）F13-F18世代的3个近交家系为研究对象,通过估算基因杂合度（H）、多态信息含量（PIC）和等位基因数（N）等参数,检测近交3个家系微卫星等位基因的纯合度,以及随近交代数的推进每个星座上等位基因的变化规律。【结果】WZSP近交系Ⅰ系F14-F16的14个微卫星座平均每个位点等位基因数为2个、平均杂合度为0.40、多态信息含量为0.26;Ⅱ系F15-F18的平均等位基因数为1.92,平均杂合度分别为0.32,多态信息含量为0.25;Ⅲ系F14-F17的平均等位基因数为2.17,平均杂合度为0.44,平均多态信息含量为0.32。【结论】随近交代数的推进,每个星座上等位基因数越来越少,基因的纯合度越来越高,但WZSP近交系微卫星等位基因的纯合度有一定的限度,与近交鼠有所不同;在近交系3个家系各个世代中有少数几个基因座,如Sw874和Sw936等一直处于高度杂合状态,这可能与WZSP近交家系的种质特异性有关,推测与这些基因座处于同一连锁群的某些功能基因在维持极高近交水平下WZSP的基本生存能力中起着关键作用。3个近交群体间的分化系数在0.07以上,已各自成为独立家系;3个家系的近交程度不完全一致,基因的纯合度亦不同,Ⅱ系最高、14个微卫星座中7个纯合,其次为Ⅰ系和Ⅲ系。     

撒坝猪血液蛋白多态性研究

 采用蛋白电泳技术研究撒坝猪血液蛋白多态性。共分析了撒坝猪33个遗传位点,其中AKP,CAT,ES,G₆PD,PA,PHI,TF等7个位点检测到多态性。多态位点百分比P=0.2121,平均杂合度H=0.1027.结果表明撒坝猪的血液蛋白多态程度较高,反映在蛋白质水平上的遗传多样性较为丰富。     

Correlation of Individual Heterozygosity of Microsatellite Marker Loci with Heterosis of Growth Traits in Pig Populations

To investigate the correlation of individual heterozygosity and heterosis of three traits in crossbred F1 pig populations, the F1 populations were built by random mating Yorkshire x Meishan （YM, n = 82）, and its reciprocal （MY, n =47） and two straightbred populations （Yorkshire = 34, Meishan = 55） were used as control groups. The heterosis of birth weight （BWT）, average daily gain （ADG）, and feed conversion ratio （FCR） were acquired as well. In the research, the significant marker loci for the heterosis of the three traits were observed by one-way ANOVA （P〈0.01） in a total of 39 marker loci on SSC4, SSC6, SSC7, SSC8, and SSC13, and the numbers of the significant marker loci were 12 （BWT）, 18 （ADG）, and 17 （FCR）, respectively, based on which the general heterozygosity （GH） was divided into significant marker loci heterozygosity （SH） and insignificant marker loci heterozygosity （IH）. Furthermore, the trends of alteration in heterosis with the stepwise increase in heterozygosity by 0.05 were explored. This was done by the regression analysis of the three kinds of heterozygosity against heterosis of the three traits. The results showed that, for BWT, the heterosis increased with the increase in GH （r=0.9337, P=0.0021） and SH （r=0.9165, P=0.0102）; for ADG, the heterosis increased with the increase in IH （r=0.7012, P=0.0353） and GH （r=0.7470, P=0.0537, near significant）; for FCR, the heterosis of feed efficiency increased with the increase in IH （r=0.8721, P=0.0022）. The results indicated that the correlation was not always higher or more significant for SH with heterosis than it was for IH or GH with heterosis, and it might be because of the reciprocal cancellation of the positive effect and negative effect of QTL linked to the significant marker loci.     

泡桐叶片RNA提取方法的研究

以豫杂1号泡桐为试验材料,采用Trlzol,改良Trizol Ⅰ,改良Trizol Ⅱ,CTAB和Plant RNAtrip等方法提取其叶片总RNA,并用A260/A280值和琼脂糖凝胶电泳检测RNA的得率、纯度和完整程度.结果表明,不同方法提取的RNA在得率、纯度和完整度方面存在一定的差异.改良Trizol Ⅱ法提取RNA的A260/A280值为1.989,得率为171.0μg·g-1,电泳琼脂糖凝胶上有28,18,5 S rRNA 3条清晰的谱带,是泡桐叶片RNA提取的最佳方法.