白细胞介素-2对犬细小病毒疫苗免疫效果的影响

为研究白细胞介素-2(IL-2)对犬细小病毒疫苗免疫效果的影响,选择40只幼犬,随机分成试验组和对照组,试验组按0.5 ml/头份加入犬用IL-2与犬细小病毒疫苗一起皮下注射,对照组单独使用犬细小病毒疫苗,注射后分别在接种前、接种后7 d和14 d使用金标试纸条检测其抗体效价,并进行组间抗体效价差异的t检验。试验结果表明,接种疫苗前试验组与对照组犬细小病毒平均抗体效价之间差异不显著;接种疫苗后7 d,试验组与对照组犬细小病毒平均抗体效价差异极显著(P<0.01);接种疫苗后14 d,试验组与对照组犬细小病毒平均抗体效价差异极显著(P<0.01)。试验表明:IL-2可明显提高幼犬对犬细小病毒疫苗的抗体应答能力,是一种良好的犬细小病毒疫苗候选佐剂。     

口服PHA复合物对犬细小病毒疫苗免疫效果的影响

为了更好地指导犬细小病毒病的防治,减少犬患细小病毒病的几率,本文通过试验验证了PHA（植物血凝素）复合物是否对犬细小病毒疫苗有增效作用。结果表明,PHA复合物与英特威二联苗联用可提高犬对英特威二联苗的抗体应答能力,可以更好地防治犬细小病毒病。     

IL-2对犬细小病毒疫苗免疫效果的研究

犬细小病毒(Canine Parvovirus,CPV) 是1977 年美国Eugster从患出血性肠炎病犬粪便中新发现的一种小DNA 病毒,可使犬发生严重的肠炎综合征和心肌炎综合征,是对养犬业危害极大的疫病之一.     

国产犬细小病毒弱毒疫苗免疫试验及田间应用效果观察

1986年,解放军兽医大学研究所等单位选用犬科动物细小病毒自然弱毒CR86/06株)为种毒,初步研制出一种细小病毒弱毒疫苗。经实验研究及田间临床初步应用试验,证明本疫苗安全性好,免疫效果确实。1987年7月至1989年11月,我们应用该疫苗在本基地进行了安全性试验,免疫后CPV HI抗体滴度消长规律观察,免疫效果试验,     

白细胞介素-2基因表达质粒对犬细小病毒VP2DNA疫苗在小鼠的免疫增强作用

犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒主要抗原蛋白。研究证实由VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为提高VP2DNA疫苗的免疫原性,本研究在小鼠体内尝试了利用犬白细胞介素2（cIL-2）基因增强VP2DNA疫苗免疫应答的研究。通过RT-PCR方法从犬脾淋巴细胞中分别扩增含终止密码子和不合终止密码子的cIL-2cDNA基因,然后将基因插入到真核表达载体pcDNA3．1中,分别构建成非融合的和与Myc／His融合的clL-2基因真核分泌型表达载体,pcDNA-cIL-2和pcDNA-cIL-2／MH。将pcDNA-oIL-2／MH表达栽体通过磷酸钙方法转染HEK293T细胞进行瞬时表达,以确定构建的表达栽体能否介导cIL-2在真核细胞中进行分泌表达。然后用VP2表达载体（pcDNA-CD5sp-VP2,本室构建）单注射和VP2／IL-2表达载体共注射对小鼠进行免疫（用pcD-NA3．1栽体作为阴性对照）。免疫后通过ELISA方法检测免疫后不同时期小鼠血清VP2的抗体水平,并通过细胞增殖试验检测免疫后小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应,用ELISA方法测定小鼠淋巴细胞γ干扰素的表达水平。试验结果表明,扩增的小鼠cIL-2基因与GenBank的参考序列一致,构建的cIL-2表达载体能够介导重组cIL-2在HEK293T细胞中进行分泌表达。免疫结果显示,利用cIL-2／VP2表达载体共免疫小鼠,免疫后35d血清中VP2的抗体水平达到1：5120,明显高于VP2表达载体单免疫组（P〈0．01）。淋巴细胞增殖试验表明,2组免疫小鼠的淋巴细胞刺激指数均明显高于阴性对照组（P〈0．01）,共免疫组的刺激指数又明显高于单免疫组（P〈0．05）。共免疫小鼠淋巴细胞7干扰素的表达水平明显高于单免疫组和阴性对照组（P〈0．01）。由此可见,cIL-2表达载体可明显提高CPVVP2基因疫苗的免疫应答水平。     

不同种类犬细小病毒疫苗临床应用效果的检测

应用ＥＬＩＳＡ和套式ＰＣＲ技术以及常规的寄生虫检测和体温检查，筛选出６２０头无病状、无内寄生虫、适宜作不同种类细小病毒疫苗试验的健康幼犬。对５种犬细小病毒的疫苗进行试验。证明犬细小病毒抗原抗体复合物疫苗的效果最佳。     

