绵羊ICSI胚胎培养液中发情绵羊血清浓度优化研究

在胚胎培养液中添加适量的发情绵羊血清(ESS)有利于提高胞浆内单精子注射(ICSI)胚胎后期的发育潜力.为了探讨在ICSI胚胎培养液中添加不同浓度的ESS对绵羊ICSI胚胎桑椹胚率的影响及其最优的ESS浓度,本试验采用ICSI技术得到ICSI胚胎,然后在ICSI胚胎培养液中添加不同浓度的ESS(A组0％、B组5％、C组...     

牛体外受精胚胎无血清培养的研究

以TCM199为基础液,对常规IVM/IVF牛早期胚胎进行了无血清（1mg/ml,PVA,聚乙烯醇）和有血清（20%FCS）培养的对比实验。通过在无血清培养液中加入9种添加物,初步筛选出了在5%CO#-2、95%空气、39℃、饱和湿度培养环境下的牛体外受精胚胎无血清培养体系为：TCM199+EDTA0.1mmol/L+I5μg/ml+T5μg/ml+S5ng/ml+EGF10ng/ml+牛磺酸7mmol/L+亚牛磺酸5mmol/L+PVA1mg/ml+青霉素100iu/ml+链霉素100mg/ml。无血清培养与有血清培养囊胚率（7.1%对14.3%）、扩展囊胚率（4.3%对7.1%）,均无显著差异(P > 0.05)。实验结果还表明,外源激素（雌激素和孕酮）对胚胎发育无促进作用;有血清组与无血清组胚胎的各发育阶段（桑椹胚、囊胚、扩展囊胚）细胞核数量无明显差异（P > 0.05）。     

牛早期胚胎在不同培养液中体外发育比较

以卵丘/颗粒细胞单层作为共培养饲养层，比较了体外受精胚，卵母细胞孤雌激活胚和体细胞核移植胚在几种培养液中体外发育能力，以期筛选较适合体细胞克隆胚胎的体外培养系统。将体外受精卵分别置5种培养液中培养，囊胚发育率分别为20.43％、24.12％、32.10％、20.29％和29.03％，在CM1和CM2中囊胚的孵化率分别为8.64％和20％，结果表明，在添加10％的FBS时培养效果较好。卵母细胞孤雌激活胚在CM2-CM5中囊胚发育率分别是25.09％、29.84％和29.93％。核移植胚胎在CM3和CM5培养液中囊胚发育率为13.04％和9.26％。表明在共培养条件下CM3和CM5可以用于核移植胚胎的体外培养。     

水牛胚胎体外生产研究综述

近年来采用其它家畜上的程序来进行水牛体外胚胎生产(invitroproduction,IVP)引起了越来越多的关注。水牛胚胎体外生产已获得了较高的卵母细胞成熟率、受精率和卵裂率,但囊胚发育率和体外胚的移植成功率仍较低,水牛IVP胚胎体外生产效率比黄牛低得多。在IVP技术应用于水牛生产育种之前,还有一些问题必须解决。笔者对水牛胚胎体外生产的不同技术,包括未成熟卵母细胞的体外培养成熟和受精以及胚胎体外培养卵裂发育至囊胚等进行综述。还讨论了胚胎体外生产存在的问题及可能的解决方案。     

猪体外成熟,受精卵的体外培养研究

用自己改良的发育培养基使３．９％￣２０．１％体外成熟体外受精卵在体外发育过了４－细胞阻滞期，到达８￣１６－细胞期，个别发育到桑椹期；培养中还观察到葡萄糖对猪胚胎的体外发育没有抑制作用，说明葡萄糖不是猪胚胎体外培养中出现阻滞的原因，在培养基中添加ｐＦＦ可促进猪胚胎体外发育，使发育至８￣１６－细胞期的胚胎率从３．９％，提高到１０２．２％。     

牛胚胎体外培养体系的优化

将体外受精后的牛卵母细胞随机分组进行培养,比较了胎牛血清(FBS)和发情后7 d牛血清(E 7BS)、不同培养液(CR 1+3 m g/mL BSA、SOF+3 m g/mL BSA和SOF+0.1 m g/mL PVA)、共培养体系和不同培养液体积(0.1,0.5和2.0 mL)对胚胎发育的影响,优化了牛胚胎体外培养体系,并对该体系的稳定性进行了检验。结果表明,优化后的牛胚胎培养体系为:前48 h用CR 1+3 m g/mL BSA培养液,48 h后用CR 1+体积分数10%E 7BS培养液培养120 h,培养液体积为0.5 mL,并且采用共培养,受精后颗粒细胞保留48 h。用该培养体系培养的牛胚胎发育良好,平均囊胚率为44.9%,表明该优化培养体系较稳定。     

不同犊牛血清配制PBS培养液培养小白鼠胚胎的效果

不同犊牛血清配制ＰＢＳ培养液培养小白鼠胚胎的效果王文英，马世援，仲跻峰，宋杰，刘云波（山东省农业科学院畜牧兽医研究所济南２５０１００）（山东省医学科学院实验动物中心）在体外培养条件下，犊牛血清对维持早期胚胎的生活力是非常重要的。因此在胚胎移植实践中，...     

人类饲养层及无血清培养体系培养人类胚胎生殖细胞研究

使用人类胚胎皮肤成纤维细胞(hESF)作饲养层,以血清替代物及一些细胞因子作无血清培养基,培养人类胚胎生殖(hEG)细胞。结果显示,在该培养体系下,人类胚胎生殖细胞能够存活、增殖,并表现出干细胞特有的形态学特征,具有很高的碱性磷酸酶(AP)活性,在体外能够保持未分化状态50 d左右。接种hEG细胞后,该体系能够比以前的人类胚胎生殖细胞培养体系形成更多的集落,并且这些集落AP活性维持更久。结果为人类胚胎生殖细胞的基础研究和临床应用提供了一种更为安全的培养方法。     

家畜胚胎体外生产技术

家畜胚胎体外生产技术是胚胎工程技术的重要内容之一。本文对家畜胚胎体外生产的相关主要技术环节,包括卵母细胞的体外成熟技术、体外受精技术及早期胚胎的体外培养技术等进行了综述,同时对该技术的发展前景进行了展望。     

柑桔合子胚早期离体培养获得植株

通过柑桔胚胎发育观察表明,授粉后50天左右,胚囊内仅有一个合子胚,未见珠心胚侵入胚囊,为单独分离合子胚培养的最好时期。取这一发育期的幼果,分离合子胚(或将胚囊预培养后分离合子胚),接种于 White 基本培养基附加腺嘌呤(Ad)20毫克/升、水解乳蛋白(LH)400毫克/升、椰乳(CM)10%和蔗糖10%,在光照条件下发育成双子叶胚。转入 MT 基本培养基附加玉米素(Ze)0.25毫克/升、赤霉素(GA_3)5～10毫克/升,蔗糖浓度降至2%,便发育成苗。     

小麦未熟胚离体培养的研究——愈伤组织发生及器官建成

对小麦胚离体培养过程中愈伤组织发生及器官的形态建成进行了解剖学观察。结果表明,胚龄对愈伤组织发生的起始部位有明显影响。胚的各个部位对离体培养反应的敏感程度随胚龄的增长盾片形成愈伤组织的能力而减弱,3周龄至成熟胚的盾片不能产生愈伤组织,只起分泌α-淀粉酶、转化、吸收和运转养分的作用。同时还观察到输导系统分化完善之前存在传递细胞。不定根及不定芽的分化和形成,既存在器官发生途径,也存在胚状体途径。根、芽原基形成的先后顺序并不固定。     

家兔早期胚胎体外培养和移植研究

用ＦＳＨ，ＰＭＳＧ，ＨＣＧ和ＩＣＩ－８０９９６对２０只家兔进行超数排卵，平均每只排卵１９．１枚，回收胚胎１３．５枚。超排卵数和卵子回收数ＦＳＨ分别为２６．３枚和２１．１５枚，ＰＭＳＧ为２２枚和１３．５。将正常的２５枚１细胞，７枚２细胞和３２枚４细胞期胚胎在ＴＣＭ－１９９培养液，５％ＣＯ２和 ３８．５℃环境中培养６０－７ ０ｈ，６３．１７％的胚胎可发育至囊胚移植至５只体兔后，产出仔兔１３只。     