犬细小病毒核酸疫苗制备及免疫试验

以犬细小病毒基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增了全长VP1基因,PCR产物经纯化和NotⅠ/BamHⅠ双酶切后与同样处理的真核表达载体pIRES进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选了真核重组表达质粒pIRESVP1,并进行了序列测定。对6只9月龄犬分别接种不同剂量的pIRESVP1或空载体质粒及生理盐水,8周接种1次,每次接种前采血,测定血清的血凝抑制抗体效价,第2次免疫后即可检测到较高的血清效价。在第3次接种4周后,对全部实验犬进行攻毒,攻毒后第7天及第14天时采血,测定血清的血凝抑制抗体效价。所有接种pIRESVP1疫苗的犬均能抵抗CPV强毒的攻击,而接种空载体质粒和生理盐水的对照犬则全部发病。证明所构建的核酸疫苗(pIRESVP1)能使犬免受犬细小病毒强毒的感染。     

用无针注射器接种犬细小病毒疫苗免疫效果研究

为了研究无针注射器接种犬细小病毒疫苗的免疫效果,试验将15只42～45日龄健康拉布拉多寻回犬和15只金毛寻回猎犬随机分成3组,每组10只(每个品种5只),分别为有针注射1头份组(含犬细小病毒抗原NL-35-D株)、无针注射1头份组和无针注射1/2头份组。有针注射1头份组采用有针注射器接种1头份卫佳伍疫苗,无针注射1头份组和无针注射1/2头份组采用无针注射器分别接种1头份、1/2头份。首免后第14,28天采用同样的方法进行二免和三免。免疫后观察犬的临床反应;分别于首免、二免和三免后第14天采血、分离血清,用犬细小病毒(CPV Ab)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒检测抗体浓度,根据产生的抗体浓度判断免疫效果。结果表明：无针注射1头份和1/2头份组犬没有出现炎症反应和其他不良反应,疼痛明显降低;各组试验犬二免后第14天抗体水平均能达到保护作用;首免、二免和三免后第14天三组比较,无针注射1头份组和无针注射1/2头份组抗体水平均略高于有针注射1头份组,但差异不显著(P>0.05)。说明采用无针注射器接种犬细小病毒疫苗免疫效果确实、安全。     

紫锥菊增强犬瘟热疫苗和犬细小病毒疫苗免疫效果的研究进展

详细阐述了紫锥菊的药理活性、安全药理学、临床应用以及毒理学研究等内容。紫锥菊可作为免疫增强剂,提高犬瘟热疫苗和犬细小病毒疫苗的免疫效果,本文为其研究与开发提供一定的参考。     

犬细小病毒灭活疫苗的制备及免疫效果观察

以新分离的两种不同亚型CPV为毒种制备浓缩灭活苗和未浓缩灭活苗,通过与商品化弱毒苗的比较评价灭活疫苗的免疫效果。将CPV-S5（New CPV-2a）与CPV-1401（New CPV-2b）毒株扩大培养后浓缩灭活,制备了两种浓缩与两种未浓缩水溶剂灭活疫苗;将灭活疫苗和商品化二联弱毒苗分别接种5周龄HI阴性幼犬,分别在免疫后7 d、14 d、21 d、28 d测定HI抗体效价;首免36 d后取其中4只犬二免,其他犬进行攻毒。结果显示,各免疫组在第7天HI均高于1∶80,浓缩组显著高于未浓缩组,初步表明CPV灭活苗效果与抗原的浓度有直接的关系;灭活疫苗组与商品化弱毒苗组均差异显著;免疫组的犬均存活,而HI阴性犬死亡,经检测死亡犬CPV为阳性,表明制备的CPV灭活苗产生的特异性免疫应答均能抵抗强毒的攻击,对犬起到良好的免疫保护;二免后其HI抗体效价极显著提高,有效抗体能维持5个月,更有效的对免疫犬群进行保护。     

犬细小病毒基因疫苗对幼貉的免疫试验

应用已构建的pcDCPV和pIRCPVIL2重组质粒配制成疫苗,对幼貉进行免疫,并对其免疫反应进行观察。应用夹心ELISA方法检测外周血中特异性的抗细小病毒血清抗体免疫球蛋白(IgG)的水平,MTT比色法检测外周血中淋巴细胞的转化率,对基因疫苗的免疫保护进行观察。结果表明,用pcDCPV和pIRCPVIL2重组质粒免疫后的幼貉对细小病毒的攻击具有一定的保护性,为pcDCPV和pIRCPVIL2重组质粒的应用奠定了基础。     