嫣红蔓离体繁殖技术研究

嫣红蔓带芽嫩茎及茎尖的最适初代培养基是1／2MS BA1．0mg／L NAA0．05mg／L,完全的MS配方易导致玻璃化;在继代培养时,交替采用增殖培养基1／2MS BA0．3mg／L NAA0—0．01mg／L和增高培养基1／2MS BA0．1-0．2mg／L,这样便能保证既有较高的增殖率,繁殖的芽苗又比较长;嫣红蔓芽苗的最佳生根培养基是1／2MS IBA0．01ms／L。     

金花茶及其远缘杂种末成熟胚离体培养的初步研究

金花茶授粉(包括杂交授粉)后4个月以上(子叶大于1mm)的未成熟胚(包括生理落果)在修改的MS(HCl—B_11mg/l、烟酸1mg/l)附加NAA0.01、ZT_1、IBA0.5、谷氨酰胺20、丝氨酸2、LH500、琼脂0.76～0.8％、蔗糖6—8％,pH=5.8的培养基上,能发育成幼株。不带子叶的未成熟胚亦能成长,但生长较慢。未成熟胚在离体培养过程中,子叶增长很慢,增大甚少。     

小鼠早期胚胎体外培养的实验研究

本试验采用国产化学试药和哈尔滨地区的天然水,制备了 Brinster 化学合成培养液。把160枚通过超数排卵获得的2-细胞期小鼠胚胎放在添加适量牛血清白蛋白或胎牛血清的 Brinster 化学合成培养液内,并在适当湿度、5%CO_2和95%空气的气相环境、37℃温度条件下培养。58小时后,大约67%4小鼠2-细胞期胚胎发育到桑椹胚阶段;大约32%的小鼠桑椹胚发育到囊胚期阶段。试验证明,用国产化学药品和哈尔滨地区水配制的培养液可以对早期小鼠胚胎进行体外培养研究。     

水稻不同初级三体幼穗离体培养培养力的研究

以中籼３０３７及其１２种初级三体的幼穗为外植体,研究了不同初级三体之间幼穗培养力的差异。结果表明：（１）以愈伤组织途径培养成苗,不同三体之间幼穗愈伤组织诱导率、愈伤组织分化成苗率及幼穗培养力均存在差异,幼穗愈伤组织诱导率与愈伤组织分化成苗率无显著相关;（２）以幼穗直接出芽,一次成苗途径培养,不同三体的培养力亦存在差异;（３）同一三体２种成苗途径的培养力之间并无显著的相关性。     

影响小麦幼穗离体培养几个重要因素的研究

对小麦幼穗的21个基因型、3个发育时期、6种培养基在幼穗离体培养中的反应进行比较和筛选。建立了繁殖力和分化力均较强并保持长达9个月的体细胞无性系。     

不同MS和B 9浓度对马铃薯脱毒试管苗生长的研究

选用米拉、凉薯97、金冠3个品种和MS液体培养基（全量、半量）、B9含量（5mg/L,15mg/L,25mg/L）进行3因素完全随机试验,调查各处理后脱毒试管苗的苗重、株高、茎节、根重和根数。其结果显示：1/2MS培养基和B9浓度为5mg/L时对脱毒试管苗的苗重和株高伸长有促进作用,但在试管苗茎节数的增加上因品种不同选用的MS培养基成分含量及B9浓度有差异。     

培养液容积,深度和更替时间对水牛牛巴贝斯虫体外培养的影响

采用改进的微气静相培养技术，了培养液容积、深度、更替时间对体外培养牛巴贝斯虫的影响。结果表明：增减液层深度对牛巴贝斯虫的生长繁殖影响明显，理想的液层深度是６．２ｍｍ；在保持单位面积上培养液容量不变的情况下，培养容积大小对培养无影响；隔２４ｈ更换上清液，能使牛巴贝斯虫稳定地生长，延长更换增减液的时间能显著地抑制牛巴虫的生长繁殖。试验还在此基础上清液利用较大容积（１６．０ｍｌ）对１株牛巴贝斯虫进行了长