犬细小病毒免疫复合物解离试验的研究

以犬细小病毒（ＣＰＶ）做为示范性抗原,以抗犬细小病毒血清（Ａｎｔｉ－ＣＰＶ）做为示范性抗体,制成抗原抗体免疫复合物。探索测定了使犬细小病毒复合物中抗原抗体解离的物理振荡、电解质浓度、缓冲液ｐＨ值及作用温度的解离条件。     

犬细小病毒特异性免疫球蛋白的临床应用效果观察

旨在观察犬细小病毒特异性免疫球蛋白治疗犬细小病毒病的临床应用效果,本文收集了中国农业大学动物医院自2016年1月—2019年11月接治的犬细小病毒病患犬的病历资料,筛选出病历资料完整的并使用了犬细小病毒单抗或犬细小病毒特异性免疫球蛋白治疗的患犬病例进行跟踪以及回访。对收集的病例数据进行了总治愈率、各初始抗体水平的治愈率、各月龄段的治愈率和治愈病例的病程分析。结果显示,犬细小病毒特异性免疫球蛋白和犬细小病毒单克隆抗体在总治愈率、相同初始抗体水平治愈率、相同月龄段治愈率均无显著差异（P>0.05）。但使用特异性免疫球蛋白的病例痊愈时间显著低于使用单克隆抗体的病例（P=0.02<0.05）。综上表明,犬细小病毒特异性免疫球蛋白的临床应用效果良好,可为犬细小病毒病的治疗提供新的药物选择。     

白细胞介素2和白细胞介素18对鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗免疫作用的影响

为研究白细胞介素2和白细胞介素18对鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗免疫作用的影响,将84只14日龄无特定病原(SPF)鸡随机分为7组,每组12只;分别设为NDV-IBV二联活疫苗组(对照组)、CHIL-2蛋白+NDV-IBV二联活疫苗免疫增强组、pVAX1-CHIL-2+NDV-IBV二联活疫苗免疫增强组、CHIL...     

白细胞介素-2对犬瘟热疫苗免疫效果的影响

白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)是由激活的T淋巴细胞产生的具有广泛生物活性的细胞因子,能激活T淋巴细胞,增强CTL的细胞毒活性,刺激细胞分泌IFN-γ等细胞因子,促进机体的细胞免疫反应;同时也能激活B淋巴细胞,参与机体的体液免疫反应.     

白细胞介素-12对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用

犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒重要的结构蛋白和抗原蛋白。利用VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为进一步提高VP2DNA疫苗的免疫应答水平,本研究在小鼠体内尝试了利用白细胞介素12（IL-12）基因表达载体提高VP2DNA疫苗的免疫应答水平。首先采用RT-PCR方法从小鼠脾淋巴细胞中分别扩增IL-12大亚基（P40）和小亚基（P35）cDNA基因;然后在真核表达载体pcDNA3.1A上通过引入内部核糖体进入位点（IRES）序列,分别将P40基因和P35基因插入到IRES序列的上下游,构建成IL-12（P40和P35双亚基）基因表达载体,pcDNA-P40-IRES-P35。将上述表达载体与本室构建的VP2表达载体通过磷酸钙方法转染HEK 293T细胞进行瞬时表达,以确定构建的表达载体能否介导相应基因在真核细胞中进行分泌表达。然后用VP2载体单免疫和VP2载体和IL-12载体共免疫方法对小鼠进行免疫（用pcDNA3.1A作为对照）。免疫后在特定时间通过ELISA方法检测小鼠血清抗VP2蛋白的抗体水平,并通过淋巴细胞增殖实验检测免疫后35d小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应。结果表明,扩增的小鼠IL-12P40和P35亚基基因与GenBank的参考序列基本一致。Western-blot检测结果表明,重组IL-12和VP2均能够在HEK293T细胞中进行分泌性表达。ELISA检测结果表明利用IL-2载体与VP2载体共免疫小鼠,其血清中抗VP2的抗体水平明显高于VP2载体单免疫组（P〈0.01）,抗体水平在第35天高达1：5120。淋巴细胞增殖试验结果表明,免疫小鼠的淋巴细胞刺激指数均明显高于对照组（P〈0.01）,VP2载体与IL2载体共免疫组的刺激指数明显高于VP2载体单免疫组（P〈0.05）。由此可见,在小鼠体内,IL-12基因表达载体可明显提高CPV VP2基因疫苗的免疫应答水平。     

免疫金电镜技术检测犬细小病毒免疫球蛋白

本文应用免疫金电镜技术检测犬细小病毒免疫球蛋白（Ｉｇ）。检测结果证明驴抗犬细小病毒所产生的Ｉｇ对犬细小病毒具有较强的特异性反应。因此认为,第四军医大学动物保健品研制中心所制备的免疫球蛋白对犬细小病毒性肠炎和心肌炎具有良好的治疗和预防作用